ANATOMIA VEGETAL MICROSCOPIO

Prévia do material em texto

MICROSCOPIA 
O objetivo da microscopia é a obtenção de imagens ampliadas de um objeto, que nos permitam 
distinguir detalhes não revelados a olho nu. O olho humano é um importante sensor em microscopia. 
O olho humano tem o poder de resolução correspondente a 0,1mm, sem auxílio de lentes. Como limite 
de resolução entende-se a menor distância entre dois pontos que permita distingui-los 
separadamente. Com isso, a capacidade de visualização de detalhes ou estruturas inferiores a esse 
limite de resolução ficam invisíveis ao olho humano, necessitando de ampliação. Um microscópio 
fotônico pode ampliar um material até 200 vezes, enquanto um microscópio eletrônico chega a 
aumentar mais de 300.000 vezes (Mannheimer, 2002). 
Assim, o microscópio é um aparelho que apresenta associação de lentes de vidro, de modo que 
é possível reproduzir para o olho humano uma imagem aumentada e detalhada de objetos, células, 
tecidos e órgãos, que à vista desarmada não seria possível se observar mais detalhes (Taboga, 2001). 
A microscopia com luz visível, a mais tradicional de todas, continua sendo uma técnica 
poderosa para o estudo da microestrutura dos materiais. Oferece resolução da ordem de mícron, à 
qual vulgarmente se associa a um aumento de 1000 vexes, com profundidade de campo semelhante. 
Em comparação com outros microscópios modernos atualmente disponíveis, o microscópio fotônico 
(MF) tem facilidade de operação e baixo custo, que fazem com que seja o instrumento básico em 
qualquer laboratório de microscopia (Mannheimer, 2002). 
As amostras podem ser examinadas por um grande número de técnicas diferentes, e de acordo 
com a sua natureza. As observações podem ser feitas tanto em luz transmitida, para materiais 
transparentes, como em luz refletida, para materiais opacos. Em geral, a preparação das amostras 
para microscopia fotônica pode requerer técnicas que podem ser de baixa ou média complexidade. 
Qualquer que seja a técnica requer sempre alguns cuidados especiais para garantir boa resolução e 
contraste adequado (Mannheimer, 2002). 
O microscópio mais comumente usado em laboratórios de anatomia vegetal é o MF composto. 
Ele é constituído por um conjunto de componentes que podem ser divididos em 3 grupos: o sistema 
mecânico, o sistema de iluminação e o sistema de magnificação. Muitas vezes é possível adicionar 
um 4º sistema, que é o de documentação de imagem. Os componentes óticos preenchem duas 
finalidades principais: iluminar o objeto e formar do mesmo uma imagem ampliada para observação 
ou fotografia (Mannheimer, 2002). 
O sistema mecânico destina-se a manter os elementos óticos e a amostra em posição relativa 
para observação. São partes constituintes do sistema mecânico: base ou pé; braço; tubo ou canhão; 
revólver de lentes; mesa ou platina; charriort, parafusos macro e micrométrico e parafuso de 
regulagem do condensador (figura 1). 
O sistema de iluminação compreende as seguintes partes: fonte luminosa; diafragmas; 
condensador e filtros (figura 1). 
O sistema de magnificação é composto por lentes oculares e objetivas (figura 1). 
 
 
 
Figura 1: Identificação das partes constituintes de um microscópio fotônico. 
 
Unidades de medida utilizadas em microscopia 
Divide-se as unidades de estruturas biológicas em macroscópicas e microscópicas, sendo essas 
últimas invisíveis ao olho humano nu. As unidades de medida em microscopia compreendem o 
micrômetro (µm), usada em microscopia ótica; o nanômetro (nm) e o angstrom (Å), usadas em 
microscopia eletrônica (Quadro 1). 
Quadro 1: Unidades de medida geralmente usadas em microscopia. 
UNIDADE DE MEDIDA SÍMBOLO VALOR 
Micrômetro µm 0,001mm (milésima parte do mm) 
Nanômetro nm 0,001 µm (milésima parte do µm) 
Ângstrom Å 0,0000001mm (10-7mm) 
 
O aumento total das amostras observadas é calculado multiplicando-se os valores do aumento 
da objetiva e da ocular (Quadro 2). 
Quadro 2: Cálculo do aumento da amostras, segundo as objetivas do microscópio fotônico. 
OCULAR OBJETIVA AUMENTO DIÂMETRO DO CAMPO 
10x 10x (pequeno aumento) 100x 1.500 µm 
10x 40x (grande aumento a seco) 400x 375 µm 
10x 100x (imersão em óleo) 1000x 150 µm 
 
