Estreptococos Pneumoniae (1)

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FACULDADE UNIÃO DAS AMÉRICAS
 BIOMEDICINA
 
 EMANUELLY KREFTA
STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE
 
FOZ DO IGUAÇU
2019
SUMÁRIO
Caso Clínico	3
Coloração de Gram............................................................................................4
Provas utilizadas na identificação de cocos gram positivos........................6
Prova da Catalase...................................................................................6
 	Coagulase	7
Meio de Cultura - Procedimento Operacional Padrão	8
Semeadura em Meio (Placa de Petri).............................................................10
Staphylococcus aureus	11
Fechamento do Caso	12
Referências	13
Caso Clínico
Paciente V.H do sexo masculino, 66 anos, há 07 dias iniciou quadro de febre de 38,7°C associada a calafrios e tosse produtiva, com secreção purulenta. Relata ainda dispneia, que atualmente impossibilita moderados esforços, e perda ponderal de 2 Kg. Não possui dor torácica, sudorese ou outros sintomas associados. Não tem histórico familiar de doenças pulmonares ou neoplasias.
Exame Físico:
· Anictérico;
· Febril (38,5°C);
· Hipocorado (1+/4+); 
· Hidratado;
· Desorientado
Sinais Vitais:
· FC: 98 bpm; 
· FR: 30;
· PA: 130×85
Foi solicitada uma radiográfica do toráx:
 A radiográfica Demonstrou opacidade irregular do espaço aéreo em todo o pulmão direito.
Foi coletado o escarro do paciente e levado para analise de cultura.
Coloração de Gram – Procedimento Operacional Padrão
MATERIAIS:
· Swab 
· Lâmina estéril
· Suporte de coloração 
· Centrifuga 
· Microscópio 
· Corantes (cristal violeta, lugol, álcool-cetona, fucsina)
· Pipeta
· Solução fisiológica
· Bico de Busen
· Estufa
· Óleo de imersão
· Materifal biológico ou Cultura
· Vortex
METODOLOGIA:
1. Pipetar 400µL da amostra no micro tubo e completar com solução fisiológica até 1,5ml;
1. Centrifugar 3 minutos em 11.000 rotações;
1. Retirar a solução fisiológica após a centrifugação;
1. Colocar solução fisiológica novamente no tubo até 1,5ml;
1. Centrifugar 3 minutos em 11.000 rotações;
1. Retirar a solução fisiológica após a centrifugação;
1. Homogeneizar no Vortex;
1. Pipetar 20µL da amostra e depositar na lâmina espalhando em círculos;
1. Deixar a lâmina na estufa até secar a amostra;
1. Fixar a lâmina no fogo;
1. Colocar a lâmina sob o suporte corador;
1. Cobrir a lâmina com cristal violeta por 1 minuto;
1. Retirar o excesso;
1. Cobrir o esfregaço com lugol durante 1 minuto;
1. Descorar com álcool-cetona, até o descorante fluir límpido; 
1. Cobrir o esfregaço com solução de fucsina básica por 1 minuto;
1. Lavar com água com jato fraco;
1. Secar na estufa á 43ºC;
1. Colocar o óleo de imersão na lâmina corada e seca;
1. Visualizar em microscopia com objetiva de 100 X
A coloração de Gram é muito utilizada em bacteriologia permitindo a distinção entre bactérias gram positivas e gram negativas. A diferença entre os dois tipos de células é a estrutura da parede celular das bactérias. Assim a parede celular de bactérias gram positivas é formada por uma camada espessa de peptidoglicano, enquanto que a parede celular de bactérias gram negativas é formada por uma camada fina de peptidoglicano, rodeada por uma camada externa de lipopolissacarideo e proteína. Diferenças na permeabilidade destas membranas aos reagentes químicos levam a diferenças de coloração. As bactérias que se apresentarem em roxo, são classificadas como gram-positivas. As que se corarem em rosa a vermelho são classificadas como gram negativas.
RESULTADO: Presença de cocos Gram-positivos dispostos em cadeias, sugestivos de estreptococos.
Provas utilizadas na identificação de cocos gram positivos
PROVA DA CATALASE
Catalase é uma enzima que converte o peróxido de hidrogênio (H202) em água e oxigênio, a liberação do oxigênio se observa pela formação de bolhas. Quimicamente a catalase é uma hemoproteína, com estrutura similar a da hemoglobina, exceto que os 4 átomos de ferro na molécula estão na forma oxidada. A presença da catalase permite separar os estreptococos catalase negativa de outros cocos Gram-positivos produtores de catalase, por exemplo, estafilococos.
Meios e reagentes:
· Peróxido de hidrogênio 3% armazenado em frasco opaco sob refrigeração.
· Cultura de 10 a 48 horas do organismo a ser testado.
 Procedimento: 
Para esta prova, colocar algumas colônias em um tubo contendo aproximadamente 500 l de água oxigenada. 
A transferência das colônias pode ser feita com palito de madeira, agulha ou alça de inoculação.
Interpretação:
 Não havendo formação de bolhas, o teste é negativo e indicativo de Streptococcus.
Resultado:
Negativo, não houve formação de bolhas.
Meio de Cultura - Procedimento Operacional Padrão
INTRODUÇÃO 
O meio de cultura é uma substância nutritiva capaz de permitir o crescimento dos microrganismos em laboratório, e devem atender às exigências nutricionais das espécies a serem cultivadas. 
OBJETIVO
 Preparar diferentes meios de cultura para o cultivo de microrganismos.
MATERIAIS
· Autoclave
· Capela de fluxo laminar
· Micro-ondas
