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34 4.2 Determinação de Antocianinas Totais A determinação de antocianinas totais foi realizada segundo o método descrito por Lees e Francis (1972), com algumas adaptações. Para esta quantificação, em béqueres envoltos em papel alumínio, as amostras (fruto, polpa, granola, suco natural e suco com limão) foram homogeneizadas com solução extratora a base de etanol acidificado com ácido clorídrico e descansaram por uma hora a temperatura de refrigeração, ou seja, aproximadamente 4°C. Após esse período as amostras foram filtradas com auxílio de papel de filtro e os resíduos lavados exaustivamente com a solução extratora até a remoção completa dos pigmentos. Os filtrados foram coletados em balões volumétricos de 100 ml, aferidos com a solução extratora, deixados em repouso no escuro por 2h a temperatura de refrigeração e a absorbância foi medida a 535nm, em espectrofotômetro (modelo Spectrum SP-1105) do Laboratório de Análise de solos e Nutrição de Plantas, usando etanol para zerar o equipamento. A quantificação de antocianina foi feita por meio da equação descrita abaixo e o resultado expresso em equivalente da antocianina principal, cianidina-3-glucosídeo. ( ) Onde: AT são as antocianinas totais expressas em mg da antocianina predominante em 100g de amostra; Abs535 = é a absorbância do extrato filtrado lida a 535nm; PM é o peso molecular da cianidina-3-glucosídeo (449,2 g/mol); FD é o fator de diluição dado pela razão entre o volume final da solução após a adição do tampão e pelo volume da alíquota da amostra; é o coeficiente de extinção molar da cianidina-3- glucosídeo em solução etanólica acidificada à 535nm, cujo valor é 26900L/cm.mg e 100 é utilizado para expressar o valor por 100 gramas de amostra. 4.3 Delineamento estatístico Para a efetivação deste projeto, foram realizados ao todo 42 tratamentos para o estudo da quantificação de antocianinas no fruto, polpa e produto processado (suco e
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