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Técnicas de semeadura Inoculação é a transferência de um determinado número de microrganismos para um meio de cultura a fim de que estes se desenvolvam e permitam a sua identificação. A inoculação em diferentes meios envolve várias técnicas de semeadura. As técnicas de semeadura são o método pelo qual se transfere inóculos de um meio de cultura ou material a ser analisado para um outro meio de cultura. Para garantir que apenas o microrganismo desejado seja semeado, são utilizadas as técnicas assépticas (procedimentos que devem ser adotados visando a não contaminação de materiais, meios e culturas, para obtenção de culturas puras). Cuidados de assepsia ● Em tubo: ● Em placa Semeaduras em meios sólidos em placas de Petri Spread-plate ou distensão:Transferir 0,1 ml da cultura para o meio sólido na placa e espalhar uniformemente com a própria ponta da pipeta, ou alça bacteriológica / swab / alça Drigalsky. Esta técnica é muito utilizada na realização de antibiogramas. Estria simples: transferir, com auxílio de alça bacteriológica, uma quantidade de cultura para meio sólido em placa e estriar sobre o meio. A estria pode ser realizada em movimento de zig- zag (estria sinuosa) ou como uma linha reta (estria reta). Esgotamento em estrias ou estrias múltiplas: transferir, com auxílio de alça bacteriológica, uma quantidade de cultura para meio sólido em placa e estriar sobre o meio. A placa é dividida em 4 quadrantes e a inoculação pode ser feita de 2 tipos: • 3 estrias: estriar em metade da placa, com movimentos de zig-zag. Quando atingir a metade, girar a placa 90° e estriar até a metade (1/4 da placa), girar mais 90° e estriar o meio restante. • 4 estrias: estriar até 2/3 da metade da placa, girar 90°, estriar 2/3 do próximo quadrante (1/4 da placa), girar 90°, estriar mais 2/3 do próximo quadrante (1/4 da placa), girar 90° e estriar o restante do meio. Semeadura em profundidade ou “Pour Plate” – depois de preparadas as diluições, estas são inoculadas em quantidades de 0,1 ou 1,0 ml em placas de Petri estéreis. Após colocar o material (amostra em estudo) na placa, agrega-se de 10 a 15 ml do meio de cultura fundido e resfriado a temperatura de 45ºC, agitando-se em movimentos rotativos. As placas assim preparadas devem ser incubadas a temperatura e condições recomendadas, devendo ser colocadas em posição invertida na estufa. Após incubação realizar a contagem, utilizando contador de colônias. Semeaduras em meios sólidos em tubos Estria sinuosa: semear com alça ou agulha bacteriológica, em zig-zag, partindo da base para a extremidade do bizel (superfície inclinada do meio). Objetivo: obtenção de intensa massa de microorganismos. Estria Reta: semear com agulha bacteriológica, fazendo uma linha reta, com cuidado de não ferir o Agar, partindo da base para a extremidade do bizel (superfície inclinada do meio). Objetivo: obtenção de pequena massa de microorganismos. Picada Central: semear com agulha bacteriológica, no centro do ágar. Dependendo da finalidade, o inóculo deve penetrar até 2/3 do tubo ou até o fundo deste. Objetivo: é utilizado para verificar fermentação em algumas técnicas. Picada em Profundidade: semear com agulha bacteriológica, no centro do ágar. Dependendo da finalidade, o inóculo deve penetrar até 2/3 do tubo ou até o fundo deste. Objetivo: é utilizado para verificar fermentação e motilidade em algumas técnicas. Semeaduras em meios líquidos Difusão: Com auxílio alça bacteriológica, retirar algumas colônias da placa (meio sólido ) ou da cultura (de outro meio ou líquido) sendo introduzida no meio líquido, com agitação da alça, para maior difusão dos microorganismos (da alça para o meio e homogeneização no meio). Pode-se inclinar o tubo a 30° e esfregar o inóculo na parede do mesmo, quando o tubo retornar à posição original o inóculo se difundirá no meio. Objetivo: é um repique genérico para crescimento bacteriano em meio líquido.
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