Meio de Cultura e Identificação Agentes Infecciosos

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Meio de Cultura e Identificação Meio de Cultura e Identificação Meio de Cultura e Identificação Meio de Cultura e Identificação 
Agentes InfecciososAgentes Infecciosos
Prof. Dr. Bruno Jaegger Laranjeira
� Meios de Cultura
◦ Conjunto de substâncias, formuladas de maneira
adequada, capazes de promover o cresc. bacteriano, em
condições de laboratório.
◦ A maioria das bact. pode ser cultivada em laboratório,
Introdução
◦ A maioria das bact. pode ser cultivada em laboratório,
utilizando-se meios nutrientes;
◦ Diferentes espécies de bactérias, variam extensivamente
quanto as exigências mínimas de substâncias nutrientes;
Seleção dos Meios de Cultura
� Escolha dos meios de cultura para o processamento inicial 
das amostras = condicionada à flora patogênica desse 
local;
� Usado mais de um tipo de meio, no sentido de fornecer 
Introdução
� Usado mais de um tipo de meio, no sentido de fornecer 
condições de crescimento a todos os patógenos possíveis 
de estarem presentes;
Seleção dos Meios de Cultura
� Sítio da infecção = meios particularmente utilizados na 
rotina na semeadura primária;
� Procedimento mais utilizado = aquisição de meios pré-
fabricados e fornecidos de forma desidratada (pesagem 
criteriosa da qtde necessária ao volume desejado seguido 
Introdução
criteriosa da qtde necessária ao volume desejado seguido 
de dissolução e esterilização).
� Utilização de meios cromogênicos: identificação presuntiva 
de microrganismos
Seleção dos Meios de Cultura
� Formulação dos meios de cultivo
◦ Sólidos: ágar (cerca de 1 a 2,0 %); 
◦ Semi-sólidos: 0,075 a 0,5 % de ágar
Introdução
◦ Consistência intermediária:
� Em tensões variadas de oxigênio
� Verificação da motilidade
� Conservação de culturas; 
Seleção dos Meios de Cultura
� Líquidos (sem agentes solidificantes):
� ativação das culturas
� repiques de microrganismos
� Provas bioquímicas.
Introdução
Tipos de Meios de Cultura
� Diferencial:
◦ Quando contém substâncias que permitem estabelecer diferenças
entre microrganismos muito parecidos, evidenciada na mudança de
coloração ou na morfologia das colônias.
◦ Ex: Eosina Azul de Metileno, Ágar sangue.
Introdução
Ex: Eosina Azul de Metileno, Ágar sangue.
� Seletivo:
◦ São meios que contém substâncias que inibem o desenvolvimento
de determinados grupos de microrganismos, permitindo o
crescimento de outros.
◦ Ex: ágar Salmonella-Shigella (SS), ágar manitol salgado.
Agar Sangue
� A base deste meio é altamente nutritiva e promove um 
ótimo crescimento de todos os microrganismos 
relevantes;
� Meio base: ágar Columbia ou ágar BHI;
Meios Cultura
� Meio base: ágar Columbia ou ágar BHI;
� Suplementado de sangue desfibrinado de carneiro ou de 
cavalo, favorecendo a hemólise; 
Agar Sangue
� Meio não seletivo para cultivo primário da maioria dos 
Gram (+) e Gram (-);
� Permite verificar o padrão de hemólise.
Meios Cultura
� O sangue estéril é adicionado ao ágar (5%) após sua 
autoclavação. A adição deve ocorrer quando a solução 
estiver a 45-50ºC. 
Agar Sangue
Meios Cultura
Agar Sangue
Meios Cultura
S. pneumoniae
Agar Sangue
Meios Cultura
S. epidermidis
Micrococcus
Agar Sangue
Meios Cultura
S. pyogenes S. pyogenes 
S. aureus
Agar Sangue
� Pode ser fornecido em placas prontas para o uso.
� Controle de Qualidade: pH: 7,3 ± 0,2 
� Cor e aparência do meio preparado: 
Meios Cultura
vermelho escuro, opaco 
� Acondicionamento: sob refrigeração (2º a 8ºC) por 4 
meses.
Ágar Cled (Cystine Lactose Electrolyte Deficient) 
� Não seletivo e diferencial;
� Destinado ao isolamento e quantificação de colônias em 
amostras de urina. 
Diferencial para bactérias fermentadoras da lactose devido 
Meios Cultura
� Diferencial para bactérias fermentadoras da lactose devido 
a mudança de coloração do meio de verde para amarelo.
� Deficiente em eletrólitos não permitindo a formação do 
“véu” ou swarming de Proteus sp.
