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Técnicas Utilizadas no Diagnóstico Molecular - Parte II | | Biologia Molecular Aplicada ao Diagnóstico Laboratorial Fernanda Khouri
Técnicas Utilizadas 
no Diagnóstico Molecular 
Parte II
Técnicas Utilizadas no Diagnóstico Molecular - Parte II | | Biologia Molecular Aplicada ao Diagnóstico Laboratorial Fernanda Khouri
Resumo da Aula
 RFLP
 Eletroforese
 Sequenciamento
 Principais aplicações
Técnicas Utilizadas no Diagnóstico Molecular - Parte II | | Biologia Molecular Aplicada ao Diagnóstico Laboratorial Fernanda Khouri
Treinando...
Questão de Concurso
Assinale a alternativa correta sobre sequenciamento de DNA:
a) A partir do sequenciamento do genoma humano e identificação dos genes
foi possível criar abordagens preventivas para as todas doenças já descritas.
b) Atualmente, para cada paciente, a reação de sequenciamento é realizada
em quatro microtubos separadamente.
c) O sequenciamento de DNA utiliza a reação em cadeia da polimerase (PCR)
como base.
d) A adição de ddNTPs à reação de sequenciamento acelera o processo,
possibilitando maior rapidez diagnóstica.
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Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP)
 Princípio da técnica:
 Baseia-se na digestão de regiões específicas do DNA
 Utilização de enzimas de restrição
Dica
 Enzimas de restrição =
Endonucleases
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Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP)
 DNA fingerprint (impressões digitais genéticas)
Principais aplicações:
 Diagnóstico molecular de doenças genéticas
 Investigação criminal forense 
 Determinação de paternidade
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Eletroforese
 Revelação → Eletroforese
DNA → carga negativa
Perfil de digestão
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Sequenciamento
 Processo de determinação da ordem dos nucleotídeos de um dado fragmento de DNA
 Princípio da técnica: Reação em cadeia da polimerase (PCR)
 Amplificação do DNA com nucleotídeos deoxi → inserção randômica de
nucleotídeos dideoxi → processo interrompido
 Inúmeros fragmentos de DNA com tamanhos distintos
Técnica de “dideoxi”
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Sequenciamento
Não se esqueça!
 Eletroforese: Migração
do fragmento por ta-
manho.
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Análise das Sequências
 Sequenciador automático: marcação por fluorescência
 Análise: programas de bioinformática
Principais aplicações:
 Diagnóstico de câncer 
 Identificação de agentes infeciosos 
 Ciência forense 
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 RFLP
 Baseia-se em cortes de regiões específicas do DNA por enzimas de restrição
 Eletroforese
 Técnica utilizada para separação de fragmentos de DNA/RNA de acordo ao
número de nucleotídeos
 Sequenciamento
 Processo de determinação da ordem dos nucleotídeos de um dado
fragmento de DNA
Resumindo...
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Agora ficou fácil!
Questão de Concurso
Assinale a alternativa correta sobre sequenciamento de DNA:
a) A partir do sequenciamento do genoma humano e identificação dos genes
foi possível criar abordagens preventivas para as todas doenças já descritas.
b) Atualmente, para cada paciente, a reação de sequenciamento é realizada
em quatro microtubos separadamente.
c) O sequenciamento de DNA utiliza a reação em cadeia da polimerase (PCR)
como base.
d) A adição de ddNTPs à reação de sequenciamento acelera o processo,
possibilitando maior rapidez diagnóstica.
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Enzimas de restrição são enzimas capazes de:
(BIÓLOGO/BIOMÉDICO/FARMACÊUTICO - 2014)
a) Clivar sequências específicas de DNA.
b) Restringir o tamanho do DNA.
c) Ligar fragmentos de DNA.
d) Degradar totalmente o DNA.
e) Gerar novo DNA a partir de um molde.
Questão de Concurso
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Observe a imagem de uma análise de PCR. Sobre essa análise de PCR é correto afirmar que:
(BIÓLOGO/BIOMÉDICO/FARMACÊUTICO - 2014)
a) A amostra da direita é a maior.
b) A amostra central é a maior.
c) A amostra da esquerda é a maior.
d) As amostras estão degradadas.
e) As amostras são idênticas.
Questão de Concurso
Eletroforese: migração por tamanho
Maior
Menor
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