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HISTÓRIA, ESTRUTURA E PROPRIEDADES FUNCIONAIS DOS ÁCIDOS NUCLÉICOS Paulo Preté Durante cerca de vinte anos, organizou sua anotações, elaborando possíveis explicações para os mecanismos de adaptação dos seres vivos a seus ambientes sem ter a mínima noção de como a transmissão da informação genética seria passada para os descendentes. Uma resposta que o matemático Mendel tinha, mas não sabia explicar em termos químicos. Charles Darwin nasceu na Inglaterra (1809-1882) e foi o primeiro a propor explicações adequadas para a evolução biológica. Darwin, neto de um naturalista, adepto de idéias transformistas, nunca foi um estudante brilhante, não sendo diferente durante os dois anos que cursou medicina na Escócia. Voltou para a Inglaterra, ingressou em um seminário da igreja anglicana e tornou-se, nessa época, biólogo autodidata. IMPORTÂNCIA DE DARWIN NA HISTÓRIA DO DNA O monge Johann Gregor Mendel (1822-1884) é chamado, com mérito, o pai da genética, por lançar as bases dessa ciência na década de 1860 . Realizou trabalhos com ervilha (Pisum sativum 2x=14 ) no mosteiro de Brunn, na Áustria. Sua primeira monografia foi publicada em 1866 mas, devido ao caráter quantitativo e estatístico de seu trabalho, além das influências do trabalho de Darwin (1859) sobre a origem das espécies, pouca atenção foi dada àqueles relatos. Em 1900 o trabalho de Mendel foi redescoberto por outros pesquisadores. Cada um deles obtiveram, a partir de estudos independentes, evidências a favor dos princípios de Mendel, citando-o em suas publicações. Em 1905, o inglês William Bateson, batizou a ciência iniciada por Mendel que começava a nascer de Genética, que explicava matematicamente a transmissão das características. IMPORTÂNCIA DE MENDEL NA HISTÓRIA DO DNA A primeira evidencia de que o DNA constituía o material genético sugerido pelos estudos matemáticos de Mendel, e responsável pela evolução das espécies defendida por Darwin, surgiu em 1946, com Oswald Avery e seus colaboradores. Não é surpreendente, portanto, que vários cientistas estivessem interessados em DNA no início da década de 50. O DNA CONSTITUI O MATERIAL GENÉTICO O Próprio Watson conta em seu livro A Dupla Hélice como conseguiu obter de maneira escusa informações de dados cristalográficos de concorrentes Rosalind Franklin, química e cristalógrafa do King´s College de Londres. Watson ainda diz se sua descoberta foi a maior da biologia desde a teoria da evolução de Darwin. No final da década de 1980, Watson liderou o inicio do projeto de sequenciamento do genoma humano. Em novembro de 1951, Watson compareceu a um seminário de Rosalind Franklin no King´s College, que comentava sobre suas fotos de difração de raios X em fibras de DNA, o que sugeriu para Watson, mesmo sem conhecer bolufas de como preparar amostras de DNA e de como funciona um gerador de raios X, sem falar do conhecimentos parcos da química do material genético. R. FRANKLIN E A ESTRUTURA DO DNA Crick insistia para Watson que eles não tinham que se preocupar muito com os fatos e sim com a estrutura em si, baseando-se em dados de difração de raios X, utilizando uma mistura de intuição e dedução e empregando modelos de átomos introduzidos por Pauling, chegaram ao momento Eureca. No dia da concepção da estrutura, Crick entrou num pub, no campus da Universidade de Cambridge, gritando: Descobrimos o segredo da vida. WATSON E CRICK NA CODIFICAÇÃO DA ESTRUTURA DO DNA FLUXO DA INFORMAÇÃO GENÉTICA PROJETO GENOMA HUMANO (PGH) Este consórcio publicou um esboço inicial na revista científica Nature em fevereiro de 2001 com cobertura de cerca de 90 por cento do genoma. Em 14 de abril de 2003, um comunicado de imprensa conjunto anunciou que o projecto fora concluído com sucesso (99% do genoma humano com uma precisão de 99,99%) Aproximadamente 25.000 genes foram sequenciados. Aproximadamentr 50% dos genes sequenciados codificam proteínas com função conhecida. - Liderado por James D. Watson, foi fundado em 1990 nos EUA. - 5000 cientistas envolvidos - 250 laboratórios de pesquisa - Tempo estimado para conclusão (15 anos) O QUE É O MATERIAL GENÉTICO? cromossomo eucariótico locus gênico cromossomo conjunto cromossômico cromossomo núcleo célula DNA DIFERENÇAS ENTRE OS ÁCIDOS NUCLÉICOS DNA, compreende o reservatório da informação genética. Estruturalmente são de fita dupla com milhares de bases até 108.. Sua estrutura secundária compreende uma dupla hélice, estabilizadas por