Clonagem,+Transgenia+Sexagem+espermática+2018-1

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CLONAGEM, TRANSGENIA E 
SEXAGEM ESPERMÁTICA 
CLONAGEM & TRANSGENIA 
 Esquema de Clonagem e Transgenia 
 Esquema no quadro 
CLONAGEM & TRANSGENIA 
Ao contrário do que muitos imaginam, a idéia 
inicial da clonagem não foi a produção de 
animais geneticamente idênticos com apelo 
comercial. O nascimento da ovelha Dolly foi, na 
verdade, o desenvolvimento da metodologia 
necessária para a criação de animais como a 
ovelha Polly. 
CLONAGEM & TRANSGENIA 
A ovelha Polly foi produzida seguindo o processo 
que gerou a Dolly, com a diferença de que foi 
introduzido na célula doadora de núcleo um 
gene humano. Assim, a ovelha resultante foi 
capaz de produzir leite com proteína humana, 
de valor terapêutico 
CLONAGEM 
 A técnica constitui na transferência nuclear de duas 
células. A célula receptora, normalmente um óvulo 
não-fertilizado, e a doadora, com o seu núcleo do 
indivíduo a ser clonado, são fundidas e implantadas em 
uma mãe de aluguel. Clones de bovinos, eqüinos, suínos 
e caprinos estão sendo anunciados com freqüência pela 
mídia. 
Ovelha Dolly primeira ovelha a ser 
clonada no mundo através da técnica 
de transferência nuclear de células 
somáticas, no ano de 1996 na 
Escócia 
TRANSGENIA 
 São organismos que por ação do homem tenham 
sequências de DNA de outra espécie inseridas no seu 
genoma, ou que seu patrimônio genético tenha sofrido 
qualquer alteração pensada e executada pelo intelecto 
humano. 
ovelha Polly (à esq.) é transgênica. 
Nasceu com um gene que produz 
proteína humana 
TRANSGENIA 
Os animais transgênicos são aqueles que 
tiveram seu patrimônio genético alterado com a 
introdução de genes de outras espécies que não 
a sua. Isto ocorre através da introdução de um 
gene de interesse no núcleo de um óvulo já 
fecundado. O objetivo é fazer com que o gene 
exógeno se expresse neste animal "hospedeiro". 
 Uma vaca clonada por cientistas argentinos com genes bovinos e humanos começou a produzir leite 
similar ao materno como forma de contribuir na luta contra a mortalidade infantil, informou nesta 
segunda-feira (11) a universidade responsável pelos estudos. 
 Os cientistas conseguiram assim incluir na vaca transgênica dois genes humanos no genoma 
bovino, o que permitiu que as duas proteínas estivessem presentes na glândula mamária durante a 
amamentação 
 inseriram dois genes humanos codificadores de duas proteínas presentes no leite humano, a 
lactoferrina e a lisozima, em Rosita Isa, uma vaca clonada no ano passado. 
 
http://ultimosegundo.ig.com.br/ciencia/leite+de+vaca+clonada+na+argentina+sera+mais+nutritivo/n1597022130861.html
TRANSGENIA 
Três principais metodologias são utilizadas 
para transferir um gene de interesse no genoma 
de um outro animal hospedeiro: 
TRANSGENIA 
TRANSGENIA 
TRANSGENIA 
TRANSGENIA 
 As técnicas de transgênese em animais visa 
basicamente quatro principais linhas de pesquisa: 
1. o estudo da regulação e expressão gênica 
2. a utilização de animais transgênicos como biorreatores 
de proteínas de importância biomédica 
3. a geração de modelos animais para estudos biomédicos 
e para xenotransplante 
4. a introdução de novas características genéticas 
importantes economicamente 
SEXAGEM ESPERMÁTICA 
 
 
 O sêmen sexado permite a programação no nascimento 
de machos ou fêmeas, de acordo com o objetivo de cada 
propriedade, seja ela produtora de leite ou carne 
(NEVES, 2006). 
 
 SEMÊN SEXADO NA BOVINOCULTURA LEITEIRA 
 Na atividade leiteira a manutenção de gestações e o 
nascimento de animais do sexo masculino é um dos 
fatores de diminuição da produtividade e aumento dos 
custos de produção. 
SEXAGEM ESPERMÁTICA 
 Apesar das taxas de prenhez apresentadas com sêmen 
sexado em vacas leiteiras serem inconsistentes, a 
maioria dos trabalhos realizados com novilhas 
leiteiras indica que a taxa de concepção após 
observação de cio e inseminação artificial com sêmen 
sexado, atinge taxas de prenhez em torno de 42 a 54%. 
SEXAGEM ESPERMÁTICA 
 DIFERENÇA NO CONTEÚDO DE DNA 
 A quantidade de DNA entre os cromossomos X e Y varia 
significativamente entre as espécies, sendo que nos 
bovinos, esta diferença no conteúdo de DNA pode chegar 
à cerca de 4,0% 
 Espermatozóide X ou feminino + 4,0% de DNA 
 Espermatozóide Y ou masculino => mais leve 
 Apesar desta diferença ser pequena, é possível medir o 
conteúdo de DNA de cada um dos espermatozóides com 
precisão suficiente para distinção entre espermatozóides 
X e Y 
 
