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PROCESSOS FERMENTATIVOS Adolfo Marcito FERMENTAÇÃO processo bioquímico microrganismos retiram do meio material nutritivo de que necessitam ação catalítica de enzimas produzem substâncias. FERMENTAÇÃO FERMENTAÇÃO ou respiração celular As células vivas necessitam de energia para a realização de suas funções vitais. Degradam o “combustível” celular. enzimas C6H12O6 ⎯→ 2 C2H5OH + 2 CO2 + ENERGIA ( - ) FERMENTAÇÃO ALCOÓLICA FERMENTAÇÃO enzimas C6H12O6 + 6 O2 ⎯→ 6 CO2 + 6 H2O + ENERGIA ( + ) RESPIRAÇÃO FERMENTAÇÃO ü A Biotecnologia visa obter produtos metabólicos a partir de material biológico. O processo consiste em duas fases distintas e de igual importância. ü Fermentação: produção da substância. ü Separação e purificação do produto. FERMENTAÇÃO Controle ü Escolha de microrganismos ü Escolha dos substratos ü Escolha da temperatura adequada ü Escolha do pH adequado FERMENTAÇÃO ü As substâncias resultantes dos processos de fermentação, de acordo com suas características, são transformadas em produtos. ü Quando são originados álcoois como produtos, estes são utilizados em bebidas alcoólicas. ü Quando são originados ácidos como produtos, estes são aproveitados para preparar iogurte, queijos, bebidas fermentadas e vegetais fermentados (picles, chucrute, azeitona). FERMENTAÇÃO Por bactérias Por leveduras Por mofos ü Acética ü Lática ü Acetobutílica ü Propiônica ü Glucônica ü Alcoólicas ü Glicéricas ü Acido cítrico ü Ácido glucônico ü Ácido lático ü Ácido fumárico ü Manitol TIPOS E CARACTERÍSTICAS DE FERMENTAÇÕES EMPREGADAS NA INDÚSTRIA DE ALIMENTOS FERMENTAÇÃO LÁCTICA Microrganismos: Streptococcus lactis; Bacillus destrolacticus, delbrueckii, casei, bulgaricus, leishmanii; Streptobacterium. Substrato: glicose de milho, sacarose, soros de leite, melaços, lactose, hidrolisado de batata. TIPOS E CARACTERÍSTICAS DE FERMENTAÇÕES EMPREGADAS NA INDÚSTRIA DE ALIMENTOS FERMENTAÇÃO LÁCTICA Produtos originados: Kefir, Lében, Iogurte, Coalhadas, Chucrute, Azeitona, Picles. TIPOS E CARACTERÍSTICAS DE FERMENTAÇÕES EMPREGADAS NA INDÚSTRIA DE ALIMENTOS FERMENTAÇÃO ACÉTICA Microrganismos: Acetobacter aceti; Acetobacter xylinum; Acetobacter suboxidans; Acetobacter rancens; Acetobacter pasterianus; Acetobacter ascendens; Acetobacter acetigenum; Acetobacter melanogenus; Bacillus orgeanense; Bacillus schuetzenbachii. Substrato: etanol em presença do ácido acético, glicose, frutose, glicerol, manitol. TIPOS E CARACTERÍSTICAS DE FERMENTAÇÕES EMPREGADAS NA INDÚSTRIA DE ALIMENTOS FERMENTAÇÃO ACÉTICA Produtos originados: TIPOS E CARACTERÍSTICAS DE FERMENTAÇÕES EMPREGADAS NA INDÚSTRIA DE ALIMENTOS FERMENTAÇÃO ALCOÓLICA Microrganismos: Sacharomyces cervisiae; Sacharomyces carlsbergensis. Substrato: sacarose, amido e celulose sacarificados. Produtos originados: cerveja, vinhos, bebidas alcoólicas, pão, álcool. TIPOS E CARACTERÍSTICAS DE FERMENTAÇÕES EMPREGADAS NA INDÚSTRIA DE ALIMENTOS FERMENTAÇÃO PROPIÔNICA Microrganismos: Propionibacterium thoeni; Clostridium propionicum; Micrococcus lactilicus; Propionivacerium thecnicum; Propionibacterium shermanii. Substrato: lactose, lactatos, ácido lático e glicerol. Produtos originados: queijo Ementhal e Gruyère. TIPOS E CARACTERÍSTICAS DE FERMENTAÇÕES EMPREGADAS NA INDÚSTRIA DE ALIMENTOS FERMENTAÇÃO CÍTRICA Microrganismos: Aspergillus