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DISCIPLINA: ENGENHARIA BIOQUÍMICA CURSO: ENGENHARIA QUÍMICA OBJETIVOS: - ESTUDAR OS ASPECTOS GERAIS DOS PROCESSOS FERMENTATIVOS, ENTENDIMENTO E FUNCIONAMENTO DOS BIORREATORES. - DISCUTIR OS CRITÉRIOS DE VARIAÇÃO DE ESCALA, OPERAÇÕES PARA A RECUPERAÇÃO DOS BIOPRODUTOS - MOSTRAR EXEMPLOS E APLICAÇÕES EMENTA: - NOÇÕES BÁSICAS DE BIOTECNOLOGIA E MICROBIOLOGIA - CINÉTICA DE PROCESSOS FERMENTATIVOS - AGITAÇÃO E AEREAÇÃO - BIORREATORES BIBLIOGRAFIA RECOMENDADA 1- BORZANI, W.; SCHIMIDELL, W.; LIMA, U.A.; AQUARONE, E.: Biotecnologia Industrial. Volume I - Fundamentos, Ed. Edgard Blucher, SP, 2011. 2- SCHIMIDELL, W.; LIMA, U.A.; AQUARONE, E.; BORZANI, W.: Biotecnologia Industrial. Volume II – Engenharia Bioquímica. Ed. Edgard Blucher, SP, 2007. 3- LIMA, U.A.; AQUARONE, E.; BORZANI, W.; SCHMIDELL, W.: Biotecnologia Industrial. Volume III – Processos fermentativos e enzimáticos. Ed. Edgard Blucher, SP, 2007. 4- Brown, C. M.; Campbell, I.; Priest, F.G. Introducción a la Biotecnología. Zaragoza (España): Ed. Acribia 1989. 5- Bu'lock, John; Kristiansen, Bjorn. Biotecnología Básica. Zaragoza (España): Ed. Acribia 1991. 6- Crueger, W.; Crueger, A. Biotecnología: Manual de Microbiologia Industrial. Zaragoza (Espanha): Ed. Acribia, 1993. 7- Scriban, R. Biotecnologia. São Paulo: Ed. Manole, 1985. 8- Smith, J. E. Biotechnology, 3ª ed. Cambridge University Press, 1996. BIOTECNOLOGIA: USO DE MICRORGANISMOS, CÉLULAS DE PLANTAS E ANIMAIS OU PARTES DE CÉLULAS, ASSIM COMO ENZIMAS, IMUNOGLOBULINAS OU GENES PARA A ELABORAÇÃO DE PRODUTOS OU PARA CONDUZIR PROCESSOS. INTERAÇÃO DA BIOTECNOLOGIA COM OS RAMOS DE CONHECIMENTO Bios: Vida; Tecnos: Arte ou Profissão; Logos: Estudo DEFINIÇÃO DE ENGENHARIA BIOQUÍMICA MICROBIOLOGIA BIOQUÍMICA ENGENHARIA QUÍMICA ENGENHARIA BIOQUÍMICA FUNÇÃO: TRANSFORMAR CONHECIMENTOS OBTIDOS POR MICROBIOLOGISTAS E BIOQUÍMICOS EM PROCESSOS INDUSTRIAIS, COM VISTAS A APERFEIÇOÁ-LOS, ASSIM COMO AUMENTAR A PRODUTIVIDADE E RENDIMENTO. APROVEITAMENTO DOS MICRORGANISMOS E DAS REAÇÕES ENZIMÁTICAS PELO HOMEM (DESDE A ÉPOCA PRIMITIVA) CARNE MATURADA BEBIDAS ALCOÓLICAS (VINHO, CERVEJA) QUEIJOS, COALHADA VINAGRE PÃO SOJA FERMENTADA 1857 LOUIS PASTEUR MICRORGANISMOS LEVEDURAS: FERMENTAÇÃO BACTÉRIAS: DETERIORAÇÃO DOENÇAS HISTÓRICO 1901: PIOCIANASE (O PRIMEIRO ANTIBIÓTICO) PRODUÇÃO DE LEVEDURA P/ PANIFICAÇÃO PRODUÇÃO DE ACETONA A PARTIR DO AMIDO (CLOSTRIDIUM) 1923: PRODUÇÃO DE ÁCIDO CÍTRICO (ASPERGILLUS NIGER) 1928: PENICILINA 1940: INDUSTRIALIZAÇÃO OUTROS ANTIBIÓTICOS (ESTREPTOMICINA) VITAMINAS (B2, B12, C) CORTISONA E DERIVADOS AMINOÁCIDOS (LISINA, GLUTAMATO) HORMÔNIOS INSETICIDAS (BACILLUS THURINGIENSIS) SACHAROMYCES ÁCIDO CÍTRICO ÁCIDO GLICÔNICO ACIDEZ SORBOSE ACETONA BUTANOL, ETANOL CONC. ALTA DE SUBSTRATO OU PRODUTO MICRORGANISMOS CONTAMINANTES PENICILINA (E OUTROS) CONDIÇÕES DE OPERAÇÃO ESTRITAMENTE ASSÉPTICAS NOVOS DESAFIOS DESIGN DE FERMENTADORES TÉCNICAS DE OPERAÇÃO EQUIPAMENTOS E ACESSÓRIOS (PADRONIZAÇÃO, ADAPTAÇÕES) FILTRAÇÃO EXTRAÇÃO ADSORÇÃO CONCENTRAÇÃO + ENGENHARIA BIOQUÍMICA ENGENHARIA QUÍMICA OPERAÇÕES E PROCESSOS UNITÁRIOS COMUNS PRINCÍPIOS ESTEQUIMÉTRICOS, CINÉTICOS E TERMODINÂMICOS SEMELHANTES OPERAÇÕES UNITÁRIAS: MISTURA DE TRÊS FASES HETEROGÊNEAS (MICRORG., MEIO E AR) TRANSPORTE DE MASSA (OXIGÊNIO DO AR P/ O MICRORGANISMO) TRANSPORTE DE CALOR (DO MEIO DE CULTURA P/ O AMBIENTE) PROCESSOS UNITÁRIOS (MECANISMOS DE REAÇÃO): REDUÇÕES / OXIDAÇÕES CONVERSÕES DE SUBSTRATO HIDRÓLISE, POLIMERIZAÇÃO, BIOSSÍNTESE FORMAÇÃO DE CÉLULAS UTILIZAÇÃO DE MICRORGANISMOS NA INDÚSTRIA ATUAM COMO BIOCATALISADORES NA OBTENÇÃO DE PRODUTOS