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Biociências Questionário Biociências (3ªAP) 1)Descreva detalhadamente as vias extrínsecas e intrínsecas da apoptose: Via Extrínseca: Acontece por meio de estímulos externos. Exemplos: Fas ligante (linfócito T quando reconhece uma célula estranha) Fator de necrose tumoral: (TNF) vai induzir a morte da célula. Esses ligantes vão se ligar as células em receptores que vão induzir a ativação da Caspase 8, que quando ativada, funciona como Caspase iniciadora (Iniciador Caspase 8), iniciando após isso a Caspase 3, que é efetora e ativando a DNAse. A DNAse vai fragmentar a cromatina. Via intrínseca: Ocorre um dano no DNA ativando a p53 que gera uma informação que vai chegar na mitocôndria, ocorrendo um desequilíbrio do bax e bck2, onde os poros da mitocôndria vão ser abertos. O Citocromo C será liberado, se ligando a Apaf1, e desencadeando as caspases (forma um complexo) ativando a Caspase 9, que irá ativar a Caspase 3. Após isso, ativando a DNAse e ocorrendo a fragmentação da cromatina 2) Comente sobre a importância e a participação da proteína p53 no ciclo celular A p53 é uma das principais proteínas que atuam no ciclo celular, agindo no ponto de checagem G1 anteriormente a fase S de replicação do DNA. Ela é um fator de transcrição que tem como função detectar um dano na integridade do DNA, como mutações. Ela se ativa quando reconhece esse problema no DNA e pode interromper o ciclo e reparar o DNA ou induzir essa célula à apoptose. Ela funciona como fator de transcrição quando se liga a região reguladora do gene p21 ou p16 e faz transcrição desses genes. O RNAm desses genes é transcrito e depois traduzido para sintetize das proteínas p21 ou p16, que são as proteínas que executam a interrupção do ciclo. Essas proteínas ( p21 e p16) inativam o complexo SPF, formado pela ciclina G1 e a quinase CDK-2, que não vai mais iniciar a replicação do DNA A p53 é conhecida como um gene supressor de tumor e sua baixa concentração ou algum problema na sua fisiologia é responsável por diminuir a eficiência dos mecanismos de detecção do DNA ocasionando, assim, neoplasias. Mutações nos Proto-oncogenes, como o EGF e FGF, que são fatores mitogênicos, os transformam em oncogenes, ou seja, uma superprodução de EGF e FGF que ocasiona mitose descontrolada e cancêr. 3) Descreva as características dos ribossomos e explique o seu papel na síntese de proteínas. Os ribossomos são formados por duas subunidades, cada uma é formada por proteínas associadas às moléculas de rRNA, ou seja, ribonucleoproteínas. Os ribossomos de organismos eucariotos possuem um coeficiente de sedimentação igual a 80 unidades de Svedberg (80 S) e é formado por duas subunidades que possuem coeficientes de sedimentação iguais a 40 S e 60S, observem que os valores dos coeficientes de sedimentação não são aditivos. Nos eucariotos a subunidade menor 40 S consiste em uma molécula de 18 S rRNA e 33 proteínas enquanto que a subunidade maior 60 S consiste em três tipos de rRNA com coeficientes de sedimentação iguais a 5 S, 5,8 S e 28 S e 50 proteínas.Primeiramente, o ribossomo se liga ao mRNA próximo ao códon de iniciação (AUG) pela extremidade 5’ da molécula. Na síntese proteica, a subunidade menor possui um sítio específico que proporciona sua ligação com o mRNA. Depois chega a subunidade maior, com três sítios de ligação para o tRNA: sítio E (responsável pela saída), sítio P(peptidil) que é o catalisador dos peptídeos e o sítio A (aminoacil) que é responsável pelo reconhecimento de RNAt. O tRNA iniciador que traz o aminoácido metionina se liga diretamente ao sítio P. Essa ligação é catalizada pela eIF-2 com o gasto de 1GTP. Com a chegada do segundo tRNA com o próximo