roteiro de aula prática

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ROTEIRO DE AULA PRÁTICA 
1. IDENTIFICAÇÃO 
 
PROFESSOR (A): Cláudia Baltazar 
EXPERIMENTO: Dosagem de 
Metaheglobinemia 
DISCIPLINA: Toxicologia 
 
 
2. PROTOCOLO DO EXPERIMENTO 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Introdução: 
Nos eritrócitos humanos, os tóxicos são capazes de promover a inibição da citocromo 
oxidase, pois interagem com o ferro presente no grupo heme desta enzima, impedindo o 
transporte de elétrons e interrompendo a cadeia respiratória e produção de ATP (adenosina 
trifosfato); e como consequência a hipóxia em órgãos e sistemas, a exemplo do coração e 
sistema nervoso central (ARAUJO E LOPES, 2009; GLASSE, 2010).Nesse contexto, é de 
extrema relevância a dosagem de metahemoglobina nos indivíduos expostos aos tóxicos com 
tais propriedades (ARAUJO E LOPES, 2009; AZEVEDO et al., 2015). 
Objetivo: Quantificar os compostos de Metahemoglobina em indivíduos fumantes 
1. Materiais utilizados: 
A. Béquer; 
B. Espátula; 
C. Tubos de ensaio de 10 ml , 100 ml e 500 ml´s 
D. Pipetas volumétricas e automáticas 
 
Reagentes: 
 
- Saponina 1% 
- 9 g Na2HPO412H2O e 5,7g de KH2PO4 
- 1000 Ml de agua destilada 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 
 
 
 
 
 
 
 
RECEBIMENTO PELA COORDENAÇÃO DE LABORATÓRIOS 
 
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 Coordenador do Lab. Data____ / ____ / _____. 
 
 
Referencias: 
SILVA.J.V.S, MORIGUCHI.P, BIDOIA., B.G,KAMONSEKI., D.H, SANDRO 
FERREIRA.R.Determinação de metemoglobina em voluntários fumantes e não 
fumantes. Health Sci Inst. v.34. n.1 p.38-43.2016 
 
Técnica 
 
a)Preparo da Solução mãe : Preparar a Solução estoque de tampão fosfato M/15 em balança analítica e 
com auxílio de papel para pesagem, serão pesados 9g de Na2HPO412H2O e 5,7g de KH2PO4 e 
transferidos para balão volumétrico de 1000mL e completado com água destilada até o menisco e, 
posteriormente agitado para que ocorrer total dissolução. 
 
b)Solução trabalho tampão fosfato M/60 : Será retirada uma alíquota de 250mL com auxílio de uma 
proveta de 500 mL e transferido para um balão volumétrico de 1000 mL, e completado com água destilada 
até o menisco e, posteriormente agitado para total homogeneização. 
 
Deverá ser coletado 3 Ml de sangue total em tubo de EDTA. 
 
Determinação de Metemoglobina Para cada voluntário serão identificados dois tubos em A e B. 
No tubo A, com auxílio de pipeta automática, adicionr 100uL de sangue total coletado com 
anticoagulantes (EDTA) e 100uL de saponina a 1% sob agitação para que ocorresse hemólise, em seguida, 
adicionar 6mL do tampão fosfato M/60 homogeneizando a mistura. A mistura obtida do tubo A será 
transferida para cubeta para que fosse realizada a leitura no espectrofotômetro em 630nm, tendo como 
branco o tampão fosfato M/60. No tubo B, será adicionado com pipeta automática 300uL da mistura do 
tubo A e com auxílio de pipeta de 5mL, adicionar 3mL do tampão fosfato M/60 homogeneizando a 
mistura. A mistura do tubo B deve ser transferida para cubeta para a leitura no espectrofotômetro em 
540nm, tendo como branco o tampão fosfato M/60. 
 
 
Valores normais de metemoglobina variam de 1,9 a 3,8%, sendo que acima de 4% são considerados 
elevados. 
 
A concentração de MetHb foi calculada através da equação abaixo: 
Cálculo: % MetHb = [A] Tubo A x 100 
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[A] Tubo A + ([A] Tubo B x 10) 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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 Profª . Data____ / ____ / _____.