Gabriel de Jesus Santos - Bioquimica 1

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UNIVERSIDADE ESTADUAL DO SUDOESTE DA BAHIA – UESB 
CURSO DE BACHARELADO EM FARMÁCIA 
 
 
 
GABRIEL DE JESUS SANTOS 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
RELATÓRIO DE PRÁTICA II 
Titulação Potenciométrica de Aminoácidos 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
JEQUIÉ – BA 
2021 
GABRIEL DE JESUS SANTOS 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
RELATÓRIO DE PRÁTICA II 
Titulação Potenciométrica de Aminoácidos 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
JEQUIÉ – BA 
2021 
Relatório apresentado disciplina de Bioquímica 
I, ministrada pela discente Luciana Amaral de 
Faria Silva como forma avaliativa parcial do 
curso de Bacharelado em Farmácia – campus 
Jequié. 
1. INTRODUÇÃO 
 
 
“Em química, um aminoácido é qualquer molécula que contém simultaneamente grupos 
funcionais amina e ácido carboxílico. Em bioquímica, este termo é usado como termo curto 
e geral para se referir aos aminoácidos alfa: aqueles em que as funções amino (NH3
+) e 
carboxila (COO-) estão ligadas ao mesmo carbono” (Departamento de biologia celular e 
molecular. Roteiro de aulas práticas. Instituto de biologia). Podendo também ser chamado 
de carbono quiral, não estando pressente em apenas um aminoácido: a glicina, que possui 
em sua cadeia lateral a presença de um hidrogênio, sendo assim, a glicina pode ser 
considerada um aminoácido de estrutura simples se comparado com os outros 19 α-
aminoácidos, totalizando então 20. 
A importância em saber as propriedades ácido-base se dá ao fato de possibilitar a 
compreensão das técnicas que devem ser usadas na composição e, ainda, a sequência de 
proteínas no estudo tanto químico como biológico, analisando e correlacionando a função 
da substância nos organismos. Logo, se faz necessária a pratica de titulação potenciométrica 
em tais componentes importantes no sistema biológico, por possibilitar entender o 
comportamento ácido-base dos aminoácidos em soluções aquosas. Vendo que, cerca de 70% 
do corpo humano é composto por água, o saber titulometrico se faz importânte, desta forma, 
a curva de titulação mostra o comportamento do aminoácido impregnado na análise em 
diferentes pHs, servindo então como forma de entendimento e interpretação visual, 
indicando o momento de desprotonação ou protonação de tal espécie bioquímica. 
Tem-se abaixo a curva titulométrica de dois aminoácidos, o glutamato e a glicina, 
respectivamente. Na prática empregada, será a glicina o aminoácido a ser analisado por 
prática titulométrica. 
 
Imagem 1. Titulação potenciométrica do glutamato. 
 
 
 
 
 
2. FUNDAMENTO DO MÉTODO 
 
 
O método prático do experimento, consiste na identificação de reação das espécies ao 
adicionar um ácido ou base forte, e como tal espécie irá reagir a essa adição, utilizando a 
glicina como aminoácido. Tendo como objetivo, compreender a aplicação da titulação em 
aminoácidos, determinando sua acidez e/ou alcalinidade. Depois de titular a amostra até o 
ponto em que os grupos carboxila e amino estão completamente desprotonados, a mudança 
no valor de pH é obtida. 
O método consistiu em passos de pipetagem de 20mL da solução de glicina a 0,02M, 
sendo necessária a dupla pipetagem, pois no laboratório não possuía a pipeta de 20 mL, 
apenas de 10 mL. Em um béquer, foi separado por pipetagem ainda, 1 mL de HCl a 1M. 
A partir dessa etapa, foi adicionado 5 gotas de indicador azul de bromotimol (usado em 
práticas bioquímica por apresentar ponto de viragem adequado para tais métodos, sendo um 
ácido fraco) à solução de glicina e HCl que foram na etapa anterior misturadas, tornando-se 
solução. Como a prática envolve a obtenção de valor de pH, e para melhor alcance do 
objetivo o pHmetro foi usado, sendo necessária então sua preparação lavando e hidratando-
o com água destilada, abordada com maior especificidade na pratica já realizada de 
“pHmetro e solução tampão”, após preparação do equipamento, foi medido o pH da solução 
sem adição alguma do agente titulante de tal prática, NaOH. Foi encontrado o valor de pH 
2,56, e assim, anotado para construção da tabela e gráfico de titulação. 
Imagem 2. Titulação potenciométrica da glicina. 
 
O agente titulante NaOH a 0,1M foi posto com uma pipeta, a cada mL adicionada foi-
se então anotado o valor de pH, lavando com cuidado o pHmetro em todas etapas de adição, 
para que não houvesse influência de fatores como presença de H+ da solução anteriormente 
anotada, obtendo assim os valores listados posteriormente em tabela. 
 
