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FISIOLOGIA DO CRESCIMENTO MICROBIANO Microbiologia Geral Profa: Kettelin Arbos Por que é importante estudar o crescimento microbiano? Identificar e isolar os agentes causais das doenças infecciosas Desenvolvimento de agentes antimicrobianos Preservação dos alimentos Genética, Biotecnologia 2 AB: Fase de latência (FASE LAG) adaptação do m.o ao ambiente; não há crescimento e nem divisão celular; a bactéria esta produzindo enzimas apropriadas para o ambiente. BC: Aceleração Positiva O crescimento se intensifica continuamente CD: Fase de Crescimento Logarítmico ou Exponencial (FASE LOG) O crescimento é mais rápido e constante pois a população está duplicando 24 8.... DE: Fase de aceleração negativa ou Desaceleração Algumas bactérias não estão mais se multiplicando pois começa a ocorrer a redução de alguns nutrientes e acumulo de metabólitos tóxicos. EF: Fase Estacionária O numero de m.o permanece constante no decorrer do tempo, devido ao balanço entre a taxa de divisão celular e taxa de morte Morte causada pelo esgotamento de nutrientes, acumulo de produtos finais tóxicos e/ou outras mudanças no ambiente (pH). FG: Fase de aceleração da morte Taxa de divisão é menor que a morte GH: Fase Final de morte Qual das fases do crescimento microbiano deve(m) ser monitorada(s) a fim de evitar a contaminação microbiológica dos alimentos? tempo Fisiologia Microbiana O crescimento e divisão celulares necessitam de um ambiente propício com todos os constituintes químicos e físicos necessários para o seu metabolismo. Dependentes de informações genéticas para cada espécie bacteriana. Ex: Pseudomonas flexibilidade nutricional, porque são capazes de sintetizar muitos de seus metabólitos a partir de precursores simples NUTRIÇÃO DOS M.O O crescimento e divisão celulares necessitam de: MACROnutrientes: necessários em grande quantidade. Tem papel importante na estrutura e metabolismo. MICROnutrientes: quantidades mínimas. Funções enzimáticas e estruturais das biomoléculas Macronutrientes essenciais aos microorganismos CARBONO: forma o esqueleto das três maiores classes de nutrientes orgânicos (CHO, PTN, LIP) CARBONO EM RELAÇÃO AO USO DE CARBONO AS BACTÉRIAS PODEM SER CLASSIFICADAS: A) AUTÓTROFAS: quando utilizam o carbono inorgânico existente no ambiente, na forma de carbonatos ou CO2 como única fonte de carbono. B) HETERÓTROFAS: precisam retirar carbono de outras fontes (alimentos, solo) Micronutrientes Ferro, Magnésio, Manganês, Cálcio, Zinco, Potássio, Sódio, Cloro, Cobre, etc Funções: Componentes de proteínas (Fe) Cofatores de enzimas (Mg, Mb, K) Componentes de estruturas (Ca, presente em um dos envoltórios dos esporos) Osmoregulador (Na) Facilitar transporte através da membrana (Na) Fontes de energia Para a maioria dos microrganismos a energia é retirada de moléculas químicas (nutrientes, substratos) Microrganismos que obtém energia de nutrientes orgânicos (Quimiotróficos) devem inicialmente DECOMPOR os nutrientes em compostos que possam ser utilizados para a produção de energia DEGRADAR, DECOMPOR NUTRIETES ENERGIA Produção de energia Requerimentos de energia: Síntese dos componentes celulares: parede, membrana, etc. Síntese de enzimas, ácidos nucléicos, polissacarídeos, fosfolipídios reparos e manutenção da célula crescimento e multiplicação acumulação de nutrientes e excreção de produtos indesejáveis motilidade Sistemas de armazenamento e transporte de energia (ATP) Triposfato de adenosina - ATP - ligações elevado teor energético - Moeda energética celular. Instável; Principal molécula transportadora de energia de todas as células Vias de degradação de nutrientes para produção energia