AULA PRÁTICA EXTRAÇÃO DE DNA GENÔMICO - (banana)

Prévia do material em texto

• ATIVIDADE PRÁTICA SOBRE EXTRAÇÃO DE DNA GENÔMICO 
 
Objetivo: 
Mostrar que é possível realizar experimentos dentro das salas de aula, com 
materiais simples e em um ambiente com falta de estrutura e recursos. Além 
disso, extrair o DNA genômico de morango, bananas ou cebolas. 
 
Materiais: 
- Banana; 
- Detergente de cozinha 
- Sal de cozinha (NaCl) 
- Álcool; 
- Copo; 
- Colheres de chá; 
 - Recipiente para macerar o tecido; 
- Tecidos vegetais (banana); 
- Funil; 
- Filtro de papel ou pano “Perfex”; 
Biologia Molecular 
 
Metodologia: 
• Solução de extração: 
-Em um copo, faça uma solução contendo duas colheres de chá cheias de 
detergente, meia colher de chá de sal de cozinha e completa adicionando 50 mL 
de água). Misture bem até a completa dissolução dos materiais. 
* Extração: 
- Macere o tecido vegetal até criar uma massa homogênea; 
 - Adicione a “Solução de extração” ao material macerado até conseguir o 
aspecto de uma papa rala; 
- Prossiga macerando por mais 2 minutos, para que o DNA entre em solução; 
- Em seguida, filtre o material com o auxílio do pano “Perfex” ou filtro de papel 
com o funil e retire a parte aquosa; 
- Adicione à parte aquosa previamente purificada, duas vezes o volume 
correspondente de álcool, para adquirir o DNA. O álcool provoca a saída do DNA 
da solução, gerando um aglomerado; 
- Em solução, o DNA encontrasse completamente desnaturado (distendido) e 
por esse motivo, depois da adição do álcool, as moléculas de DNA desenovelado 
se embolam gerando grumos. Dessa forma, durante a precipitação alcoólica nota 
aparência fibroso do DNA, que pode ser retirado da solução com o auxílio de um 
bastão de vidro, por exemplo. 
 
Discussão: 
A extração de ácidos nucléicos, precisa inicialmente que o DNA seja liberado 
do interior dos núcleos celulares, sendo realizada a partir de processos físicos e 
químicos. Desta forma, o primeiro passo consiste na maceração, quebrando 
nesse caso as proteínas da banana. Porém, o DNA não está insolúvel, assim 
como todo o resto do material e é nesse momento que a solução de extração faz 
a diferença. O detergente tem como papel quebrar (lise) a membrana para que 
o conteúdo celular, incluindo as proteínas e o DNA se solte e se disperse na 
solução. Enquanto que o sal possui a função de contribuir os íons positivos que 
neutralizam a carga negativa do DNA, criando um ambiente favorável. 
Constatando que as soluções de extração são constituídas, geralmente, com um 
agente tamponante para regular o pH, um detergente para solubilizar as e, em 
alguns casos, desnaturar proteínas, sal para garantir a estringência iônica e água 
como solvente. 
Visto que os ácidos nucléicos são moléculas longas e altamente carregadas, 
uma grande força de repulsão entre essas moléculas será formada. Essa força 
de repulsão é impedida pela existência de sal no tampão de extração, pois os os 
sais em solução aquosa são vistos em sua forma iônica, os íons carregados irão 
relacionar com as moléculas em solução. Após a solubilização, o DNA é 
suspenso da mistura de moléculas orgânicas a partir do acréscimo de álcool. Se 
álcool estiver gelado, menos solúvel o DNA será, pois além de formar uma 
mistura heterogênea em ambiente salino, ele fará com que as moléculas do DNA 
se aglutinem, concebendo uma massa esbranquiçada e filamentosa.