aminoácido, a subunidade pequena se desloca (translocação) e gera a ligação peptídica, o aminoácido se desgruda do tRNA, o sitio A é liberado e quem tava no E saí. 4) Durante a síntese de proteínas, os RNAt transportam de forma específica os aminoácidos até os ribossomos. Explique como ocorre a ligação dos aminoácidos com o seu respectivo RNAt. Para a ligação acontecer é necessária uma enzima, que é específica para cada aminoácido (nome genérico: RNAt aminoacil sintetase). Existem 20 variações dessa enzima, que se ligará com um dos 20 aminoácidos. Essa enzima reconhece o anticódon e leva o aminoácido correto ao RNAt. Esse é um processo que gasta energia. Etapa 1 - O ATP será quebrado e liberará 2 fosfatos, sobrando o AMP, a enzima RNAt aminoacil sintetase ligará o AMP à extremidade hidroxila do aminoácido; Etapa 2 - A enzima conduz o aminoácido para o braço receptor do RNAt e a RNAt aminoacil sintetase catalisa essa ligação, durante essa catalise remove-se o AMP e a liagação aminoácido-RNAt acontece. Existe um mecanismo que evita ligações incorretas entre o aminoácido e o RNAt, muito importante pois a ligação é específica: quando a ligação entre o aminoácido e o RNAt é incorreta, essa ligação ocorre lentamente, mas desliga-se rapidamente. Se a ligação é correta, ela ocorre rapidamente e a dissociação é lenta. 5)Quais são os eventos que ocorrem durante o processamento do mRNA? Durante o processamento do RNAm ocorrem três processos: capping, poliadenilacao e splicing. O capping consiste na adição de uma guanina metilada para a formação de um capuz ligação 5'--> 5', protegendo tal extremidade da ação de enzimas. Esse processo é realizado com a 1- clivagem de um fosfato da região 5' do RNA; 2- adição de um GMP a região 5' do RNA- forma-se a ligação trifosfato; 3- adição de um grupo metil a extremidade 5' (7-guanine-metyltransferase); 4- adição de outro grupo metil a extremidade 5' (2-o-metyltransferase). A poliadenilacao consiste na formação de uma cauda poliadenilada na extremidade 3' com o fito de proteger o RNA da ação de exonucleases e é importante para a terminação da transcrição. Esse processo ocorre com a 1- clivagem do RNA por um complexo de quatro fatores (complexo de poliadenilacao) composto por CPSF, CstF, CPI e CPII; 2- adição de adenina pela enzima poli A polimerase; 3- proteínas de ligação à poli A reunem-se sobre a cauda a fim de evitar uma dimerização. O splicing consiste na remoção de introns por ribosimas, na qual GU- assinala o começo do intron e AG- assinalao fim do intron, assim há produção de laço e o corte, finalizando o processamento do RNAm. 6) Os ribossomos apresentam 4 sítios de ligação que são utilizados durante a tradução de mRNA. Quais são? Quais as suas funções? Os ribossomos são compostos por duas subunidades, uma maior e outra menor. Há também quatro sítios que são utilizados durante a tradução sendo que apenas 1 é destinado ao RNAm. Os outros 3 sítios são destinados para o RNAt são eles: sítio E (responsável pela saída), sítio P(peptidil) que é o catalisador dos peptídeos e o sítio A (aminoacil) que é responsável pelo reconhecimento de RNAt. Quando um aminoácido é levado pelo RNAt, no caso metionina, ele irá se ligar diretamente no sítio “P” com auxilio da IF-2. Porém, o curso normal da tradução seria iniciado no sítio A (aminoacil). 