Resumo- pratica quantificação bacteriana

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Prática 4 – Quantificação bacteriana
Qual a finalidade dos métodos de quantificação bacteriana?
· Acompanhar o crescimento de uma população bacteriana ao longo do tempo (mais lento, mais rápido)
· Verificar nível de contaminação bacteriana de diferentes amostras (medicamento, agua
· Efeito antibacteriano de uma substancia ou de um processo físico.
Métodos de quantificação:
· Depende da amostra a ser analisada; cultura bacteriana ou dos equipamentos disponíveis para esse ensaio.
· Contagem do número de células 
· Direta: levar volumes conhecidos diretamente ao microscópico unidade célula/volume de amostra
· Indireta: contagem de colônia em placa (meio sólido) ou técnica de número mais provável (meio liquido)
· Determinação da atividade celular
· Avaliação da atividade enzimática
· Concentração de um metabolito gerado pelo crescimento das células bacteriana
· Medida da respiração celular
· Determinação da massa celular
· Direta: pesagem dessa massa celular (peso seco ou úmido)
· Indireta: determinando N P C , que vão está diretamente relacionada a concentração celular e também técnicas de medidas de absorção de luz (células em suspensão em uma determinada amostra)
· Objetivos da prática:
Conhecer a concentração de células viáveis em uma dada suspensão bacteriana
Técnica utilizada: contagem de colônia em meio sólido
· Na prática:
· A partir de um tubo de ensaio com suspensão bacteriana , se inocula numa placa de petri e deixa incubar (tempo e temp. ideal) e posteriormente faz a contagem da placa e chega ao resultado de UFC/mL
· Dois métodos de dispersão da amostra no meio de cultura:
· Pour plate: pega um volume da suspensão e coloca em uma placa vazia de petri em seguida coloca ágar nutriente (estéril, fundido e resfriado) porem tem que estar liquido. Faz movimentos circulares com a placa, para homogeneizar, incuba (tempo e temp. ideal) e contar as colônias.
· Spread plate: pega um volume e verter na superfície de uma placa de petri com meio de cultura solidificado, com a alça de drigalski para espalhar a suspensão por toda superfície, incubação (37 ºC a 24h) contar as colônias
· Preparo das diluições decimais:
Quando não se sabe quantos células viáveis existem naquela amostra, se faz a semeadura, mas ocorre a diluição anteriormente.
Para se ter uma placa boa para visualização, não se deve ter mais do que 300 colônias por placa.
· Distribui uma solução salina (cloreto de sódio 0,85%) em volumes iguais em vários tubos de ensaio.
· Se faz a transferência de 1 mL para um tubo de solução salina com 9 mL. (1:10;1:100...)
· A cada diluição feita é necessário fazer o emplacamento.
· Até chegar em um ponto que terá um número de colônias contáveis.
· Não ter placas com colônias mais que 300 (por causa da sobreposição e nem menor que 25 (resultado de prováveis erros ao longo da técnica 
· Formula: UFC/mL media nº colonias X fator de diluição/ volume semeado
· Pour plate: media nº colônia X inverso da diluição/ volume.
· Independente do método utilizado para espalhar, o resultado final de concentração de células viáveis de uma amostra deve ser o mesmo.