Fenólicos

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Análise de Fenólicos totais – Fibra de Soja
Protocolo de Extração (extração máxima de fenólicos e saponinas)
Procedimentos: 
Pesar a amostra (2g) no tubo Falcon (duplicata);
Adicionar o solvente orgânico (10 mL) – Água:Etanol:Acetato de Etila (40:40:20);
Utilizar o Vortex por 2 minutos na velocidade máxima;
Centrifugar por 10 minutos na velocidade de 3000 rpm;
Recolher o sobrenadante em balão de 25 mL;
Repetir os passos acima 2x;
Avolumar.
Análise de Fenólicos Totais:
Solução Padrão de Ácido Gálico (10000 µL/mL): 
Balão de 10 mL, pesar 0,01 g de ácido gálico, adicionar 1 mL de etanol e avolumar com água Milli-Q.
Solução de Carbonato de Sódio (Na2CO3) 20%:
Em um Erlemeyer pesar 20g de Na2CO3, adicionar 80 mL de água Milli-Q e levar à fervura em placa de aquecimento, após fervura adicionar alguns critais de Na2CO3 e deixar repousar por 24h. Filtrar com papel filtro para o balão de 100 mL.
Preparo da curva padrão (avolumar com água Milli-Q):
P1 (5µg/L): pipetar 50 µL em balão de 10 mL;
P2 (10µg/L): pipetar 100 µL em balão de 10 mL;
P3 (15µg/L): pipetar 150 µL em balão de 10 mL;
P4 (25µg/L): pipetar 250 µL em balão de 10 mL;
P5 (50µg/L): pipetar 500 µL em balão de 10 mL;
P6 (65µg/L): pipetar 650 µL em balão de 10 mL.
Reação:
Pipetar 200µL das soluções padrões (ou amostras) nas diferentes concentrações em tubo de ensaio, adicionar 1400 µL de água Milli-Q, após adicionar 100µL do reagente de Folin, agitar no vortex, esperar 30 segundos e não mais que 8 minutos para adiocionar o Na2CO3 (300 µL) e agitar novamente. Levar ao banho-maria em temperatura de 40ºC por 30 minutos. O branco do padrão deve ser preparado simultaneamente como descrito acima. A leitura da absorbância é feita a 765nm em leitor de microplacas (Vitor3).