Expressão antígenos virais

Prévia do material em texto

EXPRESSÃO DE ANTÍGENOS VIRAIS
Professor Christian Reis
Proteínas recombinantes estão nos testes 
rápidos
O QUE É UM PROTEÍNA RECOMBINANTE?
- É uma Proteína foi produzida em outro
organismo diferente do original a partir de
uma molécula de DNA recombinante.
- Ex.: gene viral expresso em bactérias
PLASMÍDEO – vetor bacterianos
• Plasmídeos são moléculas de DNA circular,
extracromossômico.
• São utilizados na clonagem gênica
POR QUE O NOME CLONAGEM GÊNICA?
• Produção de cópias idênticas de uma molécula 
de DNA.
O QUE É NECESSÁRIO PARA FAZER UMA 
MOLÉCULA DE DNA RECOMBINANTE?
1) VETOR PLASMIDIAL
2) ENZIMAS DE RESTRIÇÃO E LIGAÇÃO
3) INSERTO DE DNA
O que é necessário para clonagem gênica?
4- Ligase
1- Vetor
2-Inserto 
(fragmento) 
de DNA
3- Enzimas 
de Restrição
Vetor de expressão
1- ori 
2- Marcador de seleção (antibiótico)
3- Sítio múltiplo de clonagem (MCS-
Multiple cloning sites).
4- Expressão
PCR
SEMEIO EM MEIO SÓLIDO
Extração de DNA 
plasmidial
Digestão com 
enzimas restrição
CONFIRMAÇÃO CLONAGEM
Crescimento clones 
em meio liquído + 
antibiótico
Sequenciamento de DNA
Indução de 
Proteínas – Uso IPTG
EXPRESSÃO DE PROTEÍNAS
Crescimento clones 
em meio liquído + 
antibiótico
Purification methods
Proteínas purificadas a partir de cauda 
histidinas
Ni-Nitriloacetic acid 
(NTA) Agarose –
Purificação His
80 kDA
20 kDA
15 kDA
I CL W1 W2 W3 W4 E1 E2 E3P B