TÉCNICA DO NÚMERO MAIS PROVÁVEL PARA ANÁLISE DE COLIFORMES EM ALIMENTOS

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TÉCNICA DO NÚMERO MAIS PROVÁVEL PARA ANÁLISE DE COLIFORMES EM
ALIMENTOS
1: INTRODUÇÃO SOBRE A TÉCNICA DO NMP E COLIFORMES TOTAIS:
1.1 O QUE SÃO COLIFORMES;
Coliformes são um grupo de bactérias que abrange mais de vinte espécies
bacterianas, sendo algumas originárias do do estomago/intestino de animais de
sangue quente, como a Escherichia coli. Essas bactérias quando presentes em
alimentos ou na água podem ser prejudiciais à saúde e são utilizadas como
indicadoras de qualidade microbiológica
O grupo dos coliformes totais é formado por enterobactérias capazes de fermentar a
lactose, com produção de gás a 35°C. Essa capacidade de fermentar a lactose, com
formação de gás em meios de cultura, é a base para os métodos tradicionais de
detecção de coliformes totais. A presença de coliformes totais e/ou termotolerantes
em alimentos pode indicar falhas na higiene dos processos de fabricação e
contaminação pós-processo em alimentos pasteurizados.
1.2 O QUE É A TÉCNICA NMP E COMO ELA É USADA
O Número Mais Provável (NMP) são técnicas que permitem avaliar estatisticamente
a quantidade de microrganismos presentes em uma amostra. Ou seja, essa técnica
pode ser utilizada para estimar a população total ou de um grupo específico de
microrganismos.
2: QUAIS MATERIAIS SÃO USADOS
● Amostra de alimento a ser analisado.
● Meios e soluções: solução de etanol 70%, tubos e frascos erlenmeyers com
água peptonada 0,1%, tubos com caldo lauril sulfato triptose (LST), caldo
verde brilhante bile e lactose (VBBL).
https://foodsafetybrazil.org/e-coli-produtoras-de-enterotoxinas/
● Utensílios e equipamentos: bico de Bunsen, homogeneizador de amostra,
pipetador automático,ponteiras estéreis, espátulas, tesoura ou faca estéril.
3: DESCRIÇÃO DO PROCEDIMENTO PARA PREPARO DA AMOSTRA E
DILUIÇÕES
A. Preparo da amostra
1. Usar técnica asséptica durante procedimentos de manuseio do alimento.
2. Desinfetar a superfície de trabalho com solução de etanol 70%.
3. Antes de abrir qualquer embalagem, limpar a área em volta do local de onde será
retirada a amostra, usando solução de etanol 70%.
4. Alimentos líquidos e semilíquidos devem ser homogeneizados invertendo ou
agitando a embalagem rapidamente 25 vezes. Retirar a alíquota a ser analisada 2,5
cm abaixo da superfície.
5. Amostras desidratadas devem ser misturadas assepticamente com uma colher
esterilizada.
6. Sólidos e semissólidos devem ser pesados (25 g) e diluídos em 225mL de água
peptonada 0,1%. Homogeneizar por 2 minutos.
B. Diluição Seriada (que é uma técnica que permite a contagem do número de
microrganismos de amostras com concentrações muito elevadas):
● Transferir assepticamente alíquota de 1,0 mL para tubos contendo 9,0mL de
solução salina 0,85%. Tomar o cuidado de homogeneizar as
diluições,agitando o frasco ou tubo 25 vezes em 7 segundos.
C. Determinação do NMP de coliformes totais (teste presuntivo)
1. Inocular três séries de três tubos com caldo LST (lauril sulfato triptose) e os tubos
invertidos (tubos de Durhan) utilizando porções de 1mL de cada uma das diluições
preparadas anteriormente.
2. Incubar à 35 ± 1°C por 24 a 48 horas.
3. Observar os tubos positivos (produção de gás nos tubos de Durhan) após 24
horas. Incubar novamente os tubos negativos por mais 24 horas e anotar o
resultado final.
4. Comparar os valores obtidos com a tabela de NMP para diluições em séries de
três tubos e expressar o resultado como NMP presuntivo de coliformes/g ou mL.
D.Determinação do NMP de Coliformes totais (teste confirmativo)
1.Com o auxílio da alça de platina, transferir uma alíquota dos tubos positivos de
LST (produção de gás em 48 horas) para caldo VBBL.
2.Incubar os tubos à 35 ± 1°C por 24 a 48 horas.
3. Observar os tubos positivos (produção de gás nos tubos de Durhan).
4.Calcular o NMP de coliformes totais, usando a tabela do número mais provável
para diluições em séries de três tubos e expressar o resultado como NMP de
coliformes totais/g ou mL.
REFERÊNCIAS
Coliformes totais e coliformes termotolerantes: qual a diferença?. Food Safety
Brazil, 2018. Disponível
em:<https://foodsafetybrazil.org/coliformes-totais-e-coliformes-termotolerantes-voce-
sabe-diferenca/>
Microbiologia: método NMP (número mais provável). Hexis científica, 2020.
Disponível
em:<https://suporte.hexis.com.br/app/answers/answer_view/a_id/1027178/~/microbi
ologia%3A-m%C3%A9todo-nmp-%28n%C3%BAmero-mais-prov%C3%A1vel%29->