 
3. DISCUSSÃO DOS RESULTADOS 
 
 
 
Montagem da tabela 
 
 
Através dos experimentos já feitos, o comportamento ácido-básico da glicina pode ser 
analisado por titulação potenciométrica com solução de NaOH 0,1 mol/L, tal método 
possibilitou observar o ponto de inflexão da solução por meio da mudança de cor mediada pelo 
indicador azul de bromotimol e, ainda, fornece a estrutura gráfica da curva de titulação do 
aminoácido para identificar as constantes de ionização do grupo carboxila (pKa1) e do grupo 
amino (pKa2), ao adicionar o NaOH foi-se então anotado o valor em cada adição e formulado 
na tabela abaixo: 
 
 
 
Montagem do Gráfico: 
 
 
A partir da medição do pH após a adição de 0,1 mol / L de NaOH, por vez, a solução 
contendo glicina, HCl e o indicador azul de brotimol, a curva de titulação do aminoácido pode 
ser estabelecida. 
 
Etapas de adição de 1 mL da solução de NaOH 
mL adicionada 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 
pH obtido pH 
2,56 
pH 
2,92 
pH 
3,29 
pH 
4,63 
pH 
7,13 
pH 
7,2 
pH 
9,36 
pH 
9,9 
pH 
10,29 
pH 
10,41 
pH 
11,11 
 
 
 
Logo, no primeiro ponto - pH de 2,56, a glicina possui um grupo carboxila (-COOH) e 
um grupo amino protonado (-NH3
+), possuindo carga liquida de +1, e, ainda, quando 
alcalinizada (ou seja, NaOH) é adicionado à solução, a espécie começa a sofrer desprotonação, 
já no segundo ponto - pH de 2,92, há uma quantidade igual de grupos carboxila protonados e 
desprotonados do aminoácido no meio, que é o ponto característico de igualdade entre pH e 
pKa deste grupo. Ainda assim, após o grupo carboxila ser completamente desprotonado e 
NaOH ser adicionado a 1 mL por vez, o segundo grupo (amino), começa a se desprotonar, e no 
sétimo ponto – pH. Indicando o zwitteriôns equivalentes e substâncias com grupos amino 
desprotonados, que são caracterizadas no pKa2, onde o pH é igual ao pKa do grupo. 
A partir da definição do pKa de todos grupos ionizável da glicina, foi possível determinar 
o ponto isoelétrico (pI) - carga líquida média, pela fórmula: 
 
𝑝𝐼 =
𝑝𝐾𝑎1 + 𝑝𝐾𝑎2
2
= 6,14 
 
Finalmente, no 11° ponto, o grupo amino da cadeia lateral (R) é completamente 
desprotonado para formar uma glicina completamente desprotonada com uma carga líquida 
média igual a -1. 
Portanto, a aplicação da titulação potenciométrica foi concluída, sendo possível 
identificar o pKa1 e o pKa2 do aminoácido glicina em dada concentração e seu ponto isoelétrico 
(pI). A construção do gráfico é importante, vendo que dessa forma é possível visualizar e assim 
identificar as espécies e suas manifestações ácido-base nos meios. Pode-se destacar a diferença 
do gráfico titulométrico do referencial teórico, podendo ser salientada pela baixa concentração 
do aminoácido, ou ainda, possível erro do operador. 
2,56 2,92
3,29
4,63
7,13 7,2
9,36
9,9 10,29 10,41
11,11
0
2
4
6
8
10
12
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
P
H
NaOH em mL
CURVA DE TITULAÇÃO
Gráfico 1. Titulação da Glicina. 
REFERÊNCIAS 
 
I. Departamento de biologia celular e molecular. Roteiro de aulas práticas. Instituto de 
biologia. Universidade federal fluminense. Encontrado em: http://gcm.uff.br/wp-
content/uploads/sites/95/2017/02/Apostila.pdf. Acessado em: 15 de abril de 2021. 
 
II. NELSON, D. L.; COX, M. M. Princípios de Bioquímica de Lehninger. 6. ed. Porto 
Alegre: Artmed, 2014. 
 
 REFERÊNCIA VISUALFigura 1. MILAGRES, Adriane. Titulação – Aminoácido Glutamato. Universidade de São 
Paulo. Sistemas EEL. São Paulo. 2020. Encontrado em: 
http://sistemas.eel.usp.br/docentes/arquivos/427823/LOT2007/Resumo%20-
%20titulacao%20aa.pdf. Acessado em: 16 de abril de 2021. 
 
Figura 2. ALMEIDA, Rodrigo Volcan. Aminoácidos Propriedades físico-químicas. Slide 
36. Universidade Federal do Rio de Janeiro. DBq – IQSlide Player. Encontrado em: 
https://slideplayer.com.br/slide/11200045/. Acessado em: 15 de abril de 2021.