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1. A clonagem molecular explora a modificação de organismos pela inserção de genes exógenos a vetores, que serão posteriormente inseridos em células hospedeiras. Para fazermos isso, podemos lançar mão de enzimas de restrição, bactérias, plasmídeos e outros sistemas. As enzimas de restrição são: Endonucleases sítio-específicas. Ribonucleases que degradam RNA mensageiro após a sua síntese. Capazes de unir fragmentos de DNA. Proteases que clivam peptídeos em sequências específicas. Enzimas que agem na membrana, restringindo a entrada de moléculas na célula. Explicação: A resposta correta é: Endonucleases sítio-específicas. 2. A biotecnologia trabalha predominantemente manipulando material genético de seres vivos; para a maioria dos organismos, o material genético é a molécula de DNA. Considerando as metodologias de biologia molecular, assinale a opção correta. Ao se cortar o DNA genômico aleatoriamente, serão observados genes em todos os fragmentos. O termo clonagem de DNA se refere ao ato de produzir várias cópias exatas de uma molécula, não sendo utilizado na amplificação de sequências. A técnica de Northern blotting é utilizada para analisar DNA por meio de uma sonda. A endonuclease de restrição, uma das principais ferramentas da tecnologia do DNA recombinante, corta a molécula de DNA em sequências específicas. O método Southern blotting é utilizado para a análise de mRNAs transferido de um gel para um suporte específico. Explicação: A resposta correta é: A endonuclease de restrição, uma das principais ferramentas da tecnologia do DNA recombinante, corta a molécula de DNA em sequências específicas. 3. Sequenciamento de nova geração, conhecido também como NGS ou sequenciamento profundo de ácidos nucleicos, é um termo geral utilizado para descrever uma série de tecnologias modernas de sequenciamento. Sobre esta tecnologia é correto afirmar que: As tecnologias recentes de sequenciamento de ácidos nucleicos permitem sequenciar tanto DNA como RNA de forma mais rápida e barata do que anteriormente era conseguido com o sequenciamento de Sanger e, por conta disto, estão revolucionando os estudos de genomas e a biologia molecular. Uma das restrições ao uso do sequenciamento de nova geração é a necessidade de serem utilizadas amostras grandes com alta concentração de ácidos nucleicos. Uma das maiores vantagens das tecnologias de sequenciamento de nova geração é o fato de que as sequências obtidas geralmente são longas, contendo, ao menos, 1 Kpb. Illumina (Solexa) e 454 (Roche) são sequenciadores de nova geração que realizam o sequenciamento direto tanto de DNA quanto de RNA. Apesar dos inúmeros avanços gerados pelas técnicas de sequenciamento de nova geração, ainda é tecnicamente impossível utilizá-las para analisar os genes que estão sendo expressos em um determinado tecido ou condição. Explicação: A resposta correta é: As tecnologias recentes de sequenciamento de ácidos nucleicos permitem sequenciar tanto DNA como RNA de forma mais rápida e barata do que anteriormente era conseguido com o sequenciamento de Sanger e, por conta disto, estão revolucionando os estudos de genomas e a biologia molecular. 4. Em tecnologia de DNA recombinante, o biotecnólogo insere um gene de interesse, isolado através de reação de transcrição reversa associada à PCR (RT-PCR), em um vetor, e este último em um organismo hospedeiro para expansão do vetor ou expressão do gene. Assinale a alternativa que apresenta e descreve corretamente o método utilizado para introduzir plasmídeos em células de bactéria E.coli no laboratório. Microinjeção; células são manipuladas ao microscópio e o DNA é introduzido com ajuda de uma agulha. Infecção; bacteriófagos são utilizados para a introdução do DNA de interesse. Transformação; células são incubadas com o DNA na presença de cálcio e recebem um choque térmico. Transfecção; DNA é transferido para um lisado de células, através do uso de lipofectamina. Transformação; um lisado de células é incubado com o DNA e é submetido a uma corrente elétrica. Explicação: A resposta correta é: Transformação; células são incubadas com o DNA na presença de cálcio e recebem um choque térmico. 5. É de conhecimento mundial que o desafio central da moderna biologia celular é entender o funcionamento das células em seus detalhes moleculares. Esse objetivo requer técnicas que viabilizem a análise das moléculas envolvidas no processo de fluxo de informação do DNA para proteína e no controle desse fluxo. Muitas técnicas são baseadas em hibridização (ou hibridação). Em relação à hibridização in situ, é CORRETO afirmar: A hibridização in situ não pode ser aplicada em preparações para avaliações dos cromossomos. As sondas utilizadas correspondem a segmentos de ácido nucleico no qual são incorporados nucleotídeos modificados. O resultado do experimento de hibridização in situ fluorescente deve ser analisado em microscópio eletrônico com fluorescência. O DNA é retirado de uma amostra tecidual, e passa por uma reação de PCR para incorporação de nucleotídeos marcados; Os nucleotídeos marcados sempre apresentam um isótopo radioativo, que é detectado através de impressão em filme de raio-X. Explicação: A resposta correta é: As sondas utilizadas correspondem a segmentos de ácido nucleico no qual são incorporados nucleotídeos modificados.
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