_Relatorio aula pratica - Extracao DNA ERE 2021 (Rayssa, Valeria e Vinicius)

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UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA (UEFS)
RELATÓRIO AULA PRÁTICA
Extração simplificada de DNA
COMPONENTES: Rayssa Nascimento Batista, Valéria Oliveira dos Santos e
Vinícius Calda Santos
FEIRA DE SANTANA
2021
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA (UEFS)
RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA
FEIRA DE SANTANA
2021
INTRODUÇÃO
A extração de DNA é o primeiro passo para utilizá-lo em técnicas moleculares.
Neste aspecto, a qualidade e integridade do DNA são fundamentais para o sucesso nas
etapas posteriores. Existem diferentes protocolos de extração de DNA que variam em
função da espécie e do tecido a ser utilizado. A maneira de coletar e acondicionar o
tecido, assim como o estado do mesmo são fundamentais para o sucesso da extração.
Um dos aspectos importantes é que a quantidade de DNA necessária varia em função da
técnica molecular a ser utilizada (Bered, 1998). Atualmente, o termo DNA ganhou
tamanha abrangência que atrai os noticiários. Portanto, a proposta de levar a extração de
DNA para a sala de aula pode ser uma experiência reveladora, despertando assim a
curiosidade dos alunos.
Entre as muitas modalidades didáticas para um aprendizado mais eficiente que
permitiria uma melhor associação entre assuntos relacionados ao DNA e à vivência
cotidiana, experiências de extração de DNA a partir de material vegetal em sala de aula
têm sido uma das ferramentas mais popularmente aplicada (Borges e Lima, 2007;
Bionet, 2009; Galhardo, 2009; ITQB, 2009; Lomax, 2009; NCBE, 2009a; 2009b). Uma
das estratégias ou procedimentos mais utilizados pelos professores de Ciências/Biologia
em sala de aula são as aulas práticas, apontadas pelos próprios professores como um dos
melhores recursos para um diálogo entre teoria e prática. A escolha das modalidades
didáticas ou estratégias, envolve a tomada de decisões com relação ao tipo e à natureza
das atividades e seu melhor momento de aplicação; os recursos e espaço físico
necessários e disponíveis; e principalmente os papéis destinados ao professor e aos
alunos, ou seja, como os alunos aprendem e como aprenderiam melhor. As plantas vêm
tornando-se candidatas apropriadas para serem utilizadas na extração de DNA em sala
de aula devido à facilidade de obtenção de material, praticidade na manipulação e
disponibilidade de protocolos simples, além de existir restrições legais para trabalhar
com material animal em sala de aula. No entanto, a utilização indiscriminada dos
protocolos para qualquer tipo de vegetal ou parte do vegetal tem originado a massiva
difusão de equívocos recorrentes do correto procedimento e na identificação do DNA.
OBJETIVO
Objetivo geral
● Esse relatório teve como objetivo, extrair DNA a partir de diversas fontes
vegetais, tais como banana, cebola, hortelã e tomate para a visualização do
material genético, promovendo um melhor entendimento a respeito da
descoberta do DNA.
Objetivos específicos
● Entender os conceitos básicos de Genética Molecular.
● Demonstrar e testar como é feito a identificação e extração de DNA de diversas
fontes de vegetais como um bom modelo para a atividade prática em questão.
● Promover um melhor entendimento sobre o assunto, com descobertas que
abordam as temáticas voltadas para extração de DNA e Genética Molecular.
MATERIAIS E MÉTODOS
Experimento com tomate
● Tomate;
● Água;
● Sal (NaCl);
● Detergente de cereja;
● Álcool 99% gelado.
● 3 frascos de plásticos transparentes e 1 pilão;
● 1 machucador de temperos;
● Peneira plástica.
Experimento com banana, cebola e hortelã
● Banana, cebola, e hortelã;
● Água;
● Sal (NaCl);
● Detergente neutro;
● Álcool 94% gelado;
● 3 Frascos iguais de vidro transparente (copos);
● Peneira;
● 1 saco plástico;
● 1 machucador de tempero e 1 pilão.
Imagem 1. Materiais do experimento com cebola
Imagem 2. Materiais do experimento com banana e hortelã
Imagem 3. Pote para maceração do tomate
RESULTADOS E DISCUSSÕES
O processo de extração de DNA envolve três etapas básicas, cada qual com a
sua importância: lise celular; remoção de proteínas e outros fragmentos de material do
DNA; precipitação do DNA.
A maceração possibilitou o aumento da superfície de contato na qual atuou a
solução de lise (tampão), promovendo o rompimento da parede celular e da membrana
citoplasmática. A filtração permitiu a separação das paredes celulares e membranas
citoplasmáticas dos demais conteúdos celulares existentes no meio.