ALIMENTÍCIOS, FARMACÉUTICOS, ETC. BACTÉRIAS: AMPLAMENTE DISTRIBUÍDAS NA NATUREZA - AERÓBICAS OU ANAERÓBICAS - AUTOTRÓFICAS OU HETEROTRÓFICAS -CRESCIMENTO EM MEIO AQUOSO - PRODUÇÃO DE PRODUTOS INTERMEDIÁRIOS E FINAIS DO METABOLISMO - PRODUÇÃO DE ENZIMAS VÍRUS: OS MENORES MICRORGANISMOS EXISTENTES - TESTAR FÁRMACOS ANTIVIRAIS - PRODUÇÃO DE VACINAS - INSERÇÃO DE INFORMAÇÃO GENÉTICA EM BACTÉRIAS (BACTERIÓFAGOS) UTILIZAÇÃO DE MICRORGANISMOS NA INDÚSTRIA (CONT.) FUNGOS: AMPLAMENTE ESPALHADOS NA NATUREZA, UMIDADE MAIS BAIXA DO QUE AQUELA QUE FAVORECE AS BACTÉRIAS. - ESSENCIALMENTE AERÓBICOS - BOLORES: FORMAÇÃO DE MICÉLIO (ESTRUTURAS FILAMENTOSAS CHAMADAS HIFAS - LEVEDURAS: GERALMENTE UNICALULARES, ESFÉRICOS OU ELÍPTICOS. PARA TODOS OS MICRORGANISMOS: - TEMPERATURA MÍNIMA - TEMPERATURA ÓTIMA, A MAIS COMUM: 25 – 45 °C - TEMPERATURA MÁXIMA TERMÓFILOS: APROX. 60 °C PSICRÓFILOS: APROX. 10 °C MESÓFILOS: ENTRE 20 E 40 °C FONTES DE MICRORGANISMOS DE INTERESSE ISOLAMENTO A PARTIR DE RECURSOS NATURAIS COMPRA EM COLEÇÕES DE CULTURAS OBTENÇÃO DE MUTANTES NATURAIS OBTENÇÃO DE MUTANTES INDUZIDOS POR MÉTODOS CONVENCIONAIS OBTENÇÃO DE MICRORGANISMOS RECOMBINANTES POR TÉCNICAS DE ENGENHARIA GENÉTICA CARACTERÍSTICAS DESEJÁVEIS DE MICRORGANISMOS ELEVADA EFICIÊNCIA NA CONVERSÃO DE SUBSTRATO EM PRODUTO PERMITIR O ACÚMULO DE PRODUTO NO MEIO NÃO PRODUZIR SUBSTÂNCIAS INCOMPATÍVEIS COM O PRODUTO APRESENTAR CONSTÂNCIA NO COMPORTAMENTO FISIOLÓGICO NÃO SER PATOGÊNICO NÃO EXIGIR CONDIÇÕES DE PROCESSO MUITO COMPLEXAS NÃO EXIGIR SUBSTRATOS DISPENDIOSOS PERMITIR A RÁPIDA LIBERAÇÃO DO PRODUTO PARA O MEIO ATIVIDADE FERMENTATIVA CARACTERÍSTICAS DESEJÁVEIS EM MUITOS ALIMENTOS (QUEIJOS, CONSERVAS, CHUCRUTES, EMBUTIDOS) ESTABILIDADE (VIDA-DE-PRATELEIRA) AROMA E SABOR CARACTERÍSTICOS TEOR DE VITAMINAS MAIOR DIGESTIBILIDADE REDUÇÃO DA TOXICIDADE (MANDIOCA) SUBSTRATO PRODUTO MICRORGANISMO MONITORAMENTO DAS CONDIÇÕES DE FERMENTAÇÃO (pH, TEMPERATURA, COMPOSIÇÃO DO MOSTO) ALGUNS ALIMENTOS SUBMETIDOS A PROCESSOS DE FERMENTAÇÃO ENGENHARIA BIOQUÍMICA CAPÍTULO 2: TECNOLOGIA DAS FERMENTAÇÕES CONSIDERAÇÕES SOBRE O METABOLISMO ENERGÉTICO METABOLISMO: TODAS AS REAÇÕES QUÍMICAS QUE OCORREM NA CÉLULA REAÇÕES QUE PRODUZEM ENERGIA: CATABOLISMO REAÇÕES QUE UTILIZAM ENERGIA: ANABOLISMO AS CÉLULAS PRECISAM DE ENERGIA PARA: BIOSÍNTESE DAS PARTES ESTRUTURAIS SÍNTESE DE ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLÉICOS, POLISSACARÍDEOS, FOSFOLIPÍDIOS, PROTEÍNAS E OUTROS COMPONENTES TRANSPORTE DE NUTRIENTES REPARO DE DANOS E MANUTENÇÃO DA CÉLULA EM BOAS CONDIÇÕES CRESCIMENTO E MULTIPLICAÇÃO ARMAZENAMENTO DE NUTRIENTES E EXCREÇÃO DE PRODUTOS INDESEJÁVEIS REALIZAR MOVIMENTO OS MICRORGANISMOS E AS FERMENTAÇÕES TRATAMENTO DA MATÉRIA PRIMA PREPARO DOS MEIOS DE PROPAGAÇÃO E PRODUÇÃO ESTERILIZAÇÃO E TRANSFORMAÇÃO DO SUBSTRATO EM PRODUTO PROCESSOS DE PRODUÇÃO PROCESSOS DE SEPARAÇÃO E PURIFICAÇÃO DO PRODUTO BIOPROCESSO: CONJUNTO DE OPERAÇÕES QUE INCLUEM A DIFERENÇA ENTRE BIOPROCESSOS E PROCESSOS QUÍMICOS RADICA NA NATUREZA DO CATALIZADOR UTILIZADO EM SUAS REAÇÕES: MICRORGANISMOS CÉLULAS ANIMAIS OU VEGETAIS ENZIMAS ESQUEMA GERAL DE UM PROCESSO FERMENTATIVO SUBSTRATO: A MATÉRIA PRIMA É UM DOS COMPONENTES MAIS RELEVANTES NOS CUSTOS DE PRODUÇÃO (ATÉ 75 %) APROVEITAMENTO DE RESÍDUOS AGROINDUSTRIAIS A ESCOLHA DEPENDE DA ATIVIDADE METABÓLICA DO MICRORGANISMO (EXIGENCIAS NUTRICIONAIS) PARA UM BOM DESEMPENHO FORTIFICAR OS COMPONENTES QUE FALTAM, RETIRAR OS QUE INIBEM RÁPIDA E EFICIENTE CONVERSÃO DO SUBSTRATO EM PRODUTO COM O RENDIMENTO DESEJADO OBS.: AS CONDIÇÕES QUE PERMITEM A PRODUÇÃO MÁXIMA DE MASSA CELULAR NÃO SÃO NECESSARIAMENTE AS MESMAS QUE