Relatório Dosagem de Proteínas Pelo Método do Biureto

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Coordenadoria de Biotecnologia
Curso de Bioquímica
Prática: Dosagem de Proteínas Pelo Método do Biureto
Alunos: Lana Gomes; Lucas Oliveira; Yasmin Lima
Turma: FM161
Professores: Ana Claudia Schiefler; Marcio Loureiro
Data da realização da prática: 09/04/2021
Data da entrega do relatório: 30/04/2021
Avaliação:
Critérios:
Nota:
Apresentação
Introdução
Objetivos
Métodos
Resultados
Discussão
Bibliografia
Total:
I. Introdução: 
A espectrofotometria é uma técnica muito utilizada para a determinação da concentração de proteínas. Essa técnica consiste na absorção da energia emitida por um espectro de luz eletromagnético por parte da amostra utilizada. Uma fonte de luz será concentrada em um colimador, que irá atingir um monocromador, essa luz será decomposta em seus diferentes comprimentos de onda, um deles será selecionado por um seletor λ, que irá atingir a amostra contida na cubeta. Uma parte da luz será absorvida, a parte não absorvida será detectada por uma fotocélula, esse equipamento fará a diferença entre a luz que foi absorvida e a luz transmitida e nos dará um valor que denominaremos de absorbância. 
Absorbância é a capacidade de um material de absorver a luz. Existem duas leis que reagem a esse fenômeno, a Lei de Lambert, que diz que um feixe de luz ao atingir uma amostra será absorvido, e a Lei de Beer, que diz que a quantia de luz absorvida depende da concentração dessa amostra. Ao juntar as duas leis, temos a Lei de Lambert-Beer que consiste na fórmula: A= . C. l. Onde: é o coeficiente de extinção molar; C é a concentração da amostra; l. é o caminho óptico da luz na amostra. Nesse cálculo, teremos a concentração e a distância como constantes, já que para as amostras poderem ser comparadas, devem ter os mesmos componentes em concentrações que podem variar, porém o deverá ser o mesmo, e serão analisadas no mesmo equipamento e utilizando a mesma cubeta, tendo assim o mesmo valor de l para ambas. Podemos notar então que a absorbância estará diretamente ligada à concentração da amostra.
Aa proteínas não absorvem luz visível e por esse motivo precisam passar pelo método colorimétrico, onde elas serão coradas com agentes específicos em soluções alcalinas que facilitam a reação desses reagentes com a proteína. O método colorimétrico utilizado nessa prática será o do Biureto. O principal composto, como já mostra o nome, é o reagente biureto, a base da reação é a ligação do cobre às ligações peptídicas da proteína. O cobre irá se ligar com quatro moléculas de nitrogênio que estão nas ligações peptídicas, e é essa ligação que dará cor a solução, possibilitando assim a visualização das concentrações pelo espectrofotômetro. 
II. Objetivo
III. Material e Métodos
III.A. Material
Material:
· 7 Tubos de Ensaio
· Micropipeta P1000
· Micropipeta P5000
· Ponteiras
· 1 Estante de tubos
· 1 Becker de 50mL 
· 6 Cubetas
· Espectrofotômetro 
 Soluções:
· Solução Padrão de Caseína (5mg/mL) diluída em PBS Ph 7,4.
· Amostra de Caseína de concentração desconhecida diluída em PBS Ph 7,4.
· Reagente do Biureto:
	Reagentes:
	Concentração:
	CuSO4. 5H2O
	0,15% p/v
	Tartarato duplo de sódio e potássio
	0,60% p/v
	KI
	1,00 p/v
	NaOH
	1,00 mol/L
 
 
· PBS Ph 7,4 (Tampão fosfato com salina em pH 7,4)
	Reagentes:
	Concentração:
	KCL
	2,680 mmol/L
	KH2PO4
	1,470 mmol/L
	NaCl
	0,137 mmol/L
	Na2HPO4. 7H2O
	8,060 mmol/L
 III.B. Métodos
 Foram adicionados 7,0ml da solução padrão de caseína a um tubo de ensaio e 10ml da solução de PSB em um Becker, ambos foram levados a bancada para a preparação dos tubos de ensaio que foram rotulados de 1 a 7 conforme mostra a tabela abaixo:
	
Tubo
	
PSB (mL)
	Solução Padrão de Caseína (mL)
	Solução [?] de Caseína (mL)
	
Biureto (mL)
	1 (B)
	2,0
	-
	-
	5,0
	2
	1,5
	0,5
	-
	5,0
	3
	1,0
	1,0
	-
	5,0
	4
	0,5
	1,5
	-
	5,0
	5
	-
	2,0
	-
	5,0
	6
	-
	-
	2,0
	5,0
 Após a preparação dos tubos, todos foram homogeneizados e incubados em temperatura ambiente durante 15 minutos.
 Passado o tempo de incubação, o conteúdo de cada tubo foi transferido para uma cubeta e levado ao espectrofotômetro no comprimento de onda a 540nm, para a obtenção dos valores da absorbância. 
 IV. Resultados
 V. Discussão
VI. Bibliografia
[1] SILVA, Sandro do Nascimento; SILVA, Carlos Roberto Rosa. Bioquímica. Pernambuco: Edufrpe, 2010. 113 p. Disponível em: http://pronatec.ifpr.edu.br/wp-content/uploads/2013/06/Bioquimica.pdf. Acesso em: 28 abr. 2021.
[2] CASTRO, Danielly de et al. Espectrofotometria: aula prática. Guarapuava: Unicentro, 2012. 11 p. Disponível em: https://pt.slideshare.net/Danielly27/relatorio-5. Acesso em: 28 abr. 2021
 
 
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