APS- D LABORATORIAL II

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Nome;Jurandir Vendittis RA.6105160
ATIVIDADE 2: O aluno deverá responder as questões:
Qual o significado da sigla ESBL? Qual o impacto desses microrganismos na saúde pública?
São bactérias que produzem Beta-lactamase (enzimas que destrói os antimicrobianos betalactâmicos, como a penicilina).O próprio nome ESBL quer dizer :Beta -lactamase de espectro estendido .
As ESBL são descritas como o ponto de urgência clinica entre os membros da família enterobacteriaceae e estão amplamente disseminadas no território brasileiro ,retratando -se diversas enzimas em diferentes patógenos .vários estados ainda não notificaram a presença de ESBL ,uma vez que o pais não dispõe de programa nacional de vigilância da resistência microbiana .
Qual foi o local de estudo? Número de amostras avaliadas? Período da coleta de dados?
O trabalho foi realizado no laboratório de análises clinicas do Hospital Vicente de Paulo (HSVP),em Passo Fundo RS Brasil. Foram analisadas durante o período de estudos 4888 culturas. Realizou-se um estudo retrospectivo observacional transversal que incluiu os pacientes internados no HSVP e cujas culturas bacterianas foram realizadas ,no período de julho a dezembro de 2007 . 
Como foi realizada a identificação de cepas, antibiograma e triagem fenotípica da produção de ESBL?
As amostras biológicas foram identificadas através da coloração de gram e provas como fermentação de glicose ,sacarose e lactose,motilidade,produção de H2S ,gás,indol e quando necessário á identificação foi confirmada pelo painel de gram-negativos do AUTO-SCAN-4 (Date Microscan Inc...,Sacramento ,CA,USA).O perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos foi determinado pela metodologia de disco-difusão ,de acordo com as normas do CLSI (Clinical Laboratory Standards Institute).A triagem fenotípica para produção de ESBL foi realizada pela técnica de discos aproximação também segundo as normas do CLSI (CLSI 2007).
Qual foi o total de culturas positivas? Qual o percentual de enterobactérias? Qual o percentual de isolados produtores de ESBL?
O percentual de culturas positivas foi de 31,6% (n°=1546/48880.Dentre essas 54,2%(n°=838/1546) foram identificadas como enterobactérias .A tabela 1 mostra que, dentre as culturas positivas identificadas como enterobactérias 24%(n°=208/838) dos isolados apresentaram teste de triagem positivo para produção de ESBL .Dentre os isolados produtores de ESBL ,Escherichia coli foi á espécie prevalente com 46,2%(n°=96) .seguida de Enterobacter sp ,com 30,3%(n°=63).
Quais as espécies mais prevalentes nesse estudo?
Os seguintes gêneros bacterianos apresentaram relação com produção de ESBL :E,coli,Enterobacter sp,E coli sacarose negativa e Serratia sp.
Em relação ao perfil de resistência dos isolados, contra quais antibióticos os isolados se mostraram mais sensíveis/resistentes?
A produção de ESBL foi observada em 24,8%(n°208/838) dos isolados avaliados .Isolados de Escherichia coli representaram 46,2%(n°=96/208) do percentual de produtores de ESBL,seguindo de espécies de Enterobacter 30,3%(n°=63/208). A sensibilidade desses isolados ao meropenem foi de 91,4%e a piperacilina/tazobactam de 67,4%.
Do ponto de vista de saúde pública, qual a importância da frase encontrada no artigo: “As enterobactérias produtoras de ESBL avaliadas no presente estudo mostraram-se bastante susceptíveis aos carbapenêmicos, principalmente meropenem”.?
Isso significa que em termos de saúde pública essas bactérias se tornaram cepas resistentes aos antibióticos mais usados e os de ultima escolha no tratamento ,o que pode inviabilizar mais para frente o tratamento de pacientes infectados com essas bactérias ,pois não haverá mais escolha de tratamento eficaz .
ATIVIDADE 3: O aluno deverá responder as questões:
Qual o princípio da técnica de citometria de fluxo?
