Avaliação da integridade FUNCIONAL da membrana

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UNIVERSIDADE FEDERAL DO OESTE BAHIA 
CENTRO MULTIDISCIPLINAR CAMPUS DE BARRA 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
ISABEL FERREIRA BONFIM 
THAILAN SILVA MARTINS 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
RELATÓRIO DE PRÁTICA 02 
“AVALIAÇÃO DA INTEGRIDADE FUNCIONAL DA 
MEMBRANA DAS CÉLULAS ESPERMÁTICAS DE UM 
EQUINO” 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Barra 
2018 
 
ISABEL FERREIRA BONFIM 
THAILAN SILVA MARTINS 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
RELATÓRIO DE PRÁTICA 02 
“Avaliação da integridade funcional da membrana das células espermáticas de um 
equino” 
 
 
 
 
 
 
Relatório apresentado como requisito de avaliação parcial no 
componente curricular de Biofísica e Fisiologia Veterinária I, 
semestre 2018.1, ministrado pela Prof.ª Alexandra Soares 
Rodrigues, no curso de Medicina Veterinária da Universidade 
Federal do Oeste da Bahia-UFOB. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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2018 
1. INTRODUÇÃO 
 
 
Na área da reprodução animal os processos de preservação de sêmen são práticas 
corriqueiras. No entanto, é sabido que a submissão desse material a tais técnicas, principalmente 
se mal realizadas, causam sérios danos as células como lesões estruturais e funcionais em suas 
membranas. Erros cometidos durante a conservação, manejo e coleta são fatores nocivos as 
células, ademais, distúrbios que levam a desequilíbrios na temperatura corporal dos animais 
também são elementos desfavoráveis a viabilidade espermática. 
Neste contexto, diversas práticas de analise foram desenvolvidas com o intuito de 
avaliar com maior precisão a condição das amostras de sêmen, tais testes baseiam-se na 
avaliação das características de motilidade, vigor, concentração e patologias espermáticas 
(VIDIGAL, 2008). Além destes, existem testes complementares que visam investigar a 
integridade funcional e estrutural das membranas plasmáticas dos espermatozoides, pois estás 
tem função primordial no processo de sobrevivência dos mesmos no trato genital feminino e no 
processo de fecundação, entre as práticas, está o teste Hiposmótico. O mecanismo deste teste 
baseia-se no processo de osmose. 
É denominado osmose o processo de movimento da água através das membranas 
celulares. Está movimentação se dá de forma passiva, o que irá determiná-la é a diferença de 
pressão osmótica entre os dois lados da membrana da célula, que será definida pela quantidade 
de moléculas presentes na solução (KOEPPEN & STANTON, 2009). Se o meio extracelular 
possuir a mesma concentração de substâncias dissolvidas que o interior da célula, este meio é 
chamado de isotônico. Se este meio torna-se hipotônico, ou seja, menos concentrado que o 
fluido celular, a água tenderá a entrar na célula, enchendo-a até provavelmente rompê-la. Em 
um meio hipertônico, em que a concentração de água é maior no espaço intracelular, a mesma 
tende a sair da célula, tornando-a mirrada e crenada. 
No processo de choque osmótico, a amostra de sêmen é adicionada a uma solução 
hipotônica, geralmente a chamada água deionizada a 0 mOsml/L. É sabido que os 
espermatozoides apresentam, em média, uma osmolaridade de 300 mOsml/L. Sendo essas 
células submetidas a um meio hipotônico, ocorrerá um influxo de água através da membrana, 
tal ação gera uma desnaturação das proteínas espermáticas ocasionando o dobramento do 
flagelo/cauda, isto é, quando tal membrana encontra-se integra funcionalmente. Isso significa 
dizer, que quando o espermatozoide encontra-se inviável, não responderá positivamente ao teste 
e sua cauda não apresentará dobramento, pois sua membrana não estará realizando o processo 
de permeabilidade seletiva. 
2. OBJETIVO 
 
Está pratica teve como objetivo avaliar a atividade bioquímica da membrana 
espermática do sêmen de um equino. 
 
