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Gabriela Maia Couto - 4º Aula (14/09) @AJUDAUNIVERSITÁRIO.COM.BR Os Staphylococcus seriam os cocos gram positivos (coram em roxo). Eles não são formadores de esporos (mecanismo de defesa), visto que são muitos adaptáveis, metabolizando facilmente o que é ofertado a eles, sendo assim, anaeróbio facultativo (metaboliza na presença ou ausência do O²). Há outras bactérias que irão ser coradas em roxo e estarão arranjadas em cachos, por isso, para que se consiga diferencia-las dos Staphylococcus, precisa se fazer provas bioquímicas (como a catalase), ou seja, provas comprovatórias metabólicas. OBS: Prova comprovatória morfotintorial se refere a interação com corantes e apenas ela não se consegue fechar o diagnóstico. Se caracterizam por serem catalase positivas, não apresentam flagelos, portanto, são imóveis, são termo resistentes, ou seja, conseguem se manter no ambiente por horas e apresentam sensibilidade variada quando exposto a agentes antimicrobianos (antibióticos). Os Staphylococcus se encontram na família Micrococcaceae, qual abriga quatro gêneros: Stomatococccus, Staphylococcus (ambos anaeróbios facultativos), Micrococcus e Planococcus (ambos aeróbios restritos). Dentro do gênero Staphylococcus, há as espécies de importância veterinária: Staphylococcus aureus Gabriela Maia Couto - 4º Aula (14/09) @AJUDAUNIVERSITÁRIO.COM.BR (relacionado a infecções de pele), Staphylococcus epidermidis (relacionado a infecções de pele), Staphylococcus saprophyticus (são ambientais) e Staphylococcus haemoliticus (relacionado a septicemia). Os Staphylococcus fazem parte da microbiota (quantidade de bactérias normais que residem nos tecidos e fluidos) de pele, via respiratórias e trato gastrointestinal, presentes na grande maioria dos mamíferos, ou seja, o Staphylococcus tem uma ampla distribuição. OBS: A microbiota é uma condição comum que também funciona como proteção de outros agentes. OBS: O uso diário de sabonetes com ação microbiana não é recomendado pois eles removem a microbiota, tornando o indivíduo desprotegido e propenso a infecções fúngicas, entre outros. A sua patogenicidade seria desde a intoxicação alimentar a bacteremia (caso de Staphylococcus hemolíticos, podem causar bactéria no sangue, resultando em septicemia) e abcessos em vários órgãos. FATORES DE VIRULÊNCIA Para que os staphylococcus colonizem o ambiente, há fatores ideias que possibilitarão o processo de infecção, como: PROTEÍNA A: a mesma pode ser encontrada na capsula (porção externa da bactéria que irá interagir com a célula hospedeira). A capsula é rica em proteína A e essa proteína apresenta característica antifagocitaria e pelo Staphylococcus não ser reconhecido como maléfico a reposta imunológica tem dificuldade em realizar ações fagocíticas, ou seja, a proteína A não permite que esse grupo de bactérias seja fagocitado, por este motivo os staphylococcus conseguem fazer parte da Gabriela Maia Couto - 4º Aula (14/09) @AJUDAUNIVERSITÁRIO.COM.BR microbiota, colonizando sem ser eliminado. CATALASE: caso aconteça a fagocitose, ocorre a produção de catalase. A catalase impede que haja a digestão intracelular., ou seja, o macrófago é uma célula fagocítica que quando engloba há a liberação de enzimas que irá degradar o antígeno, mas a catalase impede que isso aconteça. Impedindo esse processo, o macrófago servirá como um disseminador de bactérias no organismo animal. COAGULASE: está diretamente relacionada a produção de fibrina e a fibrina garante uma agregação das bactérias nos tecidos. Portanto, a proteína A impede a fagocitose, se houver fagocitose não vai acontecer a ingestão