PERMITEM A MÁXIMA PRODUÇÃO DE UM DETERMINADO PRODUTO. EX.: ASPERGILLUS NIGER TEM MELHOR RENDIMENTO DE ÁCIDO CÍTRICO QUANDO O CRESCIMENTO É RESTRINGIDO EM CONDIÇÕES DE SEMI-INANIÇÃO DE N e P, E ALTA CONCENTRAÇÃO DE AÇÚCAR. FONTES DE SUBSTRATO SUBSTRATOS SOLÚVEIS: FACIMENTE EXTRAÍDOS E APROVEITÁVEIS (SACAROSE, GLICOSE, FRUTOSE, LACTOSE, PROVENIENTES DE CANA-DE-AÇÚCAR, BETERRABA, MELAÇO, SORO DE LEITE, ETC.) SUBSTRATOS INSOLÚVEIS: PRECISAM DE TRATAMENTO MODERADO PARA SOLUBILIZAÇÃO E HIDRÓLISE ANTES DA CONVERSÃO EM PRODUTO (AMIDO DE MILHO, MANDIOCA, TRIGO, CEVADA, BATATA, ETC.) SUBSTRATOS INSOLÚVEIS MUITO RESISTENTES: NECESSITAM DE PRÉ-TRATAMENTO FÍSICO, HIDRÓLISE QUÍMICA OU ENZIMÁTICA PARAPRODUZIR SUBSTRATOS NA FORMA MONOMÉRICA E SER CONVERTIDOS A PRODUTOS (CELULOSE E HEMICELULOSE) FONTE DE ENERGIA: LUZ COMP. ORGÂNICOS ORG. AUTOTRÓFICOS ORG. HETEROTRÓFICOS ATP FONTE DE CARBONO: NAS BACTÉRIAS AUTOTRÓFICAS, É UTILIZADO O CO2; NAS HETEROTRÓFICAS, COINCIDE COM A FONTE DE ENERGIA. QUANTIDADE DE CARBONO CONVERTIDO EM MATERIAL CELULAR METABOLISMO ANAERÓBICO METABOLISMO AERÓBICO 10 % 50 – 55 % FONTE DE NITROGÊNIO: INORGÂNICO: AMÔNIA E SEUS SAIS ORGÂNICO: FARELO DE SOJA OU AMENDOIM, FARINHA DE PEIXE OU CARNE, BORRA DE CERVEJA, EXTRATO DE LEVEDURA, SORO LÁCTEO FONTE DE MINERAIS: FÓSFORO E MAGNÉSIO (p/ ATP), CÁLCIO, POTÁSSIO, ENXOFRE E MICRONUTRIENTES (Fe, Co, Cu, Zn). ESTERILIZAÇÃO OPERAÇÃO PELA QUAL TODAS AS FORMAS DE VIDA (VEGETATIVAS OU ESPORULADAS) SÃO ELIMINADAS (DESTRUÍDAS OU REMOVIDAS) DO MEIO DE CULTURA E DOS EQUIPAMENTOS. EM ALGUNS PROCESSOS (PRODUÇÃO DE ETANOL, ÁCIDO ACÉTICO, ÁCIDO LÁTICO, ANTIBIÓTICOS...) A ELIMINAÇÃO PARCIAL É SUFICIENTE PARA GARANTIR A QUALIDADE DO PRODUTO, POIS O MESMO ATUA COMO INIBIDOR DO CRECIMENTO DOS MICRORGANISMOS CONTAMINANTES. EM OUTROS PROCESSOS (BIOTRATAMENTO DE RESIDUAIS E POLUENTES) PRESCINDE-SE TOTALMENTE DA ASSEPSIA POIS A MICROBIOTA NATIVA, ATUANDO DE FORMA CONSORCIADA É EXTREMAMENTE DESEJÁVEL PARA QUE HAJA REDUÇÃO DA CARGA ORGÂNICA POLUIDORA. ESTERILIZAÇÃO COM SUCESSO QUANDO ESTIVER GARANTIDA A ASSEPSIA ADEQUADA ESTERILIZAÇÃO DESINFECÇÃO USO DE UMA SUBSTÂNCIA QUE DESTRÓI OU INIBE O CRESCIMENTO DE CERTOS MICRORGANISMOS EM DETERMINADOS MEIOS AGENTES DE ESTERILIZAÇÃO E DESINFECÇÃO FÍSICOS QUÍMICOS CALOR (SECO OU ÚMIDO) FILTRAÇÃO (MEIO OU AR ESTÉRIL) RADIAÇÃO (ULTRA-SONS, ULTRAVIOLETA, RAIOS GAMMA, RAIOS CATÓDICOS ÁCIDOS, BASES, SAIS HALOGÊNIOS, ÁLCOOIS, ALDEÍDOS, ÉTERES, FENÓIS TENDÊNCIA ATUAL AGENTES FÍSICOS AGENTES QUÍMICOS ESTERILIZAÇÃO DESINFECÇÃO (NA MAIORIA DOS PROCESSOS INDUSTRIAIS SÃO USADOS AGENTES FÍSICOS) ESTERILIZAÇÃO PASTEURIZAÇÃO 121 °C; 15 min 80 °C; 15 seg ELIMINA CÉLULAS VEGETATIVAS, PRINCIPALMENTE DE MICRORGANISMOS PATOGÊNICOS, QUE SÃO MAIS SENSÍVEIS ESTERILIZAÇÃO PELO CALOR SECO: 160 – 170 °C; 2 horas APLICÁVEL: VIDRARIA E MATERIAL DE LABORATÓRIO, RECHEIO FIBROSO DOS FILTROS DE AR NÃO APLICÁVEL: MEIOS DE CULTURA OU LÍQUIDOS ESTERILIZAÇÃO PELO CALOR ÚMIDO: 121 °C; 15 – 20 min; 1 atm. VAPOR SATURADO ELIMINA AS FORMAS ESPORULADAS, MAIS RESISTENTES QUE AS VEGETATIVAS, PODE SER FEITA POR DOIS MÉTODOS: COM VAPOR LATENTE: 100°C, VAPOR A PRESSÃO ATMOSFÉRICA, QUANDO: NO MEIO HÁ COMPOSTOS QUE SE DECOMPOEM OU REAGEM COM OUTROS A TEMPERATURAS MAIS ELEVADAS AS CONDIÇÕES DE CULTURA INIBEM O CRESCIMENTO DE CONTAMINANTES (EX., pH BAIXO) 1- ESTERILIZAÇÃO SIMPLES POR VAPOR FLUENTE: 20 – 30 min 2- TINDALIZAÇÃO: AMBIENTE ÚMIDO COM VAPOR FLUENTE A 100 °C; 30 min; E REPETIDO MAIS 2 VEZES COM INTERVALOS DE 24 HORAS. OS ESPOROS SOBREVIVENTES AO PRIMEIRO AQUECIMENTO DESENVOLVEM-SE NAS 24 HORAS SEGUINTES E AS FORMAS VEGETATIVAS RESULTANTES SÃO