niger; Aspergillus clavatus; Penicillium luteum; Penicillium citrinum. Substrato: açúcares, glicose. Produtos originados: ácido cítrico. TIPOS E CARACTERÍSTICAS DE FERMENTAÇÕES EMPREGADAS NA INDÚSTRIA DE ALIMENTOS FERMENTAÇÃO GLUCÔNICA Microrganismos: Penicillium luteum; Acetobacter oxydans; Pseudomas fluorescens; Pseudomas ovalis; Acetobacter gluconicum. Substrato: glicose. Produtos originados: ácido glucônico e gluconatos ü Estabilizador ü evitar rancificação; ü evita escurecimento de batatas fritas; ü acelerador de cura de embutidos. TIPOS E CARACTERÍSTICAS DE FERMENTAÇÕES EMPREGADAS NA INDÚSTRIA DE ALIMENTOS FERMENTAÇÃO GLUCÔNICA TIPOS E CARACTERÍSTICAS DE FERMENTAÇÕES EMPREGADAS NA INDÚSTRIA DE ALIMENTOS PRODUÇÃO DE LÍPIDES Microrganismos: Penicillium javanicum; Penicillium aurantiobrunneum; Aspergillus flavus. Produtos originados: ácidos oléico, linoléico e ácido palmítico. CLASSIFICAÇÃO DOS PROCESSOS FERMENTATIVOS Fermentação com relação ao Oxigênio Anaeróbica: não utilizam oxigênio. alguns processos pode haver oxigênio; outros pequenas quantidades são suficientes para inibir a biossíntese do produto. Ex.: fermentação alcoólica, láctica e acetobutílica. Aeróbica: necessitam de oxigênio. Ex.: fermentação acética e cítrica. CLASSIFICAÇÃO DOS PROCESSOS FERMENTATIVOS Fermentação com relação ao Oxigênio CLASSIFICAÇÃO DOS PROCESSOS FERMENTATIVOS Fermentação com relação ao Oxigênio Sem aeração forçada: não necessitam de anaerobiose estrita. Ex: produção de etanol por Saccharomyces cerevisiae; • processos aeróbicos onde a agitação é suficiente para suprir o oxigênio necessário ao processo: produção de ácido cítrico. CLASSIFICAÇÃO DOS PROCESSOS FERMENTATIVOS Fermentação com relação ao Oxigênio Com aeração forçada: o ar fornecido deve ser estéril, sem umidade, sem óleo etc. Utiliza-se ar comprimido. Em alguns casos, o ar fornecido deve ser enriquecido com O2 ou CO2. Quase todos os processos biossintéticos possuem aeração forçada. Processos anaeróbicos que são inibidos com pequenas quantidades de oxigênio: aeração com nitrogênio ou monóxido de carbono até a saturação do ar e a eliminação do oxigênio. Fermentação com relação ao Crescimento Celular e Formação do Produto CLASSIFICAÇÃO DOS PROCESSOS FERMENTATIVOS Processo associado: a formação do produto é associada ao crescimento celular (ocorrem ao mesmo tempo). São produtos do metabolismo primário. Fermentação com relação ao Crescimento Celular e Formação do Produto CLASSIFICAÇÃO DOS PROCESSOS FERMENTATIVOS Processo semi-associado: embora a formação do produto tenha uma correlação com o crescimento celular; eles não ocorrem exatamente ao mesmo tempo; Seja por desvio no metabolismo primário para uma rota lateral; ou pelo tempo necessário para fazer indução de enzimas específicas. Processo não-associado: quando as células atingem a fase estacionária, começa a formação do produto. Fermentação com relação ao Crescimento Celular e Formação do Produto CLASSIFICAÇÃO DOS PROCESSOS FERMENTATIVOS CLASSIFICAÇÃO DOS PROCESSOS FERMENTATIVOS Fermentação com relação ao Cultivo Superfície: é feita em bandejas. O mosto é colocado na bandeja e o microrganismo é inoculado na superfície. Ex: fermentações com bolores. É sempre um processo descontínuo a quantidade fermentada não é tão grande (espaço físico) Alguns microrganismos se adaptam melhor a este tipo de crescimento. Ex.: ácido cítrico, cultivo de células animais para produção de vacinas. Fermentação com relação ao Cultivo CLASSIFICAÇÃO DOS PROCESSOS FERMENTATIVOS CLASSIFICAÇÃO DOS PROCESSOS FERMENTATIVOS Fermentação com relação ao Cultivo Profundidade: os microrganismos crescem no interior da massa líquida. Necessidade de agitação para que ocorra maior contatode nutrientes com o microrganismo. Pode ser contínuo, descontínuo ou alimentado. Fermentação com relação ao Metabolismo CLASSIFICAÇÃO DOS PROCESSOS FERMENTATIVOS Assimilativa: ocorre síntese de produtos. Os produtos são sempre mais complexos que o substrato. Os produtos apresentam peso molecular maior que o do substrato. Ex.: síntese de vitaminas e antibióticos. Fermentação com relação ao Metabolismo CLASSIFICAÇÃO DOS PROCESSOS FERMENTATIVOS Desassimilativa: há degradação do substrato e o produto pode apresentar peso molecular maior ou menor que o substrato. Ex.: produção de ácido cítrico (PM maior) a partir da glicose, fermentação láctica (PM menor) e fermentação alcoólica (PM menor). CLASSIFICAÇÃO DOS PROCESSOS FERMENTATIVOS Fermentação com relação ao Regime do Processo Em batelada: também é chamado de regime descontínuo. O mosto é colocado de uma só vez com o inóculo. Atingindo o máximo de produção: é finalizado o processo e a dorna é esvaziada, lavada e esterilizada.. As velocidades de crescimento e de consumo do substrato variam. v Mais utilizado na indústria CLASSIFICAÇÃO DOS PROCESSOS FERMENTATIVOS Fermentação com relação ao Regime do Processo CLASSIFICAÇÃO DOS PROCESSOS FERMENTATIVOS Fermentação com relação ao Regime do Processo Contínuo: o substrato é adicionado continuamente de modo que sua concentração fique constante. Ao mesmo tempo, retira-se o mosto fermentado de modo que o volume total permaneça constante. A velocidade do crescimento e de consumo do substrato são constantes; Vão depender da concentração do “substrato limitante”. Ex.: produção de cerveja, fermento de padaria a partir do melaço etc. CLASSIFICAÇÃO DOS PROCESSOS FERMENTATIVOS Fermentação com relação ao Regime do Processo CLASSIFICAÇÃO DOS PROCESSOS FERMENTATIVOS Fermentação com relação ao Regime do Processo Semicontínuo: A primeira dorna é periodicamente esvaziada e alimentada com inóculo do microrganismo em estoque. O processo semicontínuo pode tornar-se contínuo se colocarmos várias dornas em série (até no máximo de 8 dornas). A primeira dorna (processo em batelada) - sofre um “corte Têm-se vários fermentadores (estágio diferente de fermentação). Esquema de uma fermentação de múltiplo estágio Alimentado: é um processo descontínuo, semelhante ao de batelada, só que com o passar do tempo coloca-se o substrato em pequenas porções. CLASSIFICAÇÃO DOS PROCESSOS FERMENTATIVOS Fermentação com relação ao Regime do Processo Ex.: adição de um X de sacarose a cada Y horas durante a produção de biomassa de levedura. Vantagem: permitir um maior rendimento final (mesma batelada); impedir a inibição da formação do produto desejado devido a concentrações iniciais elevadas de um substrato. Fermentação com relação ao Grau de Esterilidade CLASSIFICAÇÃO DOS PROCESSOS FERMENTATIVOS Estéril: também chamada de asséptica, é conduzida em condições de absoluta esterilidade. Ex.: produção de antibióticos, vitaminas, acetona-butanol. CLASSIFICAÇÃO DOS PROCESSOS FERMENTATIVOS Semi-estéril: fermentação