resumo química orgânica experimental

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UNIVERSIDADE FEDERAL DA FRONTEIRA SUL
CAMPUS LARANJEIRAS DO SUL
CURSO DE ENGENHARIA DE ALIMENTOS
Shelley K. Mineiro Scarsi
RELATÓRIO FINAL DE AULA PRÁTICA
LARANJEIRAS DO SUL
2018
Introdução
O meio de cultura é uma preparação química que possui nutrientes necessários para que microrganismos de determinada amostra biológica se multipiquem, permitindo seu estudo, identifica e analise. Os principais componentes de um meio de cultura são fontes de carbono, energia (acucares), nitrogênio, fósforo e sais minerais.
Diversos outros componentes podem ser encontrados em um meio de cultura especifico para determinado organismo, satisfazendo as condições idéias para os testes. Cada tipo de meio cultura é indicado para uma função e um microrganismo específicos: alguns visam nutrir e estimular o crescimento, enquanto outros inibem determinado organismo e ate indicam seu potencial hidrogenionico.
Ágar MacConkey: é um meio de cultura destinado ao crescimento de bactérias gram-negativas. Isso ocorre porque ele possui em sua composição duas substâncias que inibem o crescimento de bactérias gram-positivas: ácido biliar e cristal violeta. Assim, ele favorecerá somente o crescimento de bactérias gram-negativas, esse meio é utilizado para o crescimento de membros da família Enterobacteriaceae e Pseudomonas aeruginosa, isto é, espécies que não crescem neste meio mesmo sendo gram-negativas, incluem membros da família Pasteurellaceae: a Pasteurella multocida, a Mannheimia haemolytica (cresce muito mal), o Avibacterium spp, Actinobacillus pleuropneumoniae (outras espécies de Actinobacillus podem crescer), e o Haemophilus parasuis. Ele também irá separar os microorganismos em fermentadores de lactose ou não por mudança de cor do meio (bactérias lac - e lac +) (pois possui lactose em sua formulação, além de um indicador de pH). Essa separação em lac+ e lac- também auxilia na identificação: E. coli, por exemplo, é Lac +, e Salmonella e Pseudomonas são Lac -.
Indol: O indol é produzido pela ação da triptofanase sobre o triptofano existente no meio de cultura SIM. O indol pode ser detectado pela formação de um anel vermelho na parte superior do tubo, após a adição de p-dimetilaminobenzaldeído (reativo de Kovac’s).
2.2.	VM (Vermelho de Metila) 
Esse teste avalia se a bactéria fermenta a glicose pela via ácida mista, com a produção de vários ácidos (ácido fórmico, lático, acético), que provoca a redução do pH de 7 para valor igual ou menor que 4,4, faixa de viragem do indicador vermelho de metila para vermelho. Assim  a presença da cor vermelha após a adição do indicador é indicativa da positividade do teste do VM.
2.3.	VP (Voges Proskauer) 
Meio utilizado: Alfa Naftal
Verificar se a bactéria fermenta a glicose pela via butilenoglicólica. Esse teste se baseia na detecção do produto intermediário acetil-metil-carbinol (acetoína). Após incubação d a cultura procede-se a adição de KOH 40%, que na presença de O2 atmosférico e usando α-naftol como catalisador da reação, oxida acetoína a diacetil. Essa substância reage com o aminoácido arginina presente na peptona do meio de cultura e forma uma substância de cor vermelha. Portanto, a cor vermelha também indica a positividade do teste do VP.
2.4. 	Teste do Citrato
Este teste determina se a bactéria é capaz de utilizar o citrato de sódio como única fonte de carbono para o metabolismo e crescimento. Ou seja, se a bactéria avaliada possui a enzima citratase para degradar o citrato de sódio. O meio utilizado é o ágar Citrato de Simmons, que além do citrato de sódio contém mono fosfato de amônia, como única fonte de nitrogênio. O azul de bromotimol, também presente no meio, é o indicador de pH que é verde em pH neutro. A degradação do citrato de sódio e do fosfato de amônia leva a formação de sais de amônia que promove a alcalinização do meio elevando o pH do para 7,6, fazendo com que este se torne azul.
