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25/04/2012 1 Processo Fermentativo Microrganismo Meio de cultura Condução do processo Recuperação do produto Empregar meios de cultura baratos, mas que o microrganismo encontre condições adequadas para realizar a conversão pretendida. Aspectos biológicos e econômicos Produção de etanol no Brasil: 15 bilhões de litros por ano. A utilização de meio de cultura industrialmente adequado é tão importante quanto o desenvolvimento de um microrganismo apropriado na microbiologia industrial. Os meios líquidos são mais empregados na industria porque requerem menos espaço, são mais simples de se adequarem à engenharia de processos, além de reduzir o custo com a aquisição do ágar ou outros agentes solidificantes. Meio de cultura Carbono Nitrogênio Minerais Fatores de crescimento Água Componente Bactéria Levedura Bolores Carbono 48 (46 -52) 48 (46 – 52) 48 (45 -55) Nitrogênio 12,5 ( 10 – 14) 7.5 (6 – 8,5) 6 (4 – 7) Proteína 55 (50 – 60) 40 (35 – 45) 32 (25 – 40) Carboidratos 9 (6 -15) 38 (30 – 45) 49 (40 -55) Lipídeos 7 (5 – 10) 8 (5 – 10) 8 (5 – 10) Ácidos Nucléicos 23 (15 – 25) 8 (5 – 10) 5 (2 – 8) Cinzas 6 (4 – 10) 6 (4 – 10) 4 (4 – 10) Fósforo 1,0 – 2,5 Enxofre e magnésio 0,3 – 1,0 Potássio e sódio 0,1 – 0,5 Ferro 0,01 – 0,1 Zinco, cobre e manganês 0,001 – 0,01 Composição média dos microrganismos (% peso seco). Laboratório: glucose Indústria: carboidratos complexos, hidrocarbonetos, alcoóis, ácidos orgânicos. 0,5 g de células / g de glucose (condições aeróbicas) Bactéria: 12,5 g de N / 100 g de células Levedura: 7,5 g de N / 100 g de células São necessários para atividade enzimática e incluem P, S, Mg e Fe. Como elementos traços incluem Mn, B, Zn, Cu e Mb. Vitaminas, aminoácidos e nucleotídeos devem ser adicionados somente se o organismo não for capaz de sintetizá-los. Meio de cultura industrial geralmente não é composto por reagentes químicos puros, a menos que o custo do produto final justifique o seu uso. 25/04/2012 2 Alguns componentes de meios de cultura brutos são responsáveis por atributos sensoriais de um produto. 1. Custo do material 2. Pronta disponibilidade e custo de estocagem 3. Custo com transporte 4. Disponibilidade de resíduos regulada pelo governo 5. Uniformidade de qualidade e facilidade de padronização (malte e melaço) 6. Composição química adequada (necessidade do microrganismo) 7. Presença de precursores relevantes (cerveja escura, clorotetraciclina, etc.) 8. Atender as exigências de crescimento do microrganismo � Tropofase: fase de crescimento microbiano � Idiofase: fase de produção ou formação do produto � O milho limpo é transportado para grandes tanques de maceração, em aço inox, onde ficará entre 24 a 48 horas, em água aquecida (51 a 54ºC), contendo dióxido de enxofre dissolvido (0,1 a 0,3%). Ao se concluir a fase de maceração, a água é drenada e concentrada em evaporadores de múltiplos efeitos para produzir o líquor concentrado. � O ácido sulfúrico diluído, formado pela interação do dióxido de enxofre e a água evita um excessivo crescimento bacteriológico, mas estimula o crescimento de Lactobacillus spp., além de ajudar na separação do amido e das proteínas. A fermentação láctica termina quando o SO2 chega a 0,04% e a concentração de ácido láctico a 1,0 e 1,5%. Carboidratos Nitrogenio Vitaminas Sais minerais Composição química muito variada... É produzido pela concentração e secagem do filtrado que é constituído de um material sólido proveniente da fermentação de cereais para produção de bebidas destiladas como o whisky . Componentes % Umidade 5 Proteina 27 Lipídeo 9 Fibra 5 Carboidratos 43 Cinzas (K, Na, Mg, CO3 e P) 11 �As sementes são aquecidas antes da extração do óleo que é utilizado como alimento, anti-espumante nas indústrias de fermentação e na produção de margarinas. �O resíduo desse processo é rico em carboidrato (30%) e nitrogênio (11%) e pode ser usado como ração animal. O nitrogênio é mais complexo que o encontrado na água de maceração do milho e não é aproveitado pela maioria dos microrganismos, exceto para os actinomicetos. �Muito empregado na produção de antibióticos (tetraciclinas e streptomicinas). �É um resíduo da produção de açúcar e uma fonte de açúcar muito utilizado em fermentações industriais para a produção de álcool, acetona, ácido cítrico, glicerol e leveduras. �Existem dois tipos de melaços: da cana e da beterraba. Componente Melaço de Beterraba % (m/m) Melaço de Cana % (m/m) Àgua 16,5 20,0 Açúcar 53,0 64,0 Sacarose 51,0 32,0 Frutose 1,0 15,0 Glucose - 14,0 Rafinose 1,0 - Compostos nitrogenados, ácidos e gomas 19,0 10,0 Cinzas 11,5 8,0 Composição média dos melaços de cana e beterraba. 25/04/2012 3 � Para a produção de fibras de celulose são necessárias etapas de hidrólises da hemicelulose e lignina gerando um efluente rico em hexoses e pentoses. � Esses efluentes são usados como meio de crescimento de microrganismos, no entanto são enriquecidos com sais de amônio e uréia para a produção de álcool e leveduras. Mandioca Batata doce Inhame Arroz Sorgo Milho Amendoim Sangue Farinha de peixe � Isolamento a partir de recursos naturais; � Compra em coleções de culturas; � Obtenção de mutantes naturais; � Obtenção de mutantes induzidos por métodos convencionais; � Obtenção de microrganismos recombinantes por técnicas de engenharia genética.
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