microbiologia clínica

Prévia do material em texto

Meios de Cultura e
Técnicas de Semeadura
Meios de Cultura
Uma das maneiras de se classificar os meios de cultura baseia-
se no conhecimento de sua exata constituição. Um meio
quimicamente definido é aquele no qual todos os constituintes
são conhecidos. Um meio complexo é aquele no qual a exata
constituição não é conhecida e podem conter extratos moídos ou
digeridos de animais, peixes, leveduras e vegetais, que fornecem
os nutrientes, as vitaminas e os minerais necessários.
Os meios de cultura também podem ser classificados
como líquidos, sólidos ou semi-sólidos. Os meios líquidos
(também conhecidos como caldos), assim como os semi-
sólidos, são acondicionados em tubos de ensaio. Já os meios
sólidos são preparados adicionando-se ágar ao meio líquido e
posterior colocação em tubos de ensaio ou placas de Petri, onde
o meio se solidifica.
Meios de Cultura
Meio de Cultura Enriquecido
Um meio enriquecido corresponde a um caldo ou meio sólido contendo
um grande suprimento de nutrientes que promove o crescimento dos
microrganismos fastidiosos. Geralmente são meios que foram
suplementados com materiais altamente nutritivos. O Ágar-Sangue é um
exemplo de meio sólido enriquecido utilizado rotineiramente nos
laboratórios de bacteriologia clínica.
Meio de Cultura Seletivo
O meio seletivo permite o crescimento de certos tipos de
microrganismos e inibe o crescimento de outros microrganismos. Ele
contém inibidores, geralmente antibióticos, que tornam inviável o
crescimento de certos microrganismos, sem inibir o crescimento do
microrganismoalvo. Por exemplo, o Ágar MacConkey inibe o
crescimento de bactérias gram-positivas, selecionando assim as
bactérias gram-negativas.
http://www.prismalab.com.br/produto/agar-sangue-base-frasco-500-g-k25-610005-marca-kasvi
http://www.prismalab.com.br/produto/agar-mac-conkey-%E2%80%93-marca-kasvi
Meios de Cultura
Meio de Cultura Diferencial
Utilizados para diferenciar microrganismos ou grupos de
microrganismos em um meio. A presença de determinados corantes ou
de produtos químicos nos meios produzirão certas alterações
características ou padrões de crescimento que são utilizados para a
identificação ou a diferenciação de microrganismos. Por exemplo,
o Ágar MacConkey é frequentemente utilizado para diferenciar vários
bacilos gram-negativos isolados de amostras de fezes. As bactérias
gram-negativas que são capazes de fermentar a lactose (um ingrediente
do ágar MacConkey) produzem colônias rosas, enquanto aquelas
incapazes de fermentar a lactose produzem colônias incolores. Assim, o
ágar MacConkey diferencia as bactérias gram-negativas fermentadoras
(LF) das não fermentadoras da lactose (NLF).
Os vários tipos de meios (enriquecido, seletivo, diferencial) não são
mutuamente exclusivos. Como vimos, o Ágar MacConkey é tanto um
meio seletivo quanto diferencial.
•G., ENGELKIRK, Paul, DUBEN-ENGELKIRK, Janet, and BURTON, Gwendolyn R. W.Burton Microbiologia para as Ciências da Saúde, 9ª edição.
•Guanabara Koogan, 2012.T., MADIGAN, Michael, MARTINKO, John M., DUNPLAP, Paul V., and CLARK, David P.Microbiologia de Brock, 12ª
edição. ArtMed, 2011
http://www.prismalab.com.br/produto/agar-mac-conkey-%E2%80%93-marca-kasvi
UTILIDADE: Usado para o isolamento de microrganismos não
fastidiosos. Verificação de hemólise dos Streptococcus spp. e
Staphylococcus spp. Usado na prova de satelitismo (para identificação
presuntiva de Haemophilus spp.).
Satelitismo: influenciam que 
certos seres recebem do 
desenvolvimentos de outros 
seres no mesmo meio 
INTERPRETAÇÃO: Cor original do meio: vermelho.
• Beta hemólise: presença de halo transparente ao redor das colônias
semeadas (lise total dos eritrócitos).
• Alfa hemólise: presença de halo esverdeado ao redor das colônias
semeadas (lise parcial dos eritrócitos).
• Gama hemólise (sem hemólise): ausência de halo ao redor das
colônias (eritrócitos permanecem íntegros).
UTILIDADE: Crescimento de microrganismos exigentes Haemophilus
spp., Neisseria spp., Branhamella catarrhalis e Moraxella spp.