ELIMINADAS NO SEGUNDO AQUECIMENTO. POR GARANTIA, FAZ-SE O TERCEIRO AQUECIMENTO APÓS 24 HORAS. b) COM VAPOR SATURADO SOB PRESSÃO: EM AUTOCLAVES, 121 °C, 1 atm. 15 – 20 min. ESTERILIZAÇÃO QUÍMICA: * MÉTODO MENOS IMPORTANTE QUE OS ANTERIORES * UTILIZADO PARA ESTERILIZAÇÃO DE SUPERFÍCIES * MUITO UTILIZADO O ÓXIDO DE ETILENO, MISTURADO COM CO2 OU N. (V) DESTRÓI CÉLULAS VEGETATIVAS E ESPOROS (D) SÓ É EFETIVO NA PRESENÇA DE ÁGUA DESINFECTANTES: REAGEM DIRETAMENTE SOBRE ESTRUTURAS MICROBIANAS, CAUSANDO A MORTE. SÃO TÓXICOS GERAIS, SEM ESPECIFICIDADE. AGENTES QUIMIOTERÁPICOS: INTERFEREM EM DETERMINADAS VIAS METABÓLICAS, E PORTANTO, ESPECÍFICOS A DETERMINADOS MICRORGANISMOS. SINTÉTICOS (SULFAS, CLORANFENICOL) OU NATURAIS (ANTIBIÓTICOS). ESTERILIZAÇÃO POR IRRADIAÇÃO DE LUZ ULTRAVIOLETA: É ABSORVIDA POR MUITAS SUBSTÂNCIAS CELULARES, ESPECIALMENTE PELOS ÁCIDOS NUCLÉICOS (DNA, RNA), PROVOCANDO LESÕES. MELHOR AÇÃO ESTERILIZANTE: 220 – 300 nm (REGIÃO ABIÓTICA) DESENVOLVIMENTO DOS AGENTES DE BIOPROCESSOS E A EXIGÊNCIA DE OXIGÊNIO BIOPROCESSOS AERÓBICOS SUPRIMENTO DE OXIGÊNIO (COMPRESSOR) (FUNGOS, ALGAS, MUITAS BACTÉRIAS) BIOPROCESSOS ANAERÓBICOS OXIGÊNIO (ALGUMAS BACTÉRIAS) AERÓBICOS FACULTATIVOS LEVEDURAS E MUITAS BACTÉRIAS EX: SACCHAROMYCES, CLOSTRIDIUM... ESTADO FÍSICO DO SUBSTRATO E DESENVOLVIMENTO DOS AGENTES DE FERMENTAÇÃO SUBSTRATO LÍQUIDO SUBSTRATO SÓLIDO OU SEMI-SÓLIDO SUPERFÍCIE PROFUNDIDADE (SUBMERSO) FERMENTAÇÃO EM ESTADO LÍQUIDO: NA PRESENÇA DE GRANDE QUANTIDADE DE ÁGUA CONDUZIDO EM TANQUES DE FERMENTAÇÃO (REATORES) DIFERENTES TAMANHOS DIFERENTES MATERIAIS DE CONSTRUÇÃO ABERTOS OU FECHADOS PERMITIU O AUMENTO DE ESCALA PRODUTOS: ETANOL, BEBIDAS ALCOÓLICAS, ANTIBIÓTICOS, VITAMINAS, ENZIMAS, etc. VANTAGENS: MEDIÇÃO E CONTROLE DE pH, TEMPERATURA, OXIGÊNIO, PRODUTO SUBSTRATO SEPARAÇÃO E PURIFICAÇÃO DO PRODUTO MAIOR FACILIDADE P/ PROCESSO CONTÍNUO E AUTOMATIZADO PROCESSOS DE FERMENTAÇÃO EM MEIO LÍQUIDO NA SUPERFÍCIE: A BIOMASSA SITUA-SE NA SUPERFÍCIE DO MEIO LÍQUIDO, EM CONTATO DIRETO COM O AR ATMOSFÉRICO (OXIGÊNIO) DIFUSÃO: NUTRIENTES DAS CAMADAS MAIS PROFUNDAS PARA A SUPERFICIAL PRODUTOS DA CAMADA SUPERFICIAL PARA O MEIO IMPORTANTE: RELAÇÃO ENTRE A ÁREA OFERECIDA E O VOLUME DO MEIO REATORES: RECIPIENTES RASOS (BANDEJAS) TEMPO DE FERMENTAÇÃO LONGO (TAXA DE TRANSFERÊNCIA DE MASSA DE NUTRIENTES LENTA) OPERAÇÃO DIFÍCIL PROCESSOS POUCO ECONÔMICOS (ALTO CUSTO DE PRODUÇÃO) MANIPULAÇÃO CUSTOSA DA ESTERILIZAÇÃO ENCHIMENTO, ESVAZIAMENTO E LIMPEZA DAS VÁRIAS BANDEJAS NECESSÁRIAS NA PRODUÇÃO EM LARGA ESCALA. UTILIZADO PRINCIPALMENTE PARA FUNGOS FILAMENTOSOS, QUE FORMAM UMA PELÍCULA MICELIAL NA SUPERFÍCIE DO MEIO. PROCESSOS DE FERMENTAÇÃO EM MEIO LÍQUIDO – SUBMERSOS O MICRORGANISMO PRODUTOR DESENVOLVE-SE NO INTERIOR DO MEIO DE FERMENTAÇÃO. GERALMENTE AGITADOS O OXIGÊNIO É SUPRIDO ATRAVÉS DE UM COMPRESSOR, POR BORBULHAMENTO DE AR (FERMENTAÇÕES AERÓBIAS) UTILIZADO NA MAIORIA DAS FERMENTAÇÕES INDUSTRIAIS IMPORTANTES VANTAGENS: MANIPULAÇÃO DE VOLUMES MAIORES DE MEIO,COM MAIOR FACILIDADE MAIOR FACILIDADE DE AJUSTE DAS CONDIÇÕES IDEAIS DE CRESCIMENTO E PRODUÇÃO. MAIOR EFICIÊNCIA NA ABSORÇÃO DE NUTRIENTES E EXCREÇÃO DE METABÓLITOS MENORES TEMPOS DE FERMENTAÇÃO MELHOR PRODUTIVIDADE FERMENTAÇÃO EM ESTADO SÓLIDO: CULTURA DE MICRORGANISMOS SOBRE OU NO INTERIOR DE PARTÍCULAS EM MATRIZ SÓLIDA O CONTEÚDO DE LÍQUIDO LIGADO À MATRIZ TEM UMA aw QUE ASSEGURE O CRESCIMENTO E METABOLISMO DAS CÉLULAS, MAS QUE NÃO EXCEDA A MÁXIMA CAPACIDADE DE LIGAÇÃO DA ÁGUA COM A MATRIZ SÓLIDA. É O MAIS ANTIGO PROCESSO FERMENTATIVO (TAMBÉM CHAMADO DE “FERMENTAÇÃO EM MEIO SEMI-SÓLIDO” (EX.: ALIMENTOS ORIENTAIS FERMENTADOS (KOJI, TEMPEH, NATO MISO) A PARTIR DE SOJA E CEREAIS; PÃO NO EGITO, VINAGRE DE POLPAS, ÁCIDO CÍTRICO, PENICILINA, HORMÔNIOS ESTERÓIDES, ENZIMAS...) MATERIAIS INSOLÚVEIS NA ÁGUA O SUPORTE SÓLIDO ATUA COMO FONTE DE NUTRIENTES OS NUTRIENTES SÃO SOLÚVEIS EM ÁGUA E OS MICRORGANISMOS ESTÃO ADERIDOS A UMA MATRIZ SÓLIDA QUE ABSORVE O MEIO LÍQUIDO SUBSTRATOS PRODUTOS AGRÍCOLAS: ARROZ,TRIGO, PAINÇO, CEVADA, MILHO, SOJA RESÍDUOS AGROINDUSTRIAIS E FORESTAIS: BAGAÇO DE CANA, SABUGO DE MILHO, FARELO DE TRIGO, PALHA DE ARROZ INTERESSE: MATÉRIAS-PRIMAS DE BAIXO CUSTO AGREGAR VALOR A RESÍDUOS ABUNDANTES OPERAÇÃO DOS BIOPROCESSOS EM ESTADO SÓLIDO: SEM AGITAÇÃO MECÂNICA COM AGITAÇÃO OCASIONAL COM AGITAÇÃO CONTÍNUA REATORES ESTÁTICOS OU DINÂMICOS REATORES MAIS USADOS NA FMSS BANDEJA SISTEMA WINDROW REATOR TUBULAR HORIZONTAL OU VERTICAL (TORRE) LEITO FIXO (COM OU SEM AERAÇÃO FORÇADA) TAMBOR ROTATIVO TANQUE AGITADO ESTEIRA ROLANTE SACOS PLÁSTICOS REGIMES DE FERMENTAÇÃO: DESCONTÍNUA MENOR CUSTO CONTROLE ADEQUADO DIFÍCIL CONTÍNUA MAIOR CUSTO CONTROLE MAIS ADEQUADO BIORREATORES TIPO “TAMBOR ROTATIVO” USADOS NA FERMENTAÇÃO EM MEIO SEMI - SÓLIDO FERMENTAÇÃO EM MEIO SÓLIDO VANTAGENS: SIMPLICIDADE DOS MEIOSDE FERMENTAÇÃO (ÀS VEZES, SÓ PRECISA ACRESCENTAR ÁGUA) AUSÊNCIA DE REQUERIMENTOS DE MÁQUINAS E EQUIPAMENTOS SOFISTICADOS DEMANDA REDUZIDA DE ENERGIA BAIXO GRAU DE UMIDADE, REDUZINDO RISCOS DE CONTAMINAÇÃO AS CONDIÇÕES DE CRESCIMENTO DO MICRORGANISMO SÃO SEMELHANTES ÀS ENCONTRADAS EM SEU AMBIENTE NATURAL AUSÊNCIA DE FORMAÇÃO DE ESPUMA FATORES LIMITANTES MENOR ACESSIBILIDADE E DISPONIBILIDADE DE SUBSTRATO PROBLEMAS DE TRANSFERÊNCIA DE MASSA (OXIGÊNIO, NUTRIENTES, CALOR) DIFICULDADES NO CONTROLE DE VARIÁVEIS FÍSICO-QUÍMICAS (pH, TEMPERATURA, OXIGÊNIO) DIFICULDADES NO AUMENTO DE ESCALA CINÉTICA DOS BIOPROCESSOS NUTRIENTES ESSENCIAIS pH FAVORÁVEL CRESCIMENTO (REPRODUÇÃO) TEMPERATURA FAVORÁVEL MICRORGANISMOS UNICELULARES DIVISÃO CELULAR AUMENTO DA AUMENTO DO BIOMASSA No. DE CÉLULAS BOLORES OU FUNGOS FILAMENTOSOS COMPRIMENTO E No. DE MICÉLIOS AUMENTO DA AUMENTO DO BIOMASSA No. DE CÉLULAS CRESCIMENTO CONSUMO DE MATERIAL DO MEIO (SUBSTRATO) LIBERAÇÃO DE METABÓLITOS (PRODUTO) MEDIDA DO PROCESSO DE CRESCIMENTO MÉTODOS GRAVIMÉTRICOS (PESO SECO) MÉTODOS TURBIDIMÉTRICOS (DENSIDADE ÓTICA) CINÉTICA DE UM BIOPROCESSO: ANÁLISE DA EVOLUÇÃO DOS VALORES DE CONCENTRAÇÃO DE UM OU MAIS COMPONENTES DO SISTEMA PRODUTIVO, EM FUNÇÃO DO TEMPO DO BIOPROCESSO. COMPONENTES: * O MICRORGANISMO (BIOMASSA) X * OS NUTRIENTES (SUBSTRATO) S * OS METABÓLITOS (PRODUTO) P CINÉTICA DE UM PROCESSO FERMENTATIVO CURVA DE CRESCIMENTO MICROBIANO FASE “LAG” (ADAPTAÇÃO): AS CÉLULAS INOCULADAS SE ADAPTAM AO NOVO MEIO AS CÉLULAS SINTETIZAM AS ENZIMAS NECESSÁRIAS P/ METABOLIZAR OS NUTRIENTES PRESENTES NO MEIO NÃO HÁ REPRODUÇÃO CELULAR A DURAÇÃO DA FASE DEPENDE DE: CONCENTRAÇÃO DO INÓCULO IDADE DO MICRORGANISMO (TEMPO DE PRÉ-CULTIVO) ESTADO FISIOLÓGICO DO MICRORGANISMO FASE EXPONENCIAL OU LOGARÍTMICA: ALTA VELOCIDADE DE CRESCIMENTO A PRODUÇÃO DE BIOMASSA ATINGE A VELOCIDADE MÁXIMA FASE DE TRANSIÇÃO: A VELOCIDADE DE CRESCIMENTO COMEÇA A DIMINUIR INIBIÇÃO POR PRODUTOS DA FERMENTAÇÃO INIBIÇÃO PELA ALTA CONCENTRAÇÃO DE BIOMASSA DEFICIÊNCIA DE OXIGÊNIO INIBIÇÃO POR PRODUTOS SECUNDÁRIOS TÓXICOS FASE ESTACIONÁRIA: A TAXA DE CRESCIMENTO IGUALA-SE À TAXA DE MORTE FASE DE MORTE: SE O PROCESSO CONTINUAR, A CURVA DE CRESCIMENTO TORNA-SE DECRESCENTE (A TAXA DE MORTE É MAIOR QUE A TAXA DE CRESCIMENTO O PROCESSO DE FERMENTAÇÃO CARACTERÍSTICAS PRÓPRIAS DO MICRORGANISMO COMPOSIÇÃO DO MEIO DE CULTIVO FORMAS DE CONDUZIR UM REATOR BIOLÓGICO OBJETIVOS ESPECÍFICOS DO PROCESSO