A presença do tampão foi essencial na etapa de extração, onde as moléculas de
detergente desestruturaram as membranas plasmática e nuclear dos vegetais, separando
as grandes moléculas dos fosfolipídeos, e como consequência desse processo, o DNA e
as proteínas (conteúdo nuclear) ficaram dispersos na solução. Enquanto isso, o sal foi
responsável por proporcionar um ambiente favorável para a extração do DNA. Isso
acontece porque o sal, após ser dissolvido, sofre dissociação e contribui com íons Na+ e
Cl-, que neutralizam, respectivamente, a carga negativa do grupo fosfato do DNA e a
carga positiva das proteínas que estavam ligadas ao DNA. Assim, a molécula de DNA
fica estável e não sofre repulsão de cargas entre si, favorecendo sua aglomeração.
A adição do álcool gelado permitiu a precipitação do DNA, devido a sua baixa
solubilidade neste solvente (quanto mais gelado, menor a solubilidade e melhor o
processo de extração). Nele também o DNA aumenta sua compactação e tende a formar
fibras, filamentos espessos e mais compridos, deixando a molécula mais visível.
Imagem 4 . Polpa da cebola Imagem 5. Tampão para cebola Imagem
Imagem 6. Maceração do tomate Imagem 7. Solução tampão para o tomate
Imagem 8. Maceração da banana Imagem 9. Maceração do hortelã
Imagem 10. Soluções tampão para hortelã e banana
Imagem 11. Coação da banana Imagem 12. Polpa do hortelã
Imagem 13. Polpa do tomate.
Imagem 14. Solução tampão + polpa do hortelã
Imagem 15. Solução tampão + polpa de cebola (após 10 min).
Imagem 16. Solução tampão + Polpa do tomate (após 10 min).
Imagem 17 e 18. Solução tampão + polpa da cebola + álcool absoluto (após 10 min)
Imagem 19 e 20. Solução tampão + álcool absoluto + polpa da banana (14) + polpa do hortelã
(15) (após 10 min)
Imagem 21 e 22. Polpa de tomate + Solução tampão + álcool (após 10 min).
CONCLUSÃO
As aulas práticas utilizadas como instrumento didático para o método de ensino
aprendizado têm contribuído bastante para a formação da fase inicial dos futuros
docentes e cientistas, por possibilitar uma melhor compreensão do assunto pelos alunos
e uma troca entre discentes e docentes. Isso acaba contribuindo para a melhora na
qualidade de ensino e aprendizado.
Apesar do DNA ser a maior molécula da célula, a sua estrutura não poder ser
observada a olho nu devido ao seu tamanho microscópico, pode-se verificar através de
experimentos como esse milhões de cadeias de DNA aglomeradas.
Concluiu-se que para experimentos de extração de DNA, o tomate, a banana e a
cebola são os vegetais mais viáveis em comparação com o hortelã, visto que este não
apresentou resultados tão visíveis, possivelmente devido à sua baixa quantidade de
moléculas de DNA.
REFERÊNCIAS
BERED, F. Extração de DNA - considerações e prática. In: MILACH, S.C.K., ed.
Marcadores moleculares em plantas. Porto Alegre: UFAS, 1998. p.91-97.
BIONET. Extração do DNA da banana. Disponível em:
<http://www.ufmt.br/bionet/dicas/01.04.05/dnabanana.htm>. Acesso em: 22
maio 2021.
BORGES, R.M.R. e LIMA, V.M.R. Tendências contemporâneas do ensino de
Biologia no Brasil. Revista Electrónica de Enseñanza de las Ciências. v. 6, p.
165- 175, 2007.
GALHARDO, E. Extraindo DNA de morango. Disponível em: <http://www.
assis.unesp.br/egalhard/Dna%20de%20Morango.htm>. Acesso em: 22 maio
2021.
ITQB. Sabias que há DNA na tua comida? Vamos extrair DNA da banana!!!
Disponível em:
<http://www.itqb.unl.pt/dia_aberto2006/Curiosidades/DNA%20
bananaA4.pdf>. Acesso em: 22 maio 2021.
LOMAX, T.L. DNA in my food???Disponível em:
<http://www.biotech.iastate.edu/ppt_presentations/html/DNA_food/01.html>.
Acesso em: 22 maio 2021.
NCBE. Discovering DNA. Disponível em:
<http://www.ncbe.reading.ac.uk/DNA50/peadna.html>. Acesso em: 22 maio
2021.
http://www.biotech.iastate.edu/ppt_presentations/html/DNA_food/01.html