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DIAGNÓSTICO LABORATORIAL EM MICOLOGIA CRESCIMENTO ISOLAMENTO DE FUNGOS • Ágar Sabouraud – cultivo, isolamento e identificação de fungos patogênicos e leveduras. • Crescimento fúngico em altas concentrações de carboidratos. • Período de incubação mínimo de 3 dias a 25°C. • Ágar Sabouraud glicose é o meio adequado para o isolamento de dermatófitos. • Ágar Sabouraud com cloranfenicol é o meio usado se deseja inibir o crescimento bacteriano e realizar contagem de fungos • Meios de cultivo mais utilizados em micologia: 1. Ágar Sabouraud com cloranfenicol (leveduras e fungos filamentosos) 2. Ágar PDA (batata-dextrose) (fungos filamentoso) 3. Ágar Mycobiotic=Mycosel=Ágar seletivo para fungos patogênicos (uso restrito=inibe vários fungos sensíveis à ciclohexidina, inclusive leveduras) DIAGNÓSTICO DE INFECÇÕES FÚNGICAS • Microscopia: biopsia de tecido lesado • Microscopia do fungo por microcultivo para fungos filamentosos, para identificação por aspectos morfológicos • A cultura é usada mais frequentemente no caso de oportunistas (candidíase), nem sempre útil, depende do local infectado • EX: isolar leveduras em hemocultura indica infecção grave, isolar em secreção vaginal, só tem significado se corresponder a sintomas típicos (fazem parte da microbiota vaginal). • A cultura é boa para patógenos primários como o H.capsulatum, porém seu crescimento é lento (diagnóstico demorado). • É recomendado sorologia para micoses profundas. FUNGOS: IDENTIFICAÇÃO DE ESPÉCIES CLÍNICAS • Fungos filamentosos: baseado na morfologia do micélio vegetativo e corpo de frutificação (bolores) • Além dos aspectos macroscópicos da colônia crescida em placa de cultivo contendo meios específicos para fungos, para observação dos aspectos microscópicos é necessário o cultivo em lâmina de microscopia para observação de estruturas • Microcultivo para identificação das espécies é mais complicada (micologistas treinados) MICROCULTIVO DE FUNGOS • Semear em um pequeno bloco de ágar colocado sobre a lâmina em uma câmara de cultivo (placa de petri forrada com papel úmido e ambiente estéril) • Cultivar por 7 dias, corar e montar a lâmina para observação • Permite observar estruturas intactas EXAME DIRETO DA AMOSTRA • “A fresco” entre a lâmina e lamínula • Após clarificação com KOH (10 a 20%) – filamentosos • Com tinta da China (naquim) • Coloração: esfregaços (Gram, Giemsa e outras) • Cortes histológicos (Mucicarmim de Mayer, Gomori-Grocott, H.E.) Aspectos Microscópicos • Leveduras com filamento (hifas) 1. Abundante: Candida spp. 2. Escasso: Candida spp. e outros gêneros (ex: hifas curtas, curvas=Malassezia spp) • Leveduras sem filamentação e sem cápsula: Candida spp.