Relatório 3 Fam bioquímica

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FACULDADE DE AMERICANA
CURSO DE NUTRIÇÃO
BIOQUÍMICA
Camila Beckedorff Duarte -RA: 20190764
Daiane Caroline Correia – RA: 20191958
Letícia Libério Batista da Silva – RA: 20191743
Luana Guedes da Silva - RA: 20190791
Mikaelly de Oliveira Piazentin - RA:20191563
Talita Alves Dias Moura- RA: 20190877
Prof. Fábio Domingues Nasário
Realização da aula prática dia 25/09/2019
Relatório: Análise da atividade enzimática da amilase salivar - Efeito de pH e temperatura.
Americana
2019
INTRODUÇÃO
OBJETIVO
	Tivemos como principal objetivo observar a ação da amilase salivar, enzima segregada pelas glândulas salivares, sobre o amido, um polissacarídeo muito abundante na alimentação. 
	Então fizemos a utilização da amilase salivar, que atua provocando a hidrolise desse polissacarídeo, em diversas temperaturas e concentrações de pH para verificar as diferentes reações que ocorreria.
	Fizemos todo o processo de preparação da coleta e diluição da enzima, e da caracterização dos padrões que seriam utilizados para comparação e discussão dos resultados obtidos.
PARTE EXPERIMENTAL
Materiais utilizados no experimento:
Tubo de ensaio
Tampão fosfato 0,1 mol/L
Amido (solução aquosa 1 g%)
Glicose (solução aquosa 1 g%)
Reativo de Lugol (solução de iodo 0,1 mol/L)
NaOH (solução aquosa de hidróxido de sódio 0,1 g%) 
HCl (solução aquosa de ácido clorídrico 0,1 g%) 
Pipeta Pasteur
Gelo
Banho-Maria 
Saliva 
Procedimento:
Coletamos com o auxílio da pipeta Pasteur 1,5ml de saliva e diluímos em 4,5ml tampão fosfato. Reservamos para a utilização nas etapas posteriores;
Utilizamos 2 tubos para caracterizar os padrões. No tubo A inserimos 2,0ml de amido e adicionamos 2 gostas de Lugol, no tubo B inserimos 2,0ml de glicose e também adicionamos 2 gostas de Lugol. Utilizamos para compararmos com os próximos procedimentos;
Utilizamos 3 tubos para iniciar o primeiro experimento. O tubo 1C contendo 1,0ml de amido + 2,0ml de tampão fosfato+ 1,0ml da saliva diluída. O tubo 2C contendo 1,0ml de amido + 2,0ml de HCl 0,1 mol/L + 1,0ml da saliva diluída. O tudo 3C contendo 1,0ml de amido + 2,0ml de NaOH 01, mol/L + 1,0ml da saliva diluída. Após as misturas foram inseridos no banho-maria a 37oC por 20 minutos;
Enquanto os tubos estavam em banho-maria, demos seguimento ao procedimento, utilizamos mais 3 tubos de ensaio;
No tubo 1D foi adicionado 1,0 ml de amido + 2,0ml de tampão fosfato e colocado por 5 minutos a 37°C no banho-maria, retiramos e adicionamos 1,0ml da saliva diluída e foi posto novamente em 37°C por mais 10 minutos;
No tubo 2D foi adicionado 1,0ml de amido + 2,0ml de tampão fosfato e colocado no gelo por 5 minutos, retiramos e adicionamos 1,0ml de saliva diluída e foi posto novamente no gelo por mais 10 minutos;
No tubo 3D foi adicionado 1,0ml de amido + 2,0ml tampão fosfato e colocado no banho-maria fervente por 5 minutos, retiramos e adicionamos 1,0ml de saliva diluída e foi posto novamente em banho-maria fervente por mais 10 minutos;
Após esses procedimentos, observamos as reações, comparamos com os padrões (TUBO A e B), e fizemos as devidas anotações.
RESULTADOS E DISCUSSÃO
	Os experimentos foram realizados em laboratório, seguindo o roteiro de estudo. Nos foi proposto dois experimentos, no qual o primeiro tinha como principal objetivo a avaliação do efeito do pH na atividade enzimática, e o segundo experimento avaliou o efeito da temperatura na atividade enzimática.
	A enzima utilizada nos experimentos foi a saliva dos participantes do grupo, e assim pudemos observar que em condições ideias de temperatura (37oC) e pH (6,8) pode ser evidenciada a atividade enzimática de hidrólise do amido pela enzima amilase salivar. 
	Para iniciarmos os experimentos, fizemos a coleta da enzima (saliva): utilizamos um copo plástico, onde inserimos 1,5ml de saliva e diluímos com 4,5ml de tampão fosfato pH 6,8. Reservamos.
	Também preparamos a caracterização dos padrões, que serviu como base pra análise dos resultados no final de cada experimento. Identificamos dois tubos de ensaio, como A e B: 
	O tubo A continha uma mistura de 2,0ml de amido + 2 gotas de reativo de Lugol, o que resultou em uma cor azul-arroxeada, evidenciando a formação de complexo de iodo com o polissacarídeo amido, sendo caracterizado um padrão indicativo de que não ocorreu hidrólise. 