 
 
 
Procedimentos básicos para a correta utilização do microscópio na observação de 
material biológico 
1. Ligar a fonte luminosa (lâmpada). 
2. Acomodar a lâmina com a amostra sobre a platina. 
3. Ajustar a iluminação com o auxílio do condensador e do diafragma. 
4. Observando pelo lado externo do microscópio, girar o parafuso macrométrico, aproximando a 
objetiva de 10x o máximo possível da amostra. 
5. Olhando pela ocular, girar o mesmo parafuso no sentido inverso até obter uma imagem nítida da 
amostra. Ajustar com o micrométrico, se for necessário. 
6. Após observação, focalizar com a objetiva de 40x, girando o tambor e posicionando a objetiva de 
40x na direção da amostra e focalizar com o auxílio do parafuso micrométrico. 
7. Para uma ampliação maior, (objetiva de 100x), girar o canhão, afastando a objetiva de 40x da 
amostra. Colocar uma gota de óleo de imersão sobre a amostra. Em seguida, girar o tambor, 
posicionando a objetiva de 100x sobre a preparação. Girar o parafuso micrométrico até ajustar o foco 
da amostra. 
 
OBSERVAÇÕES IMPORTANTES: 
 
1) O óleo de imersão não pode entrar em contato com as objetivas de 10 e 40x, para não danificá-
las. 
2) Após a observação da amostra, remover o óleo da lente antes de guardar o microscópio, para 
que ele não seque e danifique a lente. 
 
Aula prática com preparação de lâmina com um pedaço de jornal de 1mm² 
 
Material: jornal, tesoura, lâmina de vidro, lamínula de vidro, pinça, conta gotas e água. 
 
Preparação da lâmina: 
 
1) Obter um fragmento de jornal, de onde as letras sejam memores, medindo 1mm²; 
2) Pingar um gota de água no centro de uma lâmina de vidro para microscopia; 
3) Com o auxílio de uma pinça, colocar o fragmento de jornal sobre a gota de água e aguardar 
alguns segundos; 
4) Colocar sobre o fragmento uma lamínula de vidro. Caso fiquem bolhas, pressionar levemente a 
lamínula com a pinça; 
5) Posicionar a lâmina no microscópio para observação. 
 
 Para transportar um microscópio, qual a melhor maneira de segurá-lo? 
 Que peça é movimentada quando giramos o parafuso macrométrico? 
 Para que serve o parafuso micrométrico? O que ocorre quando o giramos? O movimento é tão 
nítido quanto o do parafuso macrométrico? 
 Eleve o canhão girando o macrométrico e observe as objetivas. São todas iguais e do mesmo 
tamanho? Verifique os números dos aumentos gravados nas objetivas. 
 Como calcular o aumento que o microscópio fornece? 
 Qual a função do espelho? 
 Onde deve ser colocada a lâmina contendo a preparação para observação? Qual objetiva deve 
ser inicialmente usada para o procedimento de focalização? 
 A que distância da lâmina deve ser colocada a objetiva antes de ser focalizado o material 
desejado? 
 Qual parafuso deve ser usado inicialmente para focalizar o material? 
 Quais outras partes do microscópio devem ser controladas para obtenção de maiores 
aumentos? 
 Para ter certeza de que a preparação está em cima do foco de luz você olha por fora do 
microscópio ou diretamente através da ocular? 
 Acoplado ao condensador existe um diafragma. Mover a alavanca do diafragma e descrever o 
que ocorre. 
 Girar o tambor de forma a colocar a objetiva de menor aumento em cima da lâmina com 
preparação. 
 Abaixar o canhão girando o macrométrico. Mexendo o espelho, colocá-lo na posição capaz de 
iluminar o interior do tubo. Tanto melhor será a focalização quanto mais claro estiver o círculo 
que você está vendo. Este círculo é o campo do microscópio. A preparação a ser observada 
deve estar no centro geométrico do campo iluminado. Na objetiva ocular há uma pestana(que 
funciona como uma seta). Girando-se a ocular a pestana se move e você pode usá-la para 
indicar uma estrutura que esteja querendo mostrar para alguém. Como exercício, focalizar um 
material e colocar a seta na região que deve ser observada. 
 
Esquematizar abaixo a observação feita em cada aumento sobre os fragmentos de jornal: 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 Aumento de 40x Aumento de 100x 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 Aumento de 400x