INTERPRETAÇÃO: Cor original do meio: castanho escuro
(chocolate). Colônias de tamanho pequeno a médio, com pigmento
amarelo: sugestivo de Neisseria spp, Branhamella catarrhalis ou
Moraxella spp. ƒColônias pequenas e delicadas, com pigmento creme
claro: sugestivo de Haemophilus spp.
- Fazer esfregaço de todas as colônias suspeitas e corar pela técnica
de Gram, para confirmar se trata-se ou não de Neisseria spp.,
Branhamella catarrhalis ou Moraxella spp. (cocos Gram negativos
reniformes) ou Haemophilus spp. (bacilos Gram negativos delicados
e pleomérficos)
Doenças causadas por:
- Neisseria meningitidis: meningite (SNC) ou meningococcemia (infecção
generalizada
- Neisseria gonorrhoeae: gonorreia (doença inflamatória pélvica e
inflamação do epidídimo.), artrite séptica ou endocardite.
- Branhamella catarrhalis / Moraxella spp.: infecções do sistema
respiratório, ouvido médio, olho, sistema nervoso central e articulações de
humanos
- Haemophilus spp.: Haemophilus tipo b -> meningite ou septicemia
Neisseria meningitidis
Moraxella catarrhalis 
Haemophilus
Características de crescimento:
 Escherichia coli: colônias opacas, amarelas com ligeira cor amarelo escuro
no centro, com cerca de 1,25 mm de diâmetro, as não fermentadoras de
lactose colônias azuis
 Espécies de Klebsiella: colônias muito mucosas, cor variável de amarelo a
branco azulado
 Espécies de Proteus: colônias azul translúcidas, geralmente menor que E.coli
 Espécies de Salmonella: colônias planas, cor azul
 Enterococcus faecalis: colônias amarelas, com cerca de 0,5 mm de diâmetro
 Staphylococcus aureus: colônias amarelas, com cerca de 0,75 mm de
diâmetro
 Staphylococcus coagulase negativa: colônias amarelo palha e brancas
 Corynebacterium: colônias pequenas e cinza
 Lactobacilos: colônias pequenas e com superfície rugosa
 Pseudomonas aeruginosa: colônias verdes, com superfície prateada e
periferia rugosa
A incorporação de lactose ao
meio permite diferenciar se o
microrganismo é lactose
positiva (bactérias que
fermentam a lactose
produzem ácido que na
presença do indicador
vermelho neutro resultando
na formação de colônias de
cor rosa), e bactérias que não
fermentam a lactose formam
colônias transparentes.
Tissulfato de sódio e o 
citrato férrico permitem 
a detecção de H²S 
evidenciado por 
formação de colônias 
de cor negra no centro. 
ATENÇÃO!
UTILIDADE: Isolar bacilos Gram negativos
(enterobactérias e não fermentadores) e verificar a
fermentação ou não da lactose.
INTERPRETAÇÃO: Cor original do meio: rosa
avermelhado.
• Crescimento de bacilos Gram negativos.
• Colônias cor de rosa: fermentadoras de lactose.
• Colônias incolores: não fermentadoras de lactose. Não há
crescimento de cocos Gram positivos.
UTILIDADE: Selecionar e isolar espécies de Salmonella e Shigella, em
amostras de fezes, alimentos e água.
INTERPRETAÇÃO: Cor original do meio: vermelho alaranjado.
• Colônias com centro negro (H²S) ou colônias incolores: suspeita de
Salmonella.
• Colônias incolores: suspeita de Shigella spp.
• Colônias cor de rosa ou vermelho: suspeita de Escherichia coli ou
Klebsiella spp.
• As bactérias não fermentadoras de lactose são incolores. As bactérias
fermentadoras de lactose aparecem na cor rosa.
- Não autoclavar, pois a alta temperatura degrada o açúcar contido no meio.
RECOMENDAÇÕES:
 Como é um meio rico em proteínas, bactérias proteolíticas contaminam o meio,
liqüefazendo-o, para isto, deve-se fazer uma leitura com 24 horas de incubação
para tirar as culturas que possam ter contaminado;
 Não usar ovos velhos;
 Não quebrar mais que um ovo por vez, pois pode ter algum estragado e
contaminar os demais;
 Manter sempre mais que um béquer estéril para o caso de haver algum ovo
estragado;
 Não liberar culturas negativas com tempo inferior a 60 dias de incubação, pois
as micobactérias desenvolvem-se lentamente;
 Fazer umesfregaço do crescimento e corar pela técnica de Ziehl para confirmar
ser um Bacilo Álcool Ácido Resistente, pois alguns contaminantes podem
crescer com pigmento amarelo.