GLICOSE Principal fonte de energia para célula Nos alimentos = carboidratos, polissacarídeos, dissacarídeos, monossacarídeos (glicose) METABOLISMO DA GLICOSE As bactérias podem obter energia da glicose através de três processos denominados de: 1. Fermentação Ácido láctica Alcoólica 2. Respiração anaeróbia 3. Respiração aeróbia: 3 FASES Glicólise Ciclo de Krebs Cadeia (sistema) de transporte de elétrons Fermentação Não requer O2 (mas pode ocorrer na presença) Gera pouco ATP (2), pois muita energia fica nas ligações químicas dos produtos finais (ácido láctico, etanol) Respiração anaeróbica Aceptor final de elétrons = subst. inorgânica nitratos, sulfatos ou carbonatos Pseudomonas, Bacillus: NO2 O rendimento energético = 2 moléculas de ATP Respiração celular aeróbica 3 FASES 1. Glicólise: ocorre no citoplasma dos procariotos. Não necessita de O2 para ocorrer. Oxidação da glicose (6C) ácido pirúvico (3C) = SALDO DE 2 ATP (para cada glicose oxidada) ÁCIDO PIRÚVIDO 2 a. fase respiração Fermentação 2. Ciclo de Krebs (ou ciclo do ácido cítrico): ocorre no citoplasma. Grande armazenamento de energia Formação total de 6 CO2 GERA 2 ATP 3. Cadeia respiratória: citoplasma Ao longo da cadeia respiratória ocorre libertação gradual de energia, à medida que os elétrons passam de um transportador para outro. Esta energia libertada vai ser utilizada na síntese de moléculas de ATP (fosforilação oxidativa), a partir de ADP+Pi No final da cadeia transportadora, os elétrons são transferidos para um aceitador (aceptor) final - oxigênio, que capta dois prótons H+, formando-se uma molécula de água. Formação de 6 moléculas de CO2 e de H2O SALDO DE 38 ATP Do seu habitat - grande diversidade de nichos onde bactérias podem ser encontradas Dos meios de cultura laboratoriais quando se quer estudá-las em ambiente controlado De onde as bactérias captam estes elementos? APENAS OS NUTRIENTES SERIAM SUFICIENTES PARA PERMITIR QUE UMA CULTURA BACTERIANA CRESCESSE? CRESCIMENTO MICROBIANO (aumento do número de células) Fatores físicos: temperatura, pH, pressão osmótica Fatores químicos: fonte de Carbono, N, S, P, Oligoelementos, oxigênio Fatores orgânicos de Crescimento (vitamina, aa) Condições físicas para o cultivo de bactérias Temperatura Oxigênio pH Atmosfera gasosa Pressão Luz Temperatura Psicrófilas Mesófilas Termófilas pH Acidófilo: muitos fungos (pH ótimo em torno de 5 ou inferior), vários gêneros de Archaea. crescem melhor em valores <5 Neutrófilo : crescem na faixa de pH entre 5 a 8 Alcalinófilo: crescem melhor em valores >5 Oxigênio 31 Oxigênio Aeróbios – microrganismos capazes de utilizar o oxigênio molecular, O2. (Ar contém 21% de O2) Produzem mais energia a partir do uso de nutrientes. Aeróbios estritos ou obrigatórios: São os microrganismos que necessitam de O2 para sua sobrevivência. Microaerófilos: aeróbias necessitando de O2, mas em concentrações menores do que a encontrada no ar. Aeróbios facultativos Podem utilizar o O2 quando disponível, mas na sua ausência, são capazes de continuar seu crescimento através da respiração anaeróbia ou da fermentação. A eficiência na produção de energia diminui quando o O2 não está disponível. Exemplo: Escherichia coli Anaeróbios obrigatórios ou estritos São microrganismos que não utilizam o O2 para reações de produção de energia. O2 pode ser um produto danoso Exemplo: Gênero Clostridium = tétano e botulismo Anaeróbios aerotolerantes Toleram a presença do oxigênio, mas não podem utilizá-lo para seu crescimento. Fermentam carboidratos produzindo ácido lático. O acúmulo deste ácido inibe o crescimento da microbiota competitiva aeróbia Exemplo: Lactobacillus
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