Ágar Cled (Cystine Lactose Electrolyte Deficient) 
� Aparência: verde
� Armazenamento: Invertidas entre 2 a 8ºC; armazenar de 
forma a permitir a circulação de ar entre as placas
Meios Cultura
Mac Conkey
� É um meio seletivo e diferencial para isolamento de 
bacilos Gram negativos entéricos;
Meios Cultura
Mac Conkey
� Os sais biliares e o cristal violeta presentes no meio 
inibem o crescimento de bactérias Gram (+) e algumas 
Gram (-) exigentes. 
� A lactose e o indicador de pH, vermelho neutro, são 
utilizados para detectar a degradação da lactose.
Meios Cultura
� Armazenamento: Invertidas entre 2 a 8ºC
Mac Conkey
� Nesse meio podemos diferenciar:
◦ Bactérias fermentadoras de lactose - colônias rosa com 
halos de precipitação como: E. coli, Klebsiella, Enterobacter; 
◦ Não fermentadoras de lactose - colônias transparentes 
Meios Cultura
◦ Não fermentadoras de lactose - colônias transparentes 
ou incolores como: Salmonella, Shigella, Proteus.
Ágar EMB (Eosina-azul-de-metileno) 
� Meio seletivo e diferencial;
� Pode ser usado no lugar do Macconkey;
� Isola o mesmo que o Macconkey;
Meios Cultura
� Os corantes eosina e azul de metileno inibem as bactérias 
g (+) e as g (-) exigentes;
� Em pH ácido, combinam-se, servindo de indicadores. 
Ágar EMB (Eosina-azul-de-metileno) 
Meios Cultura
Proteus, Salmonella
E.coli
Klebsiella, Enterobacter
Ágar Salmonella Shigella
� Altamente Seletivo e diferencial
� inibe a maioria dos coliformes e permite o crescimento de 
Salmonella e Shigella a partir de fezes, urina e alimentos 
frescos ou enlatados.
Meios Cultura
� As concentrações de sais biliares e citrato de sódio inibem 
todas as bactérias g (+) e coliformes;
Ágar Salmonella Shigella 
� Vermelho Neutro = indicador de pH ácido
� Tiossulfato = fonte de enxofre;
Meios Cultura
� Produção de gás sulfeto de hidrogênio = precipitado 
negro, formado com citrato férrico
Ágar Salmonella Shigella 
� Salmonella = colônias transparentes com centro negro.
� Shiguella = colônias incolores, sem enegrecimento;
� Aparência: Rosa Alaranjado
Meios Cultura
� Armazenamento: 
Invertidas entre 2 a 8ºC; armazenar de forma a permitir a 
circulação de ar entre os pacotes. pH= 7,4
Ágar Salmonella Shigella 
Meios Cultura
Ágar Salmonella Shigella 
Meios Cultura
K. pneumoniae E. coli
Salmonella sp.
P. mirabilis 
P. aeruginosa
Ágar Hektoen
� Seletivo
� É um meio direto para amostras fecais, com o objetivo de
aumentar o isolamento de Salmonella e Shigella.
� Elevadas concentrações de sais biliares inibe o
crescimento de g (+) e retarda o de muitas cepas de
coliformes;
Meios Cultura
coliformes;
Ágar Hektoen 
Meios Cultura
Sem cor 
Não fermentadores
Fermentadores de lactose
Amarelo – Salmão 
Produtores H2S 
Precipitado preto
Ágar Chocolate
� Meio Enriquecido
� Cultivo de organismos fastidiosos, como Neisseria sp., 
Haemophilus sp.e outros germes exigentes. 
� Para o isolamento de Haemophilus adiciona-se antibióticos 
(ex: bacitracina);
� Aparência: marron
Meios Cultura
� Aparência: marron
Ágar Chocolate
Meios Cultura
Ágar Chocolate
Meios Cultura
Ágar Müeller Hinton 
� Finalidade: 
Realização de antibiograma (teste de sensibilidade) pela 
técnica de difusão de discos segundo o CLSI. 
� É rico proteínas e carboidratos que fornece o substrato 
ideal para o desenvolvimento e crescimento de cepas 
Meios Cultura
ideal para o desenvolvimento e crescimento de cepas 
bacterianas de interesse clínico.
� Aparência: 
Âmbar claro
Ágar Müeller Hinton 
Meios Cultura
Ágar Müeller Hinton + Sangue 
� Finalidade: Facilitar o cresimento de microorganismos 
fastidiosos. 
� Streptococcus sp. 