O PROCESSO DE FERMENTAÇÃO DESCONTÍNUO COM UM INÓCULO POR TANQUE COM RECIRCULAÇÃO DE CÉLULAS SEMI-CONTÍNUO SEM RECIRCULAÇÃO DE CÉLULAS COM RECIRCULAÇÃO DE CÉLULAS DESCONTÍNUO ALIMENTADO SEM RECIRCULAÇÃO DE CÉLULAS COM RECIRCULAÇÃO DE CÉLULAS CONTÍNUO EM UM REATOR (COM OU SEM RECIRCULAÇÃO DE CÉLULAS) EM VÁRIOS REATORES (COM OU SEM RECIRCULAÇÃO DE CÉLULAS) DESCONTÍNUO SIMPLES: UM INÓCULO POR TANQUE PREPARAÇÃO DO SUBSTRATO ADEQUADO COLOCAR O SUBSTRATO EM UM BIORREATOR ADICIONAR O MICRORGANISMO RESPONSÁVEL PELO BIOPROCESSO CONDUZIR E CONTROLAR O BIOPROCESSO RETIRAR O CALDO DO BIORREATOR RECUPERAÇÃO E PURIFICAÇÃO DO PRODUTO BAIXA EFICIÊNCIA PROBLEMAS DE INIBIÇÃO POR SUBSTRATO, PRODUTO OU OUTROS METABÓLITOS DESCONTÍNUO COM RECIRCULAÇÃO DE CÉLULAS OU BATELADA REPETIDA NO FIM DA BATELADA, AS CÉLULAS SÃO SEPARADAS POR CENTRIFUGAÇÃO OU SEDIMENTAÇÃO NO INTERIOR DO PRÓPRIO BIORREATOR O CALDO FERMENTADO É ENVIADO PARA RECUPERAÇÃO DO PRODUTO AS CÉLULAS SEPARADAS SERVEM DE INÓCULO PARA A PRÓXIMA BATELADA VANTAGENS EVITA O PREPARO DE UM NOVO INÓCULO PARA CADA BATELADA REDUZ CUSTOS E TEMPO PARA A OBTENÇÃO DE ALTAS CONCENTRAÇÕES CELULARES NO BIORREATOR DESVANTAGEM MAIOR RISCO DE CONTAMINAÇÃO / MUTAÇÃO SEMI – CONTÍNUO O LÍQUIDO PROCESSADO É RETIRADO O REATOR É PREENCHIDO COM MEIO NOVO A UMA VAZÃO MUITO ELEVADA (COMO SE O PREENCHIMENTO FOSSE INSTANTÂNEO) NO FIM DO NOVO CICLO, RETIRA-SE UMA PARTE DO CALDO FERMENTADO (30 – 60 %) E PREENCHE-SE O REATOR INSTANTANEAMENTE COM MEIO ESTÉRIL. (EM REATORES DE GRANDES VOLUMES O PREENCHIMENTO INSTANTÂNEO NÃO OCORRE, RECAINDO NO REATOR DESCONTÍNUO ALIMENTADO) PARA CONSEGUIR O MÁXIMO DESEMPENHO, MUITAS VEZES DIFERENTES CONCEITOS SÃO COMBINADOS (FLEXIBILIDADE DE OPERAÇÃO) DESCONTÍNUO ALIMENTADO – “FED BATCH” INICIALMENTE INTRODUZ-SE O INÓCULO (10 – 20% DO VOLUME ÚTIL) SEGUIDAMENTE INICIA-SE A ALIMENTAÇÃO COM MEIO DE CULTURA, A UMA VAZÃO ADEQUADA, SEM RETIRAR O LÍQUIDO PROCESSADO. APÓS O PREENCHIMENTO DO VOLUME ÚTIL DO REATOR, INICIA-SE A RETIRADA DO CALDO FERMENTADO PARA A RECUPERAÇÃO DO PRODUTO CONSTANTE OU INTERMITENTE COM VAZÃO CONSTANTE OU NÃO COMPOSIÇÃO DO MEIO CONSTANTE OU VARIÁVEL ALIMENTAÇÃO CONTROLADA OU NÃO POR UM MECANISMO DE RETROALIMENTAÇÃO CONTÍNUO ESTABELECE-SE UM FLUXO CONTÍNUO DE LÍQUIDO ATRAVÉS DE UM REATOR OU DE VÁRIOS REATORES DISPOSTOS EM SÉRIE (ONDE O EFLUENTE DE UM REATOR É A ALIMENTAÇÃO DO SEGUINTE) CONTÍNUO VANTAGENS DO PROCESSO CONTÍNUO AUMENTO DA PRODUTIVIDADE, PELA REDUÇÃO DOS TEMPOS MORTOS OU NÃO PRODUTIVOS OBTENÇÃO DE CALDO FERMENTADO UNIFORME, FACILITANDO O PROJETO DAS OPERAÇÕES DE RECUPERAÇÃO E PURIFICAÇÃO DO PRODUTO MANUTENÇÃO DAS CÉLULAS EM UM MESMO ESTADO FISIOLÓGICO POSSIBILIDADE DE ASSOCIAÇÃO COM OUTRAS OPERAÇÕES CONTÍNUAS NA LINHA DE PRODUÇÃO MAIOR FACILIDADE NO EMPREGO DE CONTROLES AVANÇADOS MENOR NECESSIDADE DE MÃO DE OBRA DESVANTAGENS DO PROCESSO CONTÍNUO MAIOR INVESTIMENTO FIXO NA PLANTA POSSIBILIDADE DE OCORRÊNCIA DE MUTAÇÃO GENÉTICA ESPONTÂNEA, RESULTANDO EM MUTANTES MENOS PRODUTIVOS MAIOR POSSIBILIDADE DE OCORRÊNCIA DE CONTAMINAÇÃO, POR SE TRATAR DE UM SISTEMA ESSENCIALMENTE ABERTO NECESSIDADE DE MANUTENÇÃO DAS CONDIÇÕES DE ASSEPSIA NOS SISTEMAS DE ALIMENTAÇÃO E RETIRADA DO MEIO DIFICULDADE DE MANUTENÇÃO DE HOMOGENEIDADE NO REATOR QUANDO SE TRABALHA COM BAIXAS VAZÕES OU QUANDO O CALDO ADQUIRE COMPORTAMENTO PSEUDOPLÁSTICO (EX: CULTIVO DE FUNGOS FILAMENTOSOS) DIFICULDADE DE OPERAÇÃO EM ESTADO ESTACIONÁRIO EM DETERMINADAS SITUAÇÕES (FORMAÇÃO DE ESPUMA, CRESCIMENTO DO MICRORGANISMO NAS PAREDES DO REATOR OU NOS SISTEMAS DE ENTRADA E SAÍDA DE LÍQUIDO DEFINIÇÃO DOS PARÂMETROS CINÉTICOS VELOCIDADES INSTANTÂNEAS DE