7) A replicação do DNA envolve a participação de 9 enzimas. Quais são? Quais suas funções? A replicação do DNA, processo que ocorre na fase S do ciclo celular, no qual o DNA é duplicado para que as células-filhas tenham o mesmo material genético da célula-mãe, se faz por meio da ação de 9 enzimas. Cada enzima tem uma função diferente no processo. Essas enzimas são: DNA polimerase delta, DNA polimerase alfa, DNA polimerase beta, primase, topoisomerase I e II, helicase, telomerase, DNA ligase e nuclease reparadora. Abaixo temos a função de cada enzima: →DNA polimerase delta: Faz a síntese de DNA complementar da cadeia contínua. →DNA polimerase alfa: Sintetiza a cadeia retardada da bolha de replicação. →DNA polimerase beta: Sintetiza o fragmento de DNA anteriormente ocupado pelo primer. →Primase: É uma enzima ribonucleoproteina que faz a sintese do primer. →Topoisomerase I e II: Enzimas que fazem o desnovelamento da cadeia de DNA, além disso elas retiram as histonas fazendo com que a tensão da molecula de DNA seja diminuida. →Helicase: Enzima que faz a abertura do DNA após a formação da bolha. →Telomerase: Enzima que tem como função adicionar sequências específicas e repetitivas de DNA à extremidade 3' dos cromossomos, onde se encontra o telômero. →DNA ligase: Liga os replicons, que são segmentos de DNA replicados a partir de um origem de replicação. →Nuclease reparadora: Faz a retirada do primer da cadeira replicada. 8) Descreva o papel das ciclinas e das quinases dependentes de ciclina na regulação do ciclo celular: As ciclinas têm a função de ativar as quinases( que fazem fosforilação). Na fase S, existe uma grande quantidade de ciclina G1, que irá ativar a quinase CDK-2, que irá formar o SPF, responsável por desencadear a replicação do DNA. Na fase G2, a ciclina G1 é degradada e desfaz o SPF e inicia a produção da ciclina M, posteriormente, na fase M, a ciclina M ativa a quinase CDC-2 e irá formar o MPF, responsável por controlar a divisão mecânica dos cromossomos. 9)Descreva os eventos que ocorrem durante a morte celular pelas vias necrótica e apoptótica Necrose: 1) A membrana é a estrutura afetada inicialmente, o seu funcionamento é desregulado, pois perde o controle da bomba de sódio e potássio; 2) A cromatina é condensada, devido a alterações no ph; 3) Há um aumento no volume das organelas, o que evidencia o edema; 4) As mitocôndrias perdem as suas cristas; 5) A célula vai se desintegrando, o seu conteúdo intracelular vai sendo liberado e o processo inflamatório vai ser desencadeado. Apoptose: é um processo de morte celular ativo, em que a membrana fica intacta 1) Há o desmonte do citoesqueleto e a desorganização dos filamentos do citoesqueleto e da lâmina nuclear (isso possibilita que a célula se desconecte das células vizinhas); 2) Condensação da cromatina; 3) Fragmentação da cromatina das organelas (é o 1º indício de morte celular por apoptose); 4) As mitocôndrias perdem as suas cristas; 5) Fragmentação do núcleo; 6) Presença de corpos apoptóticos; 7) A fosfatidilserina (fosfolipídio) passa para a face externa da membrana, o que constitui um sinal para que os macrófagos realizem a fagocitose. 10) Descreva e caracterize de forma ilustrativa as etapas envolvidas no processo de apoptose: O citoesqueleto se desmonta devido a ruptura de seus filamentos, desta forma a célula fica esférica e perde o contato com as células vizinhas. A célula encolhe porque o citosol e as organelas se condensam. Os filamentos laminares se dissociam, resultando em desintegração nucler. A cromatina se compacta e as moléculas de DNA se seccionam por ação de endonucleases, que fragmenta o núcleo. Na superfície da célula surgem numerosas protusões, quase todas com fragmentos nucleares em seu interior. As protusões depreendem-se e se convertem em corpos apoptóticos; as organelas são bem conservadas. As fosfatidilserinas das membranas que envolvem os corpos apoptóticos se transladam para a monocamada externa. Atraídos pelas fosfatidilserinas, numerosos macrófagos chegam ao lugar da apoptose e fagocitam os corpos apoptóticos.
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