intracelular e pelo macrófago a fibrina chega ao seu destino se aderindo ao tecido. ESTAFILOQUINASE: para se desprender do tecido há a produção de estafiloquinase. Seria o fator de disseminação, enquanto a fibrina promove a agregação a estafiloquinase quebra esses depósitos, garantindo a disseminação de bactérias para outros órgãos e tecidos. DIAGNÓSTICO BIOQUÍMICO Para a diferenciação e diagnostico bioquímicos, há duas enzimas importantes, catalase e coagulase. CATALASE: tem a capacidade de converter o peróxido de hidrogênio em água e oxigênio. Ela é um método de identificação bioquímico de bactérias, diferenciando o staphylococcus do Streptococcus. COAGULASE: seria outro teste que diferencia a espécies de staphylococcus. HIALURONIDASE (fator de propagação): garante a replicação bacteriana. Gabriela Maia Couto - 4º Aula (14/09) @AJUDAUNIVERSITÁRIO.COM.BR MANIFESTAÇÕES CLÍNICAS Como características clinicas, temos: INFECÇÕES PATOGÊNICAS: seriam as infecções com a presença de pus, elas se encontram na pele e estão caracterizadas por ser a principal característica de processos infecciosos por staphylococcus. INFECÇÕES OPORTUNISTAS: são infecções que procedem a partir de algum quadro clínico já existente, ou seja, algo aconteceu com o animal para que o processo infeccioso existisse. Ex: Osteomielite, septicemia, pneumonia (relacionada a migração das bactérias pelas vias respiratórias), endocardite (relacionada as placas dentárias) DIAGNÓSTICO Pode se chegar ao diagnostico utilizando o exame bacterioscópio e cultura. EXAME BACTERIOSCÓPIO: é a observação de bactérias na microscopia, sendo nela a identificação dos cocos em cachos, coloração de gram. OBS: Quando não se identifica nada significativo nessa análise microscópica, precisa CULTURA: o cultivo de bactérias é feito em um ambiente artificial chamado de meio de cultura. O mesmo, com uma quantidade ideal de água e rico em nutrientes, será colocado na estufa., visando crescer as bactérias para diferencia-las. OBS: Se bactérias são mesófilas a temperatura da estufa será de 36,5°C. OBS: O tempo de cultura é de 24/48 horas. Gabriela Maia Couto - 4º Aula (14/09) @AJUDAUNIVERSITÁRIO.COM.BR OBS: As colônias na placa de petri são redondas, lisas, elevadas e brilhantes. OBS: As colônias de S. aureus são acinzentadas a amarelo dourado intenso, já as colônias de S. epidermidis apresentam coloração de cinza a branca. Há meios de cultura específicos, como o ágar sangue, ágar chapman, ágar manitol salgado, ágar nutriente, staphylococcus 110 e ágar chocolate. Ágar Sangue = é o meio de cultura com uma base de nutrientes enriquecido com sangue (de equino ou carneiro ou coelho ou humano, etc). Este é o meio de cultura ideal para o crescimento de staphylococcus. O staphylococcus usa as hemácias para fundos metabólicos, portanto, a sua classificação é de acordo da forma que ele consome a hemácia. Esta classificação pode ser: . Alfa - Hemólise Hemólise parcial Fica verde Beta - Hemólise Hemólise total Fica branco Gama - Hemólise Sem hemólise Staphylococcus 110 = é o meio de cultura seletivo, nele só crescerá o staphylococcus OBS: Chapman stone e manitol salgado também são considerados meio de cultura ideias. ESQUEMA DE IDENTIFICAÇÃO Para identificarmos e gênero e as espécies precisamos seguir os seguintes passos: 1°: Coloração de gram - podemos identificar se eles são positivos ou negativos. 2°: Catalase - adicionamos uma gota de água oxigenada a colônia e se a mesma borbulhar é positivo (staphylococcus), se não, é negativo (streptococcus). Gabriela Maia Couto - 4º Aula (14/09) @AJUDAUNIVERSITÁRIO.COM.BR 3° Coagulase (para staphylococcus) –se for positiva será S. aureus (β) e se for negativa S. epidermidis e S. saprophyticus. 