CRESCIMENTO E DE TRANSFORMAÇÃO (EX.: CULTIVO EM BATELADA - SIMPLES E AMPLAMENTE USADO) CONCENTRAÇÃO CELULAR (X) PERFIS DE CONCENTRAÇÃO DE SUBSTRATO (S) CONCENTRAÇÃO DE PRODUTO (P) VELOCIDADES INSTANTÂNEAS: rx = dX / dt rs = - dS / dt rp = dP / dt CÁLCULO: A PARTIR DAS TANGENTES (INCLINAÇÃO) DAS CUVAS OBTIDAS NUM DADO TEMPO DE CULTIVO. VÁLIDO PARA DIFERENTES FORMAS DE CULTIVO VELOCIDADES ESPECÍFICAS DE CRESCIMENTO E TRANSFORMAÇÃO: A CONCENTRAÇÃO CELULAR VARIA (PROCESSOS DISCONTÍNUOS) AS CÉLULAS SÃO OS CATALISADORES DAS REAÇÕES AUMENTO DA CONCENTRAÇÃO CELULAR AUMENTO DA CONCENTRAÇÃO DO COMPLEXO ENZIMÁTICO RESPONSÁVEL PELA TRANSFORMAÇÃO DO SUBSTRATO NO PRODUTO FATORES DE CONVERSÃO (COEFICIENTES DE RENDIMENTO) DEFINIDOS COM BASE NO CONSUMO DE UM MATERIAL PARA A FORMAÇÃO DE OUTRO EM UM INTERVALO DE TEMPO EM RELAÇÃO AO ESPAÇO (PARA PROCESSOS DESCONTÍNUOS) (PARA PROCESSOS CONTÍNUOS) COEFICIENTE DE RENDIMENTO CELULAR (RENDIMENTO DE SUBSTRATO A CÉLULAS) COEFICIENTE GLOBAL DE CONVERSÃO DE SUBSTRATO EM CÉLULAS (RENDIMENTO APARENTE OU OBSERVADO) VARIA AO LONGO DO CULTIVO ALCANÇA O VALOR MÁXIMO DURANTE A ETAPA DE CRESCIMENTO EXPONENCIAL (EM CULTIVOS DESCONTÍNUOS) 2. COEFICIENTE DE RENDIMENTO DE PRODUTO (RENDIMENTO DE SUBSTRATO A PRODUTO) COEFICIENTE GLOBAL, VARIÁVEL DURANTE O CULTIVO (CONSUMO TOTAL DE UM MATERIAL PARA A FORMAÇÃO DE OUTRO) PARA UM DETERMINADO TEMPO (t): PORTANTO: DETERMINAÇÃO DA VELOCIDADE DE CRESCIMENTO ENTÃO, PARA N GERAÇÕES TEMOS: X = Xo * 2N PARA g: TEMPO DE GERAÇÃO OU DUPLICAÇÃO t: TEMPO DE CRESCIMENTO ENTÃO: X = Xo * 2t/g CINÉTICA DE CRESCIMENTO DE MONOD CONSIDERANDO UM SUBSTRATO COMO LIMITANTE (NORMALMENTE A FONTE DE CARBONO) E OS OUTROS EM EXCESSO IDÉNTICA À EXPRESSÃO DE MICHAELISE MENTEN PARA AS ENZIMAS LINEARIZAÇÃO DE LINEWEAVER E BURK: tan = y/x METABOLISMO ENDÓGENO: DESVIO DA EQUAÇÃO DE MONOD, EM FERMENTADOR CONTÍNUO, COM TAXA DE DILUIÇÃO MUITO BAIXA (REAÇÕES ENVOLVENDO O MATERIAL INTRACELULAR) ke: TAXA DE METABOLISMO ENDÓGENO; kd: TAXA DE MORTE (pags 36 – 38: Outros modelos de crescimento) BIORREATORES SÃO O CORAÇÃO DOS PROCESSOS BIOQUÍMICOS REAÇÕES RESULTANTES DO CRESCIMENTO DE MICRORGANISMOS REAÇÕES CATALISADAS POR ENZIMAS REATORES BIOLÓGICOS FERMENTADORES REATORES BIOQUÍMICOS CINÉTICA DAS REAÇÕES BIOLÓGICAS BALANÇOS DE ENERGIA E MASSA - PROJETO E DIMENSIONAMENTO É O AMBIENTE ONDE ACONTECE: CONTATO ENTRE A FASE BIÓTICA E A FASE ABIÓTICA TRANSFERÊNCIA DOS NUTRIENTES DO MEIO EXTERNO PARA A CÉLULA DISTRIBUIÇÃO HOMOGÊNEA DAS CÉLULAS / PARTÍCULAS NO MEIO DE CULTURA CLASSIFICAÇÃO GERAL DOS BIORREATORES REATORES EM FASE AQUOSA (FERMENTAÇÃO SUBMERSA) (I.1) CÉLULAS / ENZIMAS LIVRES * REATORES AGITADOS MECANICAMENTE (STR: “stirred tank reactor”) * REATORES AGITADOS PNEUMATICAMENTE - COLUNA DE BOLHAS (“bubble column”) - REATORES “AIR LIFT” *REATORES DE FLUXO PISTONADO (“plug flow”) REATORES EM FASE AQUOSA (FERMENTAÇÃO SUBMERSA) CONT. (I.2) CÉLULAS / ENZIMAS IMOBILIZADAS EM SUPORTES * REATORES COM LEITO FIXO * REATORES COM LEITO FLUIDIZADO * OUTRAS CONCEPÇÕES (FLUXO PARALELO) (I.3) CÉLULAS / ENZIMAS CONFINADAS ENTRE MEMBRANAS *REATORES COM MEMBRANAS PLANAS *REATORES DE FIBRA OCA (“hollow fiber”) (II) REATORES EM FASE NÃO-AQUOSA (FERMENTAÇÃO SEMI-SÓLIDA) *REATORES ESTÁTICOS (BANDEJAS) *REATORES COM AGITAÇÃO (TAMBOR ROTATIVO) * REATORES COM LEITO FIXO OU FLUIDIZADO (GÁS – SÓLIDO) TANQUES CIRCULARES ESTEIRA ROLANTE TAMBOR ROTATIVO (REATOR TUBULAR HORIZONTAL) 90% DOS REATORES UTILIZADOS INDUSTRIALMENTE REATORES AGITADOS MECANICAMENTE (REATORES DE MISTURA) CAPACIDADE: 100 L - 2 m3 : MICRORGANISMOS PATOGÊNICOS, CÉLULAS VEGETAIS E ANIMAIS (ÁREA DA SAÚDE) 10 m3 – 200 m3: PRODUÇÃO DE ENZIMAS, ANTIBIÓTICOS E VITAMINAS ATÉ 2.000 m3: FERMENTAÇÃO ALCOÓLICA, TRATAMENTO DE RESIDUAIS EXEMPLOS DE APLICAÇÕES PRODUTO ORGANISMO BIORREATOR REGIME RIBONUCLEASE Aspergillus clavalus COLUNA DE BOLHAS BATELADAS REPETIDAS a - AMILASE Bacillus subtilis AIR LIFT CONTÍNUO ETANOL Saccharomyces PLUG FLOW (TUBULAR) CONTÍNUO LACTATO DE AMÔNIO Streptococcus cremois STR CONTÍNUO (SÉRIE) CEFALOSPORINA AIR LIFT ÁCIDO CÍTRICO Candida lypolitica STR CONTÍNUO c/RECICLO DE CÉLULAS AMILO-GLICOSIDASE Aspergillus sp STR DESCONTÍNUO ALIMENTADO, CONTÍNUO (2,5 X) BALANÇOS DE MASSA ENTRADA + GERAÇÃO - SAÍDA - CONSUMO = ACÚMULO REATORES DE MISTURA – SISTEMA DE BATELADA MODOS DE OPERAÇÃO DE UM SISTEMA EM BATELADA PROCESSOS EM QUE A DORNA RECEBE UM INÓCULO PROCESSOS COM RECIRCULAÇÃO DO MICRORGANISMO PROCESSO POR MEIO DE CORTES BALANÇO DE CÉLULAS BALANÇO DE SUBSTRATO SOMANDO AS EQUAÇÕES: OU SEJA, PARA X(0) = X0 e S(0) = S0: REATORES EM BATELADA ALIMENTADA O SUBSTRATO É ALIMENTADO CONSTANTEMENTE DURANTE O PROCESSO FERMENTATIVO CONCENTRAÇÃO DE SUBSTRATO APROXIMADAMENTE CONSTANTE SISTEMA COM VOLUME VARIÁVEL ELIMINA A INIBIÇÃO POR SUBSTRATO ALTAS PRODUTIVIDADES BALANÇOS SIMILARES À BATELADA SIMPLES, EXCETO V: VOLUME DO REATOR NUM TEMPO t F: VAZÃO DE ALIMENTAÇÃO rS: VELOCIDADE DE CONSUMO DE SUBSTRATO rX: VELOCIDADE DE CRESCIMENTO LEMBRANDO: [S] É CONSTANTE PELO EFEITO DA ADIÇÃO DE SUBSTRATO E PORTANTO: m TAMBÉM TORNA-SE CONSTANTE REATORES EM BATELADA ALIMENTADA (CONT.) SABENDO QUE: XV (XV0) INTEGRANDO VAZÃO DE ALIMENTAÇÃO NECESSÁRIA PARA MANTER S CONSTANTE: SUBSTITUINDO F POR dV/dt E INTEGRANDO: ESTIMATIVA DA VARIAÇÃO DO VOLUME E DA CONCENTRAÇÃO DA BIOMASSA REATORES DE MISTURA CONTÍNUOS MONOD (1950): “AS CULTURAS DE MICRORGANISMOS PODEM SER MANTIDAS EM ESTADO ESTACIONÁRIO POR LONGOS PERÍODOS, EM QUALQUER TAXA DE CRESCIMENTO ATÉ mmax REATORES DE MISTURA CONTÍNUOS (CONT.) QUIMIOSTATO: O MEIO NOVO (ESTÉRIL) É INTRODUZIDO EM UMA VELOCIDADE IGUAL À DA RETIRADA DO MEIO FERMENTADO, MANTENDO AS PROPRIEDADES QUÍMICAS DO AMBIENTE CONSTANTES, QUANDO O SISTEMA OPERA EM REGIME PERMANENTE. TURBIDOSTATO: QUIMIOSTATO PROVIDO DE UMA CÉLULA FOTOELÉTRICA PARA REGULAR A TURBIDEZ DA CULTURA, AUMENTANDO A VAZÃO DE ENTRADA DO MEIO (F) QUANDO A CONCENTRAÇÃO CELULAR ULTRAPASSA O NÍVEL DESEJADO. O VOLUME DE LÍQUIDO É MANTIDO CONSTANTE ATRAVÉS DE UM CONTROLADOR DE NÍVEL BALANÇO DE CÉLULAS: CÉL. ENTRANDO – CÉL. SAINDO + CÉL. CRESCENDO = ACÚMULO BALANÇO DE CÉLULAS (FERMENTADOR CONTÍNUO) SABENDO QUE rX = mX; Fo = F; V é CONSTANTE, PORTANTO: NORMALMENTE X0 = 0 PORTANTO: EM REGIME PERMANENTE dX / dt = 0; LOGO: CHAMANDO F / V DE TAXA DE DILUIÇÃO (D) TEMOS: m = D PORTANTO, EM REGIME ESTACIONÁRIO, A TAXA ESPECÍFICA DE CRESCIMENTO SERÁ IGUAL À TAXA DE DILUIÇÃO BALANÇO DE SUBSTRATO (REGIME CONTÍNUO) SUB. ENTRANDO – SUB.SAINDO – SUB. CONSUMIDO = ACÚMULO DE SUB. EM REGIME ESTACIONÁRIO: dS / dt = 0 COMO m = D EM CONDIÇÕES DE TEMPERATURA, pH e O2 CONSTANTES, E EXCESSO DE TODOS OS OUTROS NUTRIENTES: YX/S INDEPENDE DE m E D X INDEPENDE DE TODOS OS NUTRIENTES, EXCETO O LIMITANTE YX/S É AFETADO SOMENTE PELO TIPO DE SUBSTRATO LEMBRANDO: m = D (EQUAÇÃO DE MONOD) ENTÃO, PARA UM QUIMIOSTATO EM REGIME PERMANENTE: Dc: TAXA DE DILUIÇÃO CRÍTICA (MÁXIMA DILUIÇÃO EM QUE O QUIMIOSTATO PODE OPERAR) Dc = mmax E SUBSTITUINDO: COMPORTAMENTO TEÓRICO DE UM QUIMIOSTATO (VARIAÇÕES DA TAXA DE DILUIÇÃO EM FUNÇÃO DE X, S e P) WASHOUT: O PONTO ONDE A CONCENTRAÇÃO DE CÉLULAS ATINGIRÁ O VALOR ZERO, EM REGIME PERMANENTE, DEVIDO À TAXA DE ALIMENTAÇÃO SER SUPERIOR À TAXA DE REPRODUÇÃO DO MICRORGANISMO
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