METODOS DE INOCULAÇÃO

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MÉTODOS DE INOCULAÇÃO
MÉTODOS DE INOCULAÇÃ O
O que é inoculação?
Inocular significa introduzir microrganismos num meio de cultura, assim quando a alça estéril é mergulhada
em uma suspensão contendo microrganismos e a seguir retirada do meio, forma-se uma película (gota)
contendo um determinado número de microrganismos. Essa “alçada” é chamada de inóculo.
Instrumentos de inoculação
● Alça de platina níquel- cromo ou de inoculação
● fio ou agulha de platina
● pipeta pasteur
● palito de madeira
● pipeta sorológica
● pipetador mecânico com bomba de plástico
Inóculos líquidos em meios líquidos
Utiliza a suspensão com microrganismos, mergulhando a alça na suspensão e depois colocando-a num meio
líquido.
Após a inoculação
● alças e fios devem ser flambados até o rubro, para prevenir a contaminação do indivíduo ou do
ambiente de trabalho.
● Pipetas após o uso devem ser imediatamente imersas em solução desinfetante.
Inóculos sólidos em meio líquido
Para retirar uma pequena quantidade de material sólido (ex: microrganismo proveniente de uma colônia de
agar) pode ser usada uma alça ou fio de platina.
● tocar alça ou fio no material
● A alça ou fio contendo os micro-organismos é mergulhada no meio líquido e lentamente agitados para
a liberação do inóculo.
IMPORTANTE: Este método só pode ser usado quando a quantidade não importa pois a quantidade de material
ou o número de microrganismos retidos na superfície não é mensurável.
Inóculos líquidos ou sólidos em meios sólidos
Semeadura para obtenção de colônias isoladas ou semeadura em estrias
Quando o inóculo contém diferentes ou muitos microrganismos de uma mesma espécie,
utiliza esta técnica para obter colônias isoladas, bem separadas umas das outras.
● O inóculo é progressivamente espalhado para promover a separação das células
na superfície do ágar.
● A alça deve tocar levemente a superfície do meio, a fim de evitar rasuras no ágar.
● alça deve ser flambada para eliminar os microorganismos remanescentes na
mesma a cada bloco de estrias
● Este método baseia-se no fato de que cada célula (ou grupo de células) origina uma
colônia, assim cada colônia isolada corresponde a uma cultura pura.
Semeadura em ágar inclinado e semi-sólido
Esse método é utilizado quando se quer promover o crescimento de micro-organismos simultaneamente, em
condições de semi-anaerobiose e aerobiose. E para isso, usa-se o meio sólido inclinado em tubo.
AGAR INCLINADO - Introduzir o inóculo no tubo e passar lentamente em zigue-zague pela superfície do meio.
Dessa forma, o inóculo fica distribuído na base (condição de anaerobiose) e na superfície do meio (condição de
aerobiose).
SEMI-SÓLIDO - MEIO SIM
Nos tubos contendo meio semi-sólido, o procedimento é o mesmo: Inocular a suspensão contendo bactérias no
meio semi sólido.
Porém este meio não apresenta superfície inclinada uma vez que não é completamente sólido
A inoculação deve ter profundidade
S - SULFETO
I - INDOL
M - MOTILIDADE
→ sem motilidade - o microrganismo cresce onde a agulha passou pois não pode se mexer
Semeadura com espalhamento em superfície
Esta técnica consiste em espalhar na superfície de meio sólido em placa, um inóculo contido num volume
pequeno
o inóculo deve ser previamente diluído e espalhado com alça de Drigalski ou bastão de vidro em forma de L
com movimentos leves e homogêneos para se obter colônias isoladas para contagem.
Semeadura “pour plate” ou profundidade
Para se obter culturas isoladas o inóculo é colocado em placa de Petri (estéril) é adicionado o meio sólido
estéril fundido, em frasco, a temperatura do meio deve ser 40ºC. A placa é homogeneizada fazendo- se
movimentos suaves, como estivéssemos escrevendo o número 8. Após o resfriamento e solidificação a placa é
então incubada em estufa, por tempo e temperatura adequados. O crescimento das colônias pode ser
observado em toda profundidade do meio, conforme as características do micro-organismo semeado.
➔ Placas de Petri sempre são incubadas invertidas. A razão pela qual elas ficam invertidas (de cabeça
para baixo) é para o meio não desidratar, condensando então água na tampa.