Nesse teste, utilizam-se tubos com meio inclinado para a cultura ter mais acesso ao oxigênio, que é necessário para utilização do citrato de sódio. Assim a cor azul caracteriza a positividade do teste do citrato e a cor verde indica um teste negativo.
2.3	CATALASE
A catalase é uma enzima que decompõe o peróxido de hidrogênio (H2O2) em água e oxigênio. Reagem principalmente com Staphylococcus, Streptococcus, Enterococcus, Listeria, Corynebacterium, Micrococcus, Bacillus, Moraxella catarrhalis. E a inoculação ocorre da seguinte maneira: Colocar uma gota de peróxido de hidrogênio (água oxigenada) 3% sobre uma lâmina em um tubo; Com auxílio de fio bacteriológico, agregar a colônia em estudo na gota de peróxido de hidrogênio.
Resultado:
+ Positivo: Presença imediata de bolhas - a produção de efervescência indica a conversão do H2O2 em água e oxigênio gasoso.  
- Negativo: Ausência de bolhas ou efervescência.
4 .	COAGULASE
Verificar a capacidade de microrganismos reagirem com o plasma e formar um coágulo, uma vez que a coagulase é uma proteína com atividade similar à protrombina, capaz de converter o fibrinogênio em fibrina, que resulta na formação de um coágulo visível. Separam as espécies de Staphylococcus, S. aureus – coagulase positiva, das demais espécies – coagulase negativa.
Resultados:
+ Positiva: presença de qualquer grau de coágulo. 
- Negativa: ausência de coágulo.
5 .	MAC e EMB
Ágar MacConkey é um meio seletivo para enterobactérias destinado à detecção, isolamento, contagem de coliformes e patógenos intestinais da água, laticínios, materiais biológicos, etc.
Princípio de ação: organismos que fermentam lactose, produzem pH localizado, o qual, seguido pela absorção do vermelho neutro contido no meio, confere uma coloração vermelha ou rósea à colônia, enquanto que colônias não fermentadoras de lactose permanecem incolores ou transparentes.
O EMB (Eosina azul de metileno) é um meio para diferenciação ligeiramente seletivo utilizado para o isolamento e diferenciação de bacilos entéricos gram-negativos (enterobactérias e outros bastonetes gram-negativos). A sacarose é fermentada por determinados organismos entéricos de forma mais rápida do que a lactose.
	O EMB contém corantes de eosina e azul de metileno que inibem as bactérias gram-positivas num determinado grau. Os corantes funcionam também como indicadores de diferenciação em resposta à fermentação da lactose e/ou sacarose por micro-organismos. Os coliformes produzem colônias pretas-azuladas, enquanto as colônias de Salmonella e Shigella são incolores ou têm uma cor âmbar transparente. As colônias de Escherichia coli poderão apresentar um reflexo verde metalizado característico, devido à rápida fermentação da lactose.
6.	BAC TRAY 3
	O sistema bactray é destinado à identificação bioquímica  de bacilos Gram-negativo oxidase negativo fermentadores ou não da glicose, e Gram-negativo oxidase positiva não fermentadores da glicose.
Bactray I e II usado para identificar bacilos Gram-negativo oxidase negativo fermentadores ou não da glicose.
Bactray III, usado para identificar bacilos Gram-negativo oxidase positivo, não fermentadores da glicose.
Interpretação do resultado disponível em:
<http://www.interlabdist.com.br/dados/produtos/bula/doc/333948ca8d4504c14.pdf> 
7 ANTIBIOGRAMA
O antibiograma, também conhecido por Teste de Sensibilidade a Antimicrobianos (TSA), é um exame capaz de determinar a sensibilidade da bactéria aos antibióticos, podendo indicar ao médico qual o antibiótico mais aconselhado para tratar a infecção do paciente ou animal.
Nas aulas foram utilizados os seguintes antimicrobianos: Penicilina (10U), Ceftiofur (30 mcg), etc.
8 RESULTADOS
	Teste
	Resultado dos Testes
	TSI
	K/A/GÁS/H2S
	IMViC
	INDOL
	VM
	VP
	C
	
	+ pink
	+ vermelho
	-
	- amarelo
	CATALASE
	
	SA
	+
	COAGULASE
	
	SA
	+
	MAC  e EMB
	-
	BACTRAY 3
	
	CET
	INCOLOR
	-
	ACE
	AMARELO
	
	MAL
	VERDE
	-
	CIT
	VERDE
	+
	MLT
	AMARELO
	-
	ESC
	INCOLOR
	-
	CTL
ARG
	 VERMELHO PINK
	+URE
	VERMELHO
	+
	IND
	PINK
	-
	ANTIBIOGRAMA
	
	PEN
	RESISTENTE
	CTF
	SENSÍVEL
	AMO
	INTERMEDIARIO
	CFE
	SENSÍVEL
	MFX
	SENSÍVEL
	NEO
	INTERMEDIÁRIO
	EST
	SENSIVEL
 A bactéria encontrada foi