4° Teste da Novobiocina: esta prova é um teste de sensibilidade aos antimicrobianos, onde colocamos um disco impregnado de antibióticos e observamos o crescimento bacteriano. Se a bactéria crescer em volta do disco, a mesma é resistente (S. saprophyticus) mas se ela não cresceem volta e forma um alo, ela é sensível (S. epidermidis), ou seja, ela morre. Gabriela Maia Couto - 4º Aula (14/09) @AJUDAUNIVERSITÁRIO.COM.BR O Streptococcus não faz parte da microbiota de pele, mas sim da microbiota do trato respiratório (presente na nasofaringe), por isso, quando está no tecido, o mesmo sempre está trazendo um processo infeccioso. Logo, ele está relacionado várias doenças de pele, tanto nos animais quanto nos humanos, podendo causar também infecções no trato respiratório, pele e tecidos moles, endocardites e sepse. O agente Streptococcus pneumoniae, também conhecido como pneumococo, é responsável por causar doenças invasivas graves, como meningite bacteriana (no humano). Os streptococcus pertencem a família Setreptococcaceae, também são cocos, em cadeias, gram positivos (corados em roxo), sendo anaeróbios facultativos, imóveis, não produtores de catalase (catalase negativa) e de citocromo-oxidase. Como os staphylococcus, eles são caracterizamos em ágar sangue (alfa-hemólise, beta- hemólise, gama-hemólise), e com essas características podemos classificar as espécies de streptococcus, sendo quatro delas de importância medico veterinária: pneumoniae e viridans (ambas alfa-hemolítica), pyogenes e agalactiae (ambas beta-hemolítica). Referente aos casos clínicos, quando ocorre qualquer alteração na microbiota pode fazer com que o streptococcus vire um agente patogênico. Bacteremia ou septicemia é quando há bactérias no sangue, sendo que essa infecção pode Gabriela Maia Couto - 4º Aula (14/09) @AJUDAUNIVERSITÁRIO.COM.BR se tornar generalizada (bacteremia pneumocócica), acometendo a dois ou mais órgãos ou sistemas, podendo levar a um quadro de septicemia fulminante. Essa disseminação para outros órgãos pode resultar em pneumonia (doença mais frequente causada pelo streptococcus., atingindo principalmente animais jovens e idosos), entre outros. Em lesões de pele podem causar otites médias, por estarem presente no tecido eles migram para o conduto auditivo resultando neste quadro. DIAGNÓSTICO Pode se chegar ao diagnóstico do mesmo modo que o staphylococcus, contudo, alguns detalhes serão diferentes. Há a utilização de bacterioscopia, o meio de cultura (ágar sangue e ágar chocolate), no meio de cultura será feito hemólise ao invés da coagulase. OBS: O ágar sangue é feito com o sangue vivo (sangue vermelho), ou seja, um sangue não digerido. OBS: O ágar chocolate seria o sangue aquecido em uma temperatura de 80°C a 85°C, resultando na colocação como chocolate. ESQUEMA DE IDENTIFICAÇÃO Para identificarmos e gênero e as espécies precisamos seguir os seguintes passos: 1°: Coloração de gram - podemos identificar se eles são positivos ou negativos. 2°: Catalase - adicionamos uma gota de água oxigenada a colônia e se a mesma borbulhar é positivo (staphylococcus), se não, é negativo (streptococcus). 3° Hemólise – é o estágio que a bactéria será semeada no ágar sangue. Se as hemácias foram totalmente consumidas, ocorreu uma beta-hemólise (s. pyogenes ou s. agalactiae), se houve o Gabriela Maia Couto - 4º Aula (14/09) @AJUDAUNIVERSITÁRIO.COM.BR consumo parcial, é alfa-hemólise (s. pneumoniae). OBS: A diferenciação do s. pyogenes e s. agalactiae é feita por testes comprados comercialmente.
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