3. METODOLOGIA 
 
Num primeiro momento confeccionou-se um esfregaço com o sêmen de equino para 
avaliação da morfologia das células, tal conduta foi tomada a nível de controle. Para isto foram 
pipetados 10 microlitros (µL) do sêmen de equino previamente colhido e mantido em 
refrigeração com posterior aquecimento (37 °C), corado através do corante supravital Eosina-
citrato. A amostra foi submetida ao microscópio ótico de luz no aumento de 40x, foram 
contados 100 espermatozoides e desses foram avaliados o percentual de dobramento de cauda. 
Procedeu-se a realização do Teste Hiposmótico (HO), a metodologia utilizada foi a do 
Choque Osmótico (HOST). Para isso, foram utilizados 10μL do sêmen de equino adicionados 
em 100μL de água deionizada a 0 mOsml/L. Está solução foi mantida a 37 °C por cinco 
minutos. Posteriormente, foram adicionados 10μL de uma solução de formol salina tamponada 
para fixação da amostra, da qual uma alíquota foi submetida ao microscópio de contraste de 
fase em aumento de 100X. Efetuou-se a contagem de 100 espermatozoides e desses foram 
aferidos aqueles que apresentavam dobramento. 
 
4. RESULTADOS E DISCUSSÃO 
 
Como resultado do teste de controle verificou-se que, dos 100 espermatozoides 
contabilizados, 8 apresentaram dobramento de cauda. 
No segundo teste, o Hiposmótico (HOST), no qual também contabilizou-se 100 
gametas, 10 espermatozoides apresentaram dobramento de flagelo. 
Assim, para mensurar a quantidade de gametas com resposta positiva ao teste efetuou-
se a subtração do número de espermatozoides com cauda dobrada encontrado no teste 
Hiposmótico (10) pelo número encontrado no teste de controle (8), uma vez que os dobramentos 
já existentes no controle não são considerados no teste HOST. 
Ao fim da subtração (10-8) obteve-se a quantidade de 2 (2%) espermatozoides com 
resposta positiva, ou seja, cujas suas membranas realizaram o processo de permeabilidade 
seletiva. 
5. CONCLUSÃO 
 
Conclui-se então, com base no elevado percentual de espermatozoides com resposta 
negativa (98%), que a amostra não apresentou taxa de aceitação, uma vez que esta taxa exige 
um valor mínimo de 60% de resposta positiva, resposta essa que no material analisado foi de 
apenas 2%. 
Supõe-se que os resultados indesejados estejam relacionados com o mal 
condicionamento do sêmen, que foi submetido à refrigeração de maneira irregular. 
 
6. REFERÊNCIAS 
 
ARRUDA, R. L. et al. Técnicas para avaliação laboratorial da integridade estrutural e 
funcional do sêmen congelado de touros. Revista Brasileira de Reprodução Animal, Belo 
Horizonte, v.34, n.3, p.168-184, jul./set. 2010. Disponível em: <www.cbra.org.br>. Acesso 
em: 16 jun. 2018 
 
KOEPPEN, B. M.; STANTON, B. A. (EE.). Berne & Levy: Fisiologia. Tradução de Adriana 
Pitella Sudré et. al. 6. ed. Rio de Janeiro: Elsevier, 2009. 
 
VIDIGAL, K. F. Integridade e funcionalidade da membrana plasmática, acrossomo e 
mitocôndrias espermáticas em caprinos segundo a conformação escrotal. 2008. 77 f. 
Dissertação (Mestrado em Ciência Animal) – Centro de Ciências Agrárias, Universidade 
Federal do Piauí, Piauí, 2008. Disponível em: <http://leg.ufpi.br/s/ciencianimal 
/DM_KFV.pdf>. Acesso em: 16 jun 2018.