semi-asséptica onde é feito um tratamento térmico para diminuir a contaminação do meio, mas a fermentação não é conduzida de forma asséptica. Ex.: produção de etanol. Fermentação com relação ao Grau de Esterilidade CLASSIFICAÇÃO DOS PROCESSOS FERMENTATIVOS Fermentação com relação ao Grau de Esterilidade Não-estéril: fermentação não-asséptica onde a manipulação das próprias condições de fermentação (pH muito ácido, temperaturas extremas, pressão osmótica elevada) evitam a ocorrência de contaminações. Ex.: produção de ácido acético e de iogurte. EQUIPAMENTOS CLASSIFICAÇÃO DOS PROCESSOS FERMENTATIVOS Propagadores: São utilizados para obter células. São pequenas dornas, podendo ter aeração e agitação. ü Em pequena escala, os propagadores podem ser frascos Erlenmeyer colocados em agitadores orbitais (shaker), onde haverá, obrigatoriamente, o controle de temperatura. EQUIPAMENTOS: propagadores CLASSIFICAÇÃO DOS PROCESSOS FERMENTATIVOS EQUIPAMENTOS: propagadores CLASSIFICAÇÃO DOS PROCESSOS FERMENTATIVOS ü Os propagadores menores (até 15 a 20 litros): vidro. ü Vantagem: inerte, permitir a visualização do que ocorre no seu interior e resistir à esterilização. EQUIPAMENTOS: propagadores CLASSIFICAÇÃO DOS PROCESSOS FERMENTATIVOS ü Os propagadores maiores (de 50 a 200 litros) possuem todos os controles que o fermentador propriamente dito tem. ü Só são chamados assim porque são usados para crescer células e não para obtenção do produto. ü Esses equipamentos têm sua carcaça de aço inoxidável. ü Alguns são de cobre ou de outras ligas metálicas. inconveniente: ceder íons metálicos (agem inibindo o crescimento do microrganismo ou a formação do produto). CLASSIFICAÇÃO DOS PROCESSOS FERMENTATIVOS Fermentadores ü São dornas grandes com a finalidade de obtenção do produto. ü Devem possuir todos os controles que permitam dar condições adequadas de crescimento ao microrganismo e monitorar a formação do produto. CLASSIFICAÇÃO DOS PROCESSOS FERMENTATIVOS Fermentadores Sistema de agitação: é feito através de um eixo vertical no qual estão colocados hélices ou turbinas. Alguns fermentadores de desenho não usual possuem eixos horizontais, a rotação do eixo é fornecida por força motriz e registrada em r.p.m. O motor pode ser superior ou inferior ao equipamento dependendo de seu tamanho. CLASSIFICAÇÃO DOS PROCESSOS FERMENTATIVOS Fermentadores Aeração: ar →fluxo e pressão→ compressor, →desumidificado→ filtro comum → filtro esterilizante (algodão, fibra de vidro, ou membrana pregueada). O ar entra no fundo do fermentador através de um distribuidor de ar que regula o tamanho das bolhas de ar. Temperatura: deve haver registrador de temperatura. Seu controle pode ser feito por serpentina ou camisa, por onde circula água fria, quente ou vapor, conforme necessário. • manutenção da temperatura durante o processo fermentativo • esterilização do equipamento. CLASSIFICAÇÃO DOS PROCESSOS FERMENTATIVOS Fermentadores Adição de inóculo: deve haver um local que permita a adição do inóculo e a de qualquer outra substância que seja necessária. CLASSIFICAÇÃO DOS PROCESSOS FERMENTATIVOS Fermentadores CLASSIFICAÇÃO DOS PROCESSOS FERMENTATIVOS Fermentadores pH: deve ter registrador de pH com bombas para adição automática de ácido ou base e reservatório para armazenamento destas soluções.
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