Meios Cultura
Ágar Manitol 
� Seletivo e Diferencial
� Isolamento de Staphilococcus aureus de amostras biológicas 
como urina, secreções, feridas e exudatos.
Indústria alimentícia utilizado para 
Meios Cultura
� Indústria alimentícia utilizado para 
a identificação de Estafilococos em 
líquidos e produtos lácteos, 
carnes e derivados, incluindo 
conservas e pescados.Lowenstein-Jensen
� Componentes: ovos inteiros 
coagulados, sais definidos, 
glicerol e fécula de batata;
� Agente inibidor = verde 
Meios Cultura
� Agente inibidor = verde 
malaquita (Gram +);
� Meio para o isolamento de 
Mycobacterium tuberculosis.
Meios Cromogênicos
� Permite a identificação presuntiva de bactérias;
� Baseada nas diferentes colorações das colônias
bacterianas, causada pelas reações enzimáticas espécie ou
Meios Cultura
bacterianas, causada pelas reações enzimáticas espécie ou
gênero específico com substratos incorporados no meio
de cultura
Meios Cromogênicos 
Meios Cultura
Meios 
Cromogênicos 
Meios Cultura
Cromogênicos 
Caldo BHI
� Meio de enriquecimento;
� Permite o crescimento da maioria das bactérias.
Meios Cultura
Caldo Tioglicolato
� Meio enriquecido, adicionado de hemina e vitamina K;
� Não inibidor;
Meios Cultura
� Permite um bom desenvolvimento de todos anaeróbios 
encontrados com frequência em amostras biológicas.
Meios Cultura
Transporte
� Impede a multiplicação/mantém a sobrevivência;
� Conserva espécies de Haemophilus, Neisseria, Salmonella, 
Meios Cultura
� Conserva espécies de Haemophilus, Neisseria, Salmonella, 
Pneumococos e outros;
Meio Amies com carvão
� Critérios para crescimento:
◦ Nutrientes corretos
◦ pH ajustado
◦ Quantidade específica de oxigênio ou ausência
Meios Cultura
◦ Inicialmente ser estéril
◦ Incubado em temperatura adequada
� Bactérias não cultiváveis in vitro
◦ Mycobacterium leprae
◦ Treponema pallidum
� Passo 1: Semeio inicial das amostras
� Amostras clínicas (por exemplo, sangue, urina, fluido
cefalorraquidiano) são espalhados em placas contendo
meio de cultura sólido e líquido;
� Colônias isoladas de bactérias (visíveis a olho nu)
Semeio , Isolamento e Identificação de Microorganismos
� Colônias isoladas de bactérias (visíveis a olho nu)
aparecem após a incubação das placas por 24-48h.
� Semeio
Semeio , Isolamento e Identificação de Microorganismos
Semeio por esgotamento = obtenção de colônias isoladas
� Semeio 
Semeio , Isolamento e Identificação de Microorganismos
Contagem semi-quantitativas = alça calibrada de 0,001 
� Cultura...
Semeio , Isolamento e Identificação de Microorganismos
Meio de cultura Estufa Bacteriológia 24-48h
� Passo 1I:
� A observação das características dessas colônias em
relação a tamanho, forma, textura, cor e (se crescidas em
meio ágar sangue) reações de hemólise.
� Necessidade ou não oxigênio para crescer.
Semeio , Isolamento e Identificação de Microorganismos
� Necessidade ou não oxigênio para crescer.
� Fermentação de determinados açúcares.
Avaliação do Crescimento Bacteriano
� Meios de cultura sólidos: crescimento de colônias que 
podem estar separadas ou não, dependendo do tipo de 
semeio utilizado.
� Placas de Petri ou tubo:
Semeio , Isolamento e Identificação de Microorganismos
� Placas de Petri ou tubo:
◦ Cor
◦ Aspecto (mucosas ou não)
◦ Forma 
◦ Tamanho. 
Avaliação do Crescimento Bacteriano
� Cada colônia (em princípio) = multiplicação de uma só 
bactéria. 
� Diferentes espécies = diferenças mais visíveis em meios 
seletivos.
Semeio , Isolamento e Identificação de Microorganismos
seletivos.
� Passo III: as colônias isoladas são coradas pelo método de 
Gram e células individuais de bactérias são observadas ao 
microscópio.
� Passo IV: As bactérias são identificadas usando-se colônias 
Semeio , Isolamento e Identificação de Microorganismos
� Passo IV: As bactérias são identificadas usando-se colônias 
isoladas. 
Semeio , Isolamento e Identificação de Microorganismos
Coloração de Gram em Streptococcus.
Coloração de Gram em Escherichia coli.