Relatorio 5 coliformes pronto (1)

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Determinação de Coliformes Totais e Fecais em Amostra de Queijo 
Bruna Lopes (IC)¹, Igor Valezan (IC)2, Júlia Goedert (IC)3, Manoella Neves Pereira (IC)4, Daiana Cardoso de Oliveira (PS).
brunal190294@gmail.com1, igorvalezan@gmail.com2, julliagoedert@hotmail.com3, nevespmanu@gmail.com4.
Universidade do Sul de Santa Catarina		Data: 25 / 06 / 2018 
Palavras Chave: coliformes fecais, coliformes totais, tubos múltiplos. 
Introdução
 	O queijo é um produto de grande importância no grupo dos derivados de leite, especialmente pelo seu grande valor nutritivo e suas características sensoriais agradáveis, sendo por isso muito consumido pela população (MATSUMOTO, 2016).
 	Um dos alimentos com maior índice de contaminação é o queijo, um concentrado proteico gorduroso, constituído por caseína em forma de gel, matéria gorda, ácido lácteo e substâncias minerais, resultantes da coagulação do leite (MATSUMOTO, 2016).
 	Alimentos obtidos por processos artesanais tem grande possibilidade de se apresentarem contaminados devido ao uso de matérias-primas de fontes não seguras, utensílios mal higienizados ou contaminados, elaboração em condições inadequadas e armazenamento e comercialização em temperaturas impróprias (SOCIEDADE BRASILEIRA PARA O PROGRESSO DA CIÊNCIA, 2013).
 	Quando o queijo é fabricado de forma artesanal, por pessoas não treinadas, pode ocorrer a contaminação por diversos microrganismos, comprometendo tanto a sua qualidade como a segurança da saúde do consumidor (LOGUERCIO,; ALEIXO, 2001).
A maioria dos coliformes são encontrados no meio ambiente, essas bactérias possuem limitada relevância higiênica. Devido ao fato de os coliformes serem destruídos com certa facilidade pelo calor, sua contagem pode ser útil em testes de contaminações pós processamento (ENCONTRO DE ENGENHARIA E TECNOLOGIA DOS CAMPOS GERAIS, 2009).
 	Os microrganismos pertencentes ao grupo dos coliformes são divididos em coliforme totais e coliforme fecais (MATSUMOTO, 2016).
 	Os coliformes totais são bastantes negativos, não esporogênicos, aeróbios ou anaeróbios facultativos, capazes de fermentar a lactose com a formação de gás em 24 a 48 horas em 35ºC (MATSUMOTO, 2016).
 	Os coliformes fecais têm características parecidas aos coliformes totais, restringindo-se apenas na fermentação da lactose com produção de gás em 24 horas em 44,5 a 45,5ºC (MATSUMOTO, 2016).Parte superior do formulário
 	O presente relatório tem como objetivo a determinação de coliformes totais e fecais em amostra de queijo colonial frescal, de acordo com a metodologia de análise de tubos múltiplos fluorocult. 
Materiais e Métodos 
 	Os materiais e reagentes utilizados no experimento estão respectivamente descritos na Tabela 1 e na Tabela 2 representadas a seguir.
Tabela 1. Materiais utilizados no experimento
	Materiais
	Capacidade (mL)
	Tubos de ensaio, 20un.
	----
	Pipeta graduada
	10
	Proveta
	50
	Grade para tubos
	----
	Estufa bacteriológica
	----
	Bico de Bunse
	----
	Autoclave
	----
	Lâmpada UV
	----
Fonte: Autores, 2018.
Tabela 2. Reagentes utilizados no experimento
	Reagentes
	Quantidade
	Caldo Fluorocult
	----
	Água deionizada 
	----
Fonte: Autores, 2018.
Determinação de coliformes fecais e totais:
Preparou-se o caldo Fluorocult dissolvendo 17g de Fluorocult em 1L de água deionizada. Pipetou-se então, 10 mL da solução e colocou-se em 20 tubos de ensaio. Após os tubos estarem com a solução, os mesmos foram esterilizados junto com 1L de água deionizada e o restante dos materiais que foram utilizados nesta prática. 
Em um ambiente estéreo (próximo ao bico de Bunsen aceso), pesou-se 4g da amostra de queijo colonial e emulsionou-se em liquidificador com 45 mL de água deionizada esterilizada. Pipetou-se 1 mL desta amostra e então, adicionou-se em 5 tubos de ensaio (1 mL em cada tubo), flambando o tubo antes e depois da inclusão da amostra. Então, pipetou-se 5 mL da amostra e diluiu-se em 45 mL de água deionizada esterilizada. Pipetou-se 1mL desta amostra diluída e adicionou-se em mais 5 tubos de ensaio (adicionando 1 mL em cada tubo), repetiu-se este procedimento mais 3 vezes sempre diluindo 5 mL da amostra em 45 mL de água deionizada esterilizada. Obtendo-se 4 fileiras de 5 tubos de ensaio com amostras diluídas diferentes.
