BASES GENÉTICAS E TECNICAS DA HIBRIDAÇÃO

Prévia do material em texto

BASES GENÉTICAS E TECNICAS DA HIBRIDAÇÃO
Biologia Molecular - UCDB 2019
 Hibridação
Hibridação é a fusão de gametas geneticamente diferentes, que resulta em indivíduos híbridos heterozigóticos para um ou mais locos.
O objetivo do melhoramento por hibridação é reunir em uma nova linhagem pura alelos favoráveis presentes em dois ou 12 ou mais “genótipos”
Os passos necessários para o desenvolvimento de linhagens puras por meio da hibridação são os seguintes:
1. seleção de parentais e hibridação; 
2. geração F1; 
3. condução de populações segregantes; 
4. seleção de plantas individuais; 
5. avaliação de linhagens puras em gerações avançadas; 
6. produção comercial de sementes do novo cultivar. 
Técnicas de Hibridização (Sondas Genéticas)
Técnica na qual uma sonda de DNA ou RNA de fita simples, é utilizada para localizar um gene ou molécula em uma célula ou tecido. Detecção de sequências de nucleotídeos específicas. 
Os métodos mais comuns de hibridização em fase sólida são o Southern blot e o Dot-blot. 
Técnicas de Hibridização
Southern-blot: Análise do DNA transferido para a membrana. 
 Northern-blot: Análise do RNA transferido para a membrana. 
Dot-blot: Análise de colônias transferidas para a membrana.
Southern-blot 
Técnica na qual fragmentos de DNA (enzimas), separados por eletroforese, são imobilizados em uma membrana. 
Moléculas específicas são então detectadas com uma sonda de ácido nucléico marcada (Radioativo/Fluorescente).
Northern Blot
É uma técnica utilizada nas pesquisas da área de biologia molecular para estudo da expressão gênica, ou seja, investigar se um dado gene de um genoma é ou não transcrito em RNA e quantificar isso
Dot-blot
É uma variante em que o DNA alvo é aplicado diretamento sobre a membrana de nitrocelulose ou nylon sendo de seguida hibridizado com uma sonda.
Hibridização fluorescente in situ
É um técnica citogenética usada para detectar e localizar a presença ou a ausência de determinadas sequências de DNA em cromossomos.
FISH pode também ser usada para detecção e localização de alvos específicos de RNA em células circulantes, células tumorais ou amostras de tecido