pontes H-H entre as bases complementares. Os grupos fosfatos estão expostos no corrimão da dupla hélice e as bases (apolares) se encontram no interior. Uma molécula apresenta de 6x106 a 3mm de comprimento quando desnovelada Na célula, o DNA está sempre associado a proteínas básica (histonas) formando as nucleoproteínas. RNA: São estruturalmente de fita simples de tamanho relativamente pequeno (75 a 84 bases até 2x105). Apresenta a base nitrogenada Uracila no lugar de timina correspondente no DNA. Funcionalmente, constitui a base da organela ribossoma; tem papel de carregar informação do DNA para o ribossoma no citossol e atua como um adaptador e transportador do aminoácido. Em alguns Vírus (retrovírus) o RNA substitui o DNA ESTRUTURA DOS NUCLEOTÍDEOS E AS BASES Os nucleotídeos são constituídos por fosfato, açúcar (Pentose - Desoxirribose) e base nitrogenada (Adenina, Guanina, Timina, Citosina e Uracila. Fosfato BASE NITROGENADA Pentose GRUPO FOSFATO MONO, DI, TRI AÇÚCAR (Desoxirribose) ESTRUTURA GERAL DOS DESOXIRRIBONUCLEOTÍDEOS DESOXIRRIBONUCLEOSÍDEO desoxiadenosina desoxiguanosina desoxicitidina desoxitimidina Adenina Guanina Citosina Timina DESOXIRRIBONUCLEOTÍDEO desoxiadenilato desoxiguanilato desoxicitidilato desoxitimidilato BASE Ausência de Oxigênio PAREAMENTO DE BASES NO DNA A fita continua A fita continua A fita continua O número de interações de hidrogênio depende das bases Envolvidas Veja oxigênio RIBONUCLEOTÍDEO GRUPO FOSFATO RIBOSE BASE Adenilato Guanilato Tidilato Uridilato ESTRUTURA GERAL DO ÁCIDO RIBONUCLÉICO RNA LIGAÇÃO FOSFODIÉSTER INICIADOR LIGAÇÃO FOSFODIÉSTER DESOXIRRIBONUCLEOTÍDEOS RIBONUCLEOTÍDEOS AMINOÁCIDOS Expressão Gênica fita molde transcrição Tradução RNAm códon Proteína (cadeia de aminoácidos) DNA metionina prolina leucina alanina arginina FLUXO DA INFORMAÇÃO GENÉTICA FUNDAMENTOS DA BIOSSÍNTESE DOS ÁCIDOS NUCLÉICOS Paulo Preté Monge transcrevendo manuscrito, ca 1470. cultura derivada de glioma de rato Bacillus sp parede membrana plasmática DNA (área Nuclear) CÉLULAS SÃO UNIDADES CAPAZES DE GERAR CÓPIAS DE SI MESMAS Células simples como bactérias ou complexas como células de mamífero são capazes de gerar cópias de si mesmas transferindo seu material genético aos seus descendentes 1 – a célula se elonga e o DNA é replicado 2 – a parede e a membrana começam a se dividir 3 – forma-se uma nova parede entre as duas células 4 – as células se separam ??? FLUXO DA INFORMAÇÃO GENÉTICA ??? - O QUE É INFORMAÇÃO GENÉTICA ??? - QUAL A FUNÇÃO DESTE TIPO DE INFORMAÇÃO ??? - ONDE SE LOCALIZA ??? - COMO A INFORMAÇÃO GENÉTICA É INTERPRETADA ??? - COMO É O FLUXO E QUAL A SUA IMPORTÂNCIA ??? - QUAL A IMPORTÂNCIA DAS PROTEÍNAS ??? RNA PROTEÍNAS? DNA ESTRUTURA DO GENES NOS EUCARIOTOS Cromossomo Mitótico Fibra de Cromatina Cromátide Nucleossomas Histomas DNA PRINCIPAIS COMPONENTES ENVOLVIDOS NA REPLICAÇÃO Proteína ligante de DNA DNA Pol Helicase Primase DNA Pol Proteínas necessárias na separação das fitas: Proteína ligante do DNA: reconhece uma região do DNA rica em A T que é separada com gasto de ATP; Helicase(DnaB): Liga-se à fita simples, requerendo ATP; Proteínas SSB: desestabiliza a hélice por ligar-se cooperativamente, protegendo o DNA de fita simples da ação de enzimas nucleases. PROPRIEDADES E CLASSIFICAÇÃO DOS RNAs RNAr (80%) RNAt (15%) ESTRUTURA DO RNA Moléculas poliméricas de mononucleotídeos unidos por ligações fosfodiéster, menor que o DNA, contem ribose em vez de desoxiribose e URACILA em vez de TIMINA. CLASSIFICAÇÃO DO RNA RNAr, RNAt e RNAm. Eles diferem por: tamanho, função e modificações estruturais especiais. No entanto, os 3 participam da síntese PROTÉICA. RNAm (5%) Transporta a informação genética do DNA ao citossol onde é usado como molde para a síntese de proteínas RNA MENSAGEIRO TRADUÇÃO Pergunta Como a seqüência de bases do rna é convertida em aminoácidos nas proteínas ? Aminoácido Anticódon Códon RNAm Ribossomo Subunidade menor Subunidade maior aminoacil t-RNA PRINCIPAIS COMPONENTES ENVOLVIDOS NA TRADUÇÃO O CÓDIGO GENÉTICO MOSTRA O AMINOÁCIDO ADICIONADO PARA CADA CÓDON (SEQÜÊNCIA DE NUCLEOTÍDEOS) DO RNAm Degeneração do código genético segunda base Número de Códons: Primeira base TRANSCRIÇÃO REVERSA NO VÍRUS HIV VIRUS HIV Enzima : Transcriptase reversa (TR) Retrovírus Infecção em aves Degrada a fita de RNA do híbrido RNA-DNA O RNA dá origem ao DNA Bacteriófagos de E.coli Replicação do RNA na célula hospedeira Molde: RNA
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