SEXAGEM ESPERMÁTICA 
 Levando-se em conta a diferença no conteúdo de DNA, 
existem duas técnicas que podem ser utilizadas para a 
seleção do sexo dos espermatozóides: a centrifugação em 
gradiente de densidade e a citometria de fluxo 
 
Centrifugação em gradiente de densidade 
 
 O cromossomo X contém mais conteúdo de DNA e proteína 
nuclear que os espermatozóides com cromossomo Y, 
causando assim uma diferença de peso e, consequentemente, 
uma diferença na densidade entre os dois espermatozóides 
 
 Este método propiciou um enriquecimento de mais de 75% 
de espermatozóides X, na fração inferior e cerca da mesma 
quantidade de espermatozóides Y na fração superior. Após 
as duas centrifugações, os espermatozóides de ambas as 
frações não demonstraram nenhuma diferença significativa 
quanto à morfologia. 
 
 
 
 
 
 
SÊMEN SEXADO 
Centrifugação em gradiente de densidade 
 
 Recuperação média de 5,5% dos espermatozóides submetidos 
ao procedimento, além de selecionar as melhores células, 
com maior competência para motilidade espermática. 
 
 A indução da reação acrossômica demonstrou capacitação 
normal. 
 
 
 
SÊMEN SEXADO 
 Sexagem de espermatozóides; 
 
 Centrifugação em gradiente de densidade; 
 
 
 
SÊMEN SEXADO 
Figura 18: Amostra de sêmen centrifugada 
Fonte: www.ufrgs.com.br 
Citometria de fluxo 
 
 
 
 O citômetro de fluxo foi desenvolvido no Laboratório 
Nacional Lawrence Livermore pelo Dr. Daniel Pinkel, a 
principio o equipamento realizava medições precisas do 
conteúdo de DNA dos espermatozóides que passavam 
pelo processo. Porém, danificava muito os 
espermatozóides, levando ao desprendimento da cauda 
e membranas, antes mesmo de serem corados. 
 
 
SÊMEN SEXADO 
Citometria de fluxo 
 
 
 Tem como base, para sua aplicação, a maior quantidade 
de DNA presente nos espermatozóides femininos, tendo 
então mais de corante, devido a sua quantidade a mais 
de DNA corresponder a isso, então em razão dessa 
metodologia se torna capaz a separação das duas 
populações de espermatozóides com uma eficácia às 
vezes até acima de 90% 
 
 
SÊMEN SEXADO 
Citometria de fluxo 
 
 As gotículas com espermatozóides são expostas a um 
laser que emite uma fluorescência que permite uma 
análise e classificação do espermatozóide pelo 
computador, a gotícula de sêmen recebe uma carga 
elétrica antes de passar pelo fluxo eletrostático, para 
separação. 
 Os espermatozóides X recebem carga positiva e os 
espermatozóides Y recebem carga negativa 
 
SÊMEN SEXADO 
 Citometria de fluxo; 
 
2.3 SÊMEN SEXADO 
 
Figura 19: Citômetro de fluxo 
Fonte: Medalha (2008) 
Campos elétricos magnéticos 
Cristal vibrador 
 
Identificação do espermatozóide e injeção da carga elétrica 
Sêmen 
Colheita dos espermatozóides 
 (U$S 400.000 cada aparelho) 
SÊMEN SEXADO - CITOMETRIA DE FLUXO 
 
_ 
 
+ 
SÊMEN SEXADO - CITOMETRIA DE FLUXO 
 
SÊMEN SEXADO - CITOMETRIA DE FLUXO 
 
Limitações: 
 
 Apesar de esta técnica ter iniciado nos anos 80, várias 
limitações tecnológicas importantes impediram a 
sua comercialização por muitos anos. 
 
 Sem dúvida a redução da fertilidade foi o mais 
importante destes problemas. Resulta num impacto 
negativo na viabilidade e na longevidade do sêmen 
se a compararmos com as técnicas normais de 
criopreservação.SÊMEN SEXADO - CITOMETRIA DE FLUXO 
 
Limitações: 
 
 Além disso, o procedimento é extremamente lento e 
ineficiente. Para poder separar, o espermatozóide deve 
orientar-se precisamente para que passe através do 
laser e dos detectores fluorescentes no citômetro de 
fluxo. Devido a forma achatada da cabeça do 
espermatozóide bovino, 30 % deles se orientam 
corretamente e a metade destes são do sexo desejado. 
 
 Disto se deduz que somente entre 12 a 15 % dos 
espermatozóides que ingressam na máquina são 
recuperados como sêmen sexado, permitindo a sua 
possível comercialização.