Citometria de fluxo é uma técnica utilizada para contar ,examinar e classificar partículas microscópica suspensas em meio liquido em fluxo .Permite a análise de vários parâmetros simultaneamente ,sendo conhecida também por citometria de fluxo multiparamétrica .Através de um aparelho de detecção óptico -eletrõnico são possíveis analises de características fidicas e/ou químicas de uma simples célula.
Um feixe de luz (normalmente laser ) de um único comprimento de onda (cor) é direcionado a um meio liquido em fluxo.Um número de dectores são apontados ao local onde o fluxo passa através do feixe de luz;um na linha do feixe de luz (Forward Scatter ou FSC ) e vários perpendiculares a este (Side Scatter ou SSC) além de um ou mais detectores fluorescentes .Cada partícula suspensa passando através do feixe dispersa a luz se uma forma,e os corates químicos fluorescentes encontrados na partícula ou juntos a partícula podem ser excitados emitindo luz de menor frequência do que o da fonte de luz .Esta combinação de luz dispersa e fluorescente é melhorada pelos detectores ,e analisando as flutuações de brilho de cada detector(uma para cada pico de emissão fluorescente) é possível explorar vários tipos de informação sobre a estrutura física e química de cada partícula individual. FSC correlaciona- se com o volume celular e SSC depende da complexidade interna da partícula (por exemplo :forma do núcleo ,quantidade e tipo dos grânulos citoplasmáticos e rugosidade da membrana). Alguns citômetros de fluxo do mercado tem eliminado a necessidade da fluorescência e usado somente dispersão de luz para sua medição.Outros citômetros de fluxo formam imagens de cada fluorescência da célula ,dispersão de luz e transmissão de luz.
Quais são as vantagens de se utilizar a técnica de citometria de fluxo comparada aos outros métodos de análise?
A grande vantagem é a capacidade de avaliar em curto espaço de tempo ,grande número de células com alta sensibilidade e especificidade proporcionando em seus resultados informações suficientes para diagnósticos precisos sem a necessidade de outros exames.
O que podemos analisar através da citometria de fluxo?
A citometria é um exame sem especificidade técnica ,pode ser usado em todo tipo de organismo celular ,por isso o uso da citometria é bem amplo ,podendo ser usado em Hematologia,Imunologia ,cancerologia,Ciclo celular ,Embriologia ,Farmacologia e ainda está sendo utilizado em algumas pesquisas Oceanográficas e em estudos Cromossômicos. 
Qual a relação entre citometria de fluxo e imunofenotipagem?
A citometria de fluxo é uma das técnicas de imunofenotipagem utilizadas na realização de exames clínicos .
O que significa a sigla “CD” muito utilizada em imunofenotipagem ?
Imunofenotipagem (CD-antigeno de diferenciação celular) por citometria de fluxo .Através da utilização de anticorpos monoclonais especificamente produzidos contra determinantes antígenos organizados em grupos de diferenciação ,denominados CD	(cluster differetiation )é possível caracterizar e diferenciar as populações de células normais das anormais ,além de definir seu fenótipo e percentual das células anômalas na amostra .
Qual a importância da citometria de fluxo no diagnóstico das doenças hematopatológicas?
Por ser uma tecnologia rápida (quando compadado aos métodos moleculares e de anatomia patológica ),de alta sensibilidade e especificidade, a CMF e o método de escolha para o diagnóstico rápido de diversas entidades clinicas ,tendo começado a ser amplamente utilizada na clinica em meados da década de 80 durante a pandemia da AIDS para avaliar os linfócitos T CD4 e CD8 .Posteriormente ,com os avanços científicos ,a CMF passou a ter um papel essencial no diagnóstico de inúmeras patologias ,tanto em doenças malignas (como leucemia e linfomas ) como também em enfermidades não -neoplásicas.
O diagnóstico de doenças Hematológicas através da imunofenotipagem por CMF é ,sem dúvida ,uma área de grande demanda reprimida no nosso Pais em que os biomédicos podem atuar firmando os laudos e assumindo a responsabilidade técnica ,sempre que tenham adquiridas uma sólida formação superespecializada na área .