	Já o tubo B continha uma mistura de 2,0ml de glicose + 2 gotas de reativo de Lugol, o que resultou em uma cor amarelada, sendo caracterizado um padrão de hidrólise total do amido, como mostra a figura a seguir:
Figura 1: Tubos de ensaio A e B contendo padrão indicativo
	Após realizarmos as etapas de preparação da enzima e dos padrões indicativos, demos início ao primeiro experimento avaliação do efeito do pH na atividade enzimática. Utilizamos 3 tubos de ensaio:
1C (1,0ml de amido+ 2,0ml de tampão fosfato pH 6,8+ 1,0ml de saliva diluída), 
2C (1,0ml de amido+ 2,0ml de HCl 0,1 mol/L+ 1,0ml de saliva diluída) 
3C (1,0ml de amido+ 2,0ml NaOH 01, mol/L+ 1,0ml de saliva diluída) 
	Em seguida inserimos os tubos no banho-maria a 37oC por 20 minutos. Retiramos os tubos de ensaio e adicionamos 2 gotas de reativo de Lugol, homogeneizamos e obtivemos os resultados a seguir:
Figura 2: Tubos de ensaio contendo o resultado do primeiro experimento.
	Observamos os resultados obtidos e comparamos com o padrão indicativo que havíamos preparado anteriormente. E chegamos as seguintes conclusões:
Tubo 1C Apresentou coloração transparente. A enzima reagiu, ou seja, ocorreu a hidrólise, pois como vimos e enzima α-amilase presente na saliva, quando se encontra em condições favoráveis de pH e temperatura, catalisa a hidrólise das ligações glicosídicas do amido. Nesse caso, o pH 6,8 da solução tampão e a temperatura foi favorável para que ocorresse a atividade enzimática.
Tubo 2C Apresentou coloração azul-arroxeada. A enzima não reagiu, não ocorrendo a hidrólise, por mais que estivesse em uma temperatura favorável o HCl possui um pH ácido, ou seja, não favorável para que ocorresse a atividade enzimática.
Tubo 3C Apresentou coloração transparente. Ocorreu um falso resultado por estar em meio básico. 
	Demos sequência ao segundo experimento efeito da temperatura na atividade enzimática. Utilizamos também 3 tubos de ensaio:
1D (1,0ml de amido+ 2,0ml de tampão fosfato pH 6,8) inserimos o tubo por 5 minutos no banho-maria a 37oC, após esse tempo adicionamos 1,0ml de saliva diluída e em seguida mais 10 minutos de banho-maria a 37oC.
2D (1,0ml de amido+ 2,0ml de tampão fosfato pH 6,8) inserimos o tubo por 5min no gelo, após esse tempo adicionamos 1,0ml de saliva diluída e em seguida mais 10 minutos no gelo.
3D (1,0ml de amido+ 2,0ml de tampão fosfato pH 6,8) inserimos o tubo por 5 minutos em banho-maria fervente, após esse tempo adicionamos 1,0ml de saliva diluída e em seguida mais 10 minutos de banho-maria fervente. Depois de retirado do banho-maria fervente, foi resfriado por 5 minutos no gelo.
	Após todos os procedimentos, adicionamos 2 gotas de reativo de Lugol, homogeneizamos e obtivemos os resultados a seguir:
Figura 3: Tubos de ensaio contendo o resultado do segundo experimento.
	Observamos os resultados obtidos e comparamos com o padrão indicativo que havíamos preparado anteriormente. E chegamos as seguintes conclusões:
Tubo 1D.Apresentou uma coloração levemente azul- arroxeada. Houve uma reação pequena. Acreditamos que se o tubo tivesse passado mais algum tempo em banho-maria a 37oC, a reação teria sido mais eficaz.
Tubo 2D Apresentou uma coloração azul-arroxeada forte. Não reagiu, ou seja, não ocorreu a hidrólise do amido, pois esse tubo passou pelo processo do gelo, uma temperatura bem abaixo de 37oC, então conseguimos verificar que a temperatura não foi favorável para ocorrer a atividade enzimática, mesmo estando em pH favorável.
Tubo 3D Apresentou uma coloração azul-arroxeada forte. Não reagiu, ou seja, não ocorreu a hidrólise do amido, esse tubopassou pelo processo de banho-maria fervente, uma temperatura bem mais elevada que 37oC, nesse caso também não proporcionou uma temperatura favorável para ocorrer a atividade enzimática, mesmo estando em pH favorável.
CONCLUSÃO
	Nos experimentos realizados abordamos sobre a enzima e amilase presente na saliva, e notou- se que a amilase salivar é uma enzima, ou seja, um catalizador biológico que tem a capacidade de hidrolisar o amido. O seu funcionamento está relacionado variação de fatores como temperatura, pH concentração enzimática, concentração de substrato.
	Através dos experimentos foi possível observar a atividade das enzimas em diversas situações, verificando as mudanças que ocorreram em suas atividades relacionadas a variações de pH, temperatura, aumento de um substrato e tempo de reação. O estudo é de primordial relevância, pois foi possível observar como as enzimas atuam e sua importância para diversas atividades. 
	Os experimentos foram de grande valia e importância para o nosso conhecimento, visando nosso âmbito de estudo como futuros nutricionistas, pois todos esses processos praticados acontecem em nosso corpo a todo momento, e como profissionais da área da saúde precisamos estar cientes de todo funcionamento químico e biológico do nosso organismo, portanto a aula prática nos levou a compreender melhor o tema abordado.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS