Relatório 2 Biotec Parcial

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UNIVERSIDADE DO ESTADO DO RIO DE JANEIRO
CENTRO DE TECNOLOGIA E CIÊNCIAS
INSTITUTO DE QUÍMICA
 
Departamento de Tecnologia de Processos Bioquímicos
“Dosagem de glicídios redutores (GR) - 
Método de Nelson”
Biotecnologia Experimental - Turma 01
Professora: Gizele Cardoso
Componentes:
Carlos Evangelista
Hudson Santos 
Karen Oliveira
Verônica Luiza
Rio, 22 de setembro de 2017.
RESUMO
Nesse experimento utilizamos o Método de Somogyi-Nelson para a dosagem de glicídios redutores. Os glicídeos redutores aquecidos em meio alcalino, transformam-se em enodióis que reduzem o íon cúprico presente a cuproso. O óxido cuproso assim formado reduz a reação arsênio-molibídico a óxido de molibdênio de coloração azul cuja intensidade de cor é proporcional a quantidade de açúcares redutores existentes na amostra. O teor de açúcares redutores foi calculado por espectrofotometria a 540nm, utilizando-se uma curva padrão construída a partir de uma solução de glicose (180mg/100mL).
 
RESULTADOS
 
Fig. 1 (antes do aquecimento) Fig. 2 (após o aquecimento)
 Fig. 3 (após a diluição)
Reagente de NELSON A.
	Fórmula
	Preparo → 250 mL
	Na2CO3 anidro 25 g/L
	Pesar 6,25g de Na2CO3 (carbonato de sódio), 6,25g de tartarato de potássio, 5,0g de Na2SO4 (sulfato de sódio)
	Tartarato de potássio* 25g/L
	Dissolva e complete o volume de (250 mL)
	NaHCO3 20 g/L
	Filtrar se necessário..
	Na2SO4 200 g/L
	(8,5) Tartarato de sódio e potássio.
* ou Tartarato de sódio e potássio 34g
Reagente de NELSON B.
	Fórmula
	Preparo → 50 mL
	CuSO4.5H2O 150 g/L
(em água destilada acidificada com H2SO4 . 20 gotas/L )
	Pesar 7,5g de sulfato de cobre pentahidratada CuSO4.5H2O
	 
	Dissolver em 50mL de água destilada adicionando 2 gotas de com H2SO4 (ácido sulfúrico) concentrado. 
Reagente de NELSON C.
	Fórmula (Aproximada)
	Preparo → 250 mL
	Molibdato de amônio 50 g/L
	Pesar 12,5g de molibdato de amônio dissolvendo-o a seguir em 225 mL de água destilada.
	H2SO4 conc 42 mL/L
	Adicionar 10,5 mL de H2SO4 conc.
	NaHAsO4.7H2O 6 g/L
	Pesar 1,5 g de arseniato de sódio e dissolver em 12,5 mL de água destilada.
	 
	 4) Misturar o arseniato diluído com o molibdato. 
Cálculo da concentração de glicose nas amostras P1 P2, P3,P4 e P5:
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Preparo do P1:
0,2 mL de solução 0,18 g/L
CiVi=CfVf
0,18g/L x 0,2mL= Cf x 25mL
Cf = 0,0144 g/ L
 
Preparo do P2:
0,4 mL de solução 0,18 g/L
CiVi=CfVf
0,18g/L x 0,4mL = Cf x 25mL
Cf = 0,00288 g/ L
 
Preparo do P3:
0,6 mL de solução 0,18 g/L
CiVi=CfVf
0,18g/L x 0,6mL = Cf x 25mL
Cf = 0,00432 g/ L
 
Preparo do P4:
0,8 mL de solução 0,18 g/L
CiVi=CfVf
0,18 g/L x 0,8 mL = Cf x 25mL
Cf = 0,00576 g/ L
 
Preparo do P5:
1,0 mL de solução 0,18 g/L
CiVi=CfVf
0,18 g/L x 1,0 mL = Cf x 25mL
Cf = 0,00720 g/ L�
Segue a tabela com os dados de absorbância obtidos para cada padrão e para a amostra analisada.
	Padrão / Amostra
	Concentração inicial (g.L-1)
	Absorbância
	Branco
	0
	0,000
	P1
	0,00144
	0,085
	P2
	0,00288
	0,179
	P3
	0,00432
	0,355
	P4
	0,00576
	0,382
	P5
	0,00720
	0,475
	Amostra
	0,003468
	0,237
Com esses dados foi feita a curva de calibração para o aparelho, utilizando as colunas de Concentração em g/L no eixo das ordenadas e Absorbância no eixo das abcissas. A curva obtida está indicada abaixo:
Ao traçar o gráfico obtivemos a seguinte equação da reta: y= 68,924 x + 0,0001, com R² = 0,9741. A partir desta é possível encontrarmos a concentração de glicose na amostra desconhecida já sabemos sua absorbância.
Cálculo da concentração da amostra desconhecida em g/L
Dados: Absorbância = 0,237 = y
Equação da reta: y= 68,924 x + 0,0001
 
Substituindo na equação da reta, temos:
0,237 = 68,924 x + 0,0001
0,237 – 0,0001 = 68,924x
x= 0,237
 68,924
x = 0,003468 g/L
Cálculo do coeficiente de absortividade molar:
Como a substância utilizada em todos os padrões foi a mesma, espera-se que os valores de ε (absortividade) também sejam próximos. Pela Lei de Lambert-Beer temos que:
A = ε x L x c
onde A = Absorvância medida no aparelho; ε = absortividade específica da substância (L/(g.cm)); c = concentração da substância (g/L); d = distância do caminho ótico, no caso, largura da cubeta (cm). Como d = 1,0 cm para todos os padrões. Substituindo os dados do P5, temos:
Dados: Concentração de glicose g/L = 0,00720
 	Massa molar da glicose = 180g
Cálculo da concentração de glicose no P5 em mol/L
1 mol de glicose -------------180g de glicose
 n mol de glicose--------------0,00720 g
n mol de glicose no P5 = 4x10-5mol/L
Substituindo na equação da Lei de Lambert-Beer A = ε x L x c, temos que:
0,475 = ε x 1,0cm x (4x10-5mol/L)
ε = 1,1875 x 104 L.mol-1.cm-1
 CONCLUSÕES
Pode-se concluir que a análise espectrofotométrica é um bom método para realizar análise de concentração de glicídios em amostras. A partir da construção cuidadosa de uma curva de calibração é possível calcular a concentração de uma amostra desconhecida e possível também calcular sua absortividade molar.
Observamos também que os dados obtidos experimentalmente estavam de acordo com o que havia sido estudado na parte teórica de que o valor de absorbância medida é diretamente proporcional à concentração da substância analisada. Essa relação da absorbância e da concentração que é denominada Lei de Lambert-Beer, que já foi estudada.
Além disso, os objetivos da prática foram atendidos, sendo um bom treinamento para o uso do espectrofotômetro para possíveis práticas seguintes, além de ser um bom começo para técnicas de análise quantitativa para substâncias bioquímicas, tais como: uso do espectrofotômetro, construção de curvas de calibração e tratamento dos dados. 
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4. BIBLIOGRAFIA
Apostila de Biotecnologia Experimental;
HARRIS, Daniel E. Análise Química Quantitativa. Rio de Janeiro, LTC Editora, 6ª ed., 2005.
Notas de aula.