· Fita adesiva para Autoclave
· Papel SMS
· Barbante 
· Erlenmeyer
· Balança
· Água Destilada
· Placas de Petri
METODOLOGIA
 Pesar o pó, seguindo o protocolo indicado, e adicionar separadamente à água destilada no béquer, tomando-se o cuidado de homogeneizar a cada componente adicionado. Misturar no resto da água destilada que esta no erlenmeyer colocar o papel pardo e amarrar o barbante fechando o erlenmeyer. Aquecer a solução por 3 minutos no micro-ondas, após isso, colocar na autoclave para esterilização por 15 minutos a 121º C/1 atm.
ÁGAR SANUE
Um meio diferencial e seletivo indicado para secreções e fermentação de lactose. 
28g----------1000mL
 X-------------400mL
 X=11,2g
Método
· O Ágar sangue é feito a partir de ágar base + sangue, normalmente é usado o sangue de carneiro, mas nesse foi usado o sangue de um doador humano.
· É3 usado 50ml de sangue para 1l de ágar base
· Aquecer em micro-ondas ou placa aquecida agitando sempre para dissolver na água por 2 minutos;
· Auto clavar em erlenmeyer a meia rosca por 15 minutos a 121º C/1 atm. 
· Distribuir em placas ainda quente, antes de solidificar.
Semeadura em Meio (Placa de Petri) - Procedimento Operacional Padrão
1. Ligar o Bico de Busen;
2. Esterilizar a alça de platina e a placa de Petri no Bico de Busen (antes e depois da prática);
3. Coletar a amostra no meio de cultura com a alça de platina esterilizada;
4. Faça estrias em zig-zag, respeitando as linhas e utilizando da melhor forma possível toda a superfície da placa.
5. Realizar o procedimento sempre atrás de um Bico de Busen aceso para evitar contaminação.
6. Incubar em estufa á 36ºC, por 24horas, observando a placa.
Interpretação:
 Alfa-hemólise (α): é caracterizada por uma hemólise parcial, associada com a perda parcial de hemoglobina pelas hemácias, ocorrendo uma zona cinza-esverdeada no meio de cultura ao redor da colônia. Streptococcus pneumoniae e streptococcus viridans caracteriza-se por produzir este tipo de hemólise.
Beta-hemólise (ß): é caracterizada pela lise completa das hemácias que rodeiam a colônia, ocorrendo uma zona transparente (zona de lise total) ao redor da colônia. Os estreptococos Pyogenes e Agalactiae são denominados beta-hemolíticos. 
 Gama-hemólise (): é caracterizada pela ausência de hemólise. Cepas desses microrganismos não hemolíticos, ou d-hemolíticos, não causam modificação no meio de ágar sangue de carneiro.
Resultado: Alfa-hemólise (α)
Identificação de Estreptococos Alfa-hemolíticos
Teste da Optoquina
Finalidade: 
Diferenciação de Streptococcus pneumoniae de outros Streptococcus alfa hemolíticos.
Procedimento:
1. Suspender várias colônias puras da cepa alfa hemolíticas em solução salina a 0,85% estéril com densidade ótica de 0,08 a 0,1 ao comprimento de onda de 625 nm, ou correspondente a 0,5 da escala de McFarlan;
2. Umedecer um swab estéril nesta suspensão e fazer um esfregaçosemelhante ao do antibiograma, sobre 15mL de Peptona/Caseína/Soja/Agar (TSA), adicionado de 5% de sangue desfibrinado de carneiro;
3. Após a absorção da suspensão pelo meio de cultura, colocar um disco de optoquina na superfície do meio semeado, com o auxílio de uma pinça. Fazer leve pressão sobre os discos para melhor aderência;
4. Incubar a placa em posição invertida à 35-37ºC por 18-24 horas;
5.  Fazer as leituras dos halos de inibição formados, com auxílio de uma régua plástica. Halos de inibição com diâmetros de 14mm ou mais à volta de um disco de 6mm significa sensibilidade e identifica o Streptococcus pneumoniae. 
Resultado: Sensível para Streptococcus pneumoniae.
Fechamento do caso
Tipo de Material: escarro
Método: Foram usados sistema de isolamento e identificação.
Resultado: Presença de cocos Gram-positivos dispostos em cadeias, sugestivos de Streptococcus pneumoniae.
Streptococcus pneumoniae
O Streptococcus pneumoniae é uma bactéria pertencente à família Streptococcaceae, encontrada na mucosa da nasofaringe e orofaringe de seres humanos sadios. É o patógeno bacteriano mais comum em casos de pneumonia.
Crianças com menos de 2 anos e idosos a cima de 65 anos e portadores de doenças crônicas são vulneráveis e susceptíveis ao Streptococcus pneumoniae em todo o mundo. 
Para a prevenção da doença é indicada a vacina a contendo antígeno polissacarídicos capsular purificado de pneumococo é eficaz em indivíduos adultos jovens, mas naqueles particularmente susceptíveis, a eficácia é menor ou mesmo nula.
Para o tratamento é geralmente usado b-lactâmicos (penicilina ou ampicilina).
Referencias
MANTESE, Orlando C.. Prevalência de sorotipos e resistência antimicrobiana de cepas invasivas do Streptococcus pneumoniae. Jornal Pediatra. Minas Gerais, p. 538-540. jul. 2003.
 REY, Dr. Luís C.. A sensibilidade antibiótica do pneumococo e o tratamento da pneumonia na criança. Jornal Pediatra. Minas Gerais, p. 95-97. out. 2003.
SCHANDERT, Lygia. Pneumonia necrotizante. Relato de caso. Medicina de UrgÊncia, São Paulo, p.22-23, 21 jul. 2009
VIEIRA, Ataiza C.. Streptococcus pneumoniae: a study of strains isolated from cerebrospinal fluid. Jornal Pediatra. Minas Gerais, p. 72-76. mar. 2007.
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