Os tubos foram encubados em uma estufa bacteriológica durante 48 horas a 35-37ºC. Então, foi verificado os coliformes totais a olho nu e os coliformes fecais submetidos a luz UV (366nm).
Assim, anotou-se o resultado em um boletim de resultados, para cada série de tubos. Foi escolhido 3 séries de tubos com menor diluição, para então verificar o resultado final de coliformes totais e fecais comparando-os com a tabela NMP (número mais provável). 
Resultados e Discussões
 	A esterilização dos materiais utilizados na prática e a realização da mesma em um ambiente estéreo é essencial nesta análise, pois uma pequena contaminação em um destes, pode-se alterar o resultado da análise, levando a um resultado falso. 
 	O caldo fluorocult permite uma interpretação fácil, sendo possível visualizar toda uma série de diferentes cores de organismos num único meio de cultura, e assim possibilita a detecção de enzimas bacterianas características de microorganismos permitindo a rápida identificação dos mesmos. 
O método com tubos múltiplos fluorocult pode produzir um resultado positivo em apenas 24 a 48 horas. É possível uma identificação direta sem a aplicação de mais aditivos, bastando usar a coloração de colónias característica no próprio meio de cultura. É possível diferenciar colónias individuais positivas, mesmo na presença de uma elevada contagem microbiana.
Ao retirar os tubos encubados da estufa bacteriológica e verificar os coliformes totais a olho nu, percebeu-se uma cor azul-esverdeado no caldo, indicando a contaminação por coliformes totais em todos os tubos. Ao submeter os tubos a luz UV (366nm) para verificação de coliformes fecais, notou-se fluorescência azulada no caldo das diluições de 1 mL, 0,1mL e 0,01mL, indicando contaminação, já na diluição de 0,001 mL não apresentou fluorescência azulada no caldo, indicando a não contaminação de coliformes fecais. 
Ao comparar os resultados das diluições de 0,1 mL, 0,01 mL e 0,001 mL com a tabela de NMP, deduziu-se que o resultado de coliformes totais da amostra de queijo colonial foram de 24000 NMP/100mL, e o resultados de coliformes fecais foram de 2400 NMP/100mL
Conclusão
A partir da determinação de coliformes totais e fecais realizadas através do método de análise de tubos múltiplos Fluorocult de uma amostra de queijo colonial frescal, pôde-se obter um resultado de 24000 NMP/100mL de coliformes totais e 2400 NMP/100mL de coliformes fecais, representando que obteve-se presença de colônias de coliformes na amostra. Sendo assim torna-se contraindicado para o consumo humano.
Esta contaminação pode ocorrer em diversas etapas da fabricação do queijo, como: contaminação oriunda dos manipuladores, má qualidade do leite utilizado, tratamento térmico ineficiente ou utilização de temperaturas impróprias para a conservação do produto. Portanto, sugere-se uma fiscalização do produto e da matéria-prima, visando, garantir a qualidade e segurança do queijo.
Referências
LOGUERCIO, A. P.; ALEIXO, J. A. G. Microbiologia de Queijo Tipo Frescal Produzido Artesanalmente. Ciência Rural, Santa Maria, 2001. Disponível em: <http://www.scielo.br/pdf/cr/v31n6/a24v31n6.pdf>. Acesso em: 15 jun. 2018.
SOCIEDADE BRASILEIRA PARA O PROGRESSO DA CIÊNCIA. Análise De Coliformes em Queijos Coalho Comercializados na Cidade De Campina Grande-PB. Recife, Sbpc, 2013. Disponível em: <http://www.sbpcnet.org.br/livro/65ra/resumos/resumos/1650.htm>. Acesso em: 15 jun. 2018.
MATSUMOTO, A. Y. Contaminação Por Coliformes Fecais Em Queijos Prontos Para o CO. Saúde em Foco, Vale do Ribeira, 2016. Disponível em < http://unifia.edu.br/revista_eletronica/revistas/saude_foco/artigos/ano2016/002_contaminacao_coliformes.pdf>. Acesso em: 15 jun. 2018.
ENCONTRO DE ENGENHARIA E TECNOLOGIA DOS CAMPOS GERAIS. Análisesde Coliformes Totais e Fecais: Um Comparativo entre técnicas oficiais VRBA e Petrifilm EC aplicados em uma indústria de carnes. Campos Gerais: Eetcg, 2009. Disponível em: <http://www.pg.utfpr.edu.br/ppgep/anais/artigos/eng_tec_alimentos/12 ANALISE DE COLIFORMES TOT FECA UM COMPAR TEC OFIC VRBA PE.pdf>. Acesso em: 15 jun. 2018.
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