Relatório prática_ Biologia Molecular_02

Prévia do material em texto

RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS - EaD
	
AULA _02___
	
	
	DATA:
___05___/_11_____/_2020_____
VERSÃO:01
RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS: Biologia Molecular 
DADOS DO(A) ALUNO(A):
	NOME: ******
	MATRÍCULA:********
	CURSO:FARMACIA
	POLO:******
	PROFESSOR(A) ORIENTADOR(A):JULIANA PRADO
	ORIENTAÇÕES GERAIS: 
· O relatório deve ser elaborado individualmente e deve ser escrito de forma clara e
· concisa;
· O relatório deve conter apenas 01 (uma) lauda por tema;
· Fonte: Arial ou Times New Roman (Normal e Justificado);
· Tamanho: 12;
Margens: Superior 3 cm; Inferior: 2 cm; Esquerda: 3 cm; Direita: 2 cm;
· Espaçamento entre linhas: simples;
· Título: Arial ou Times New Roman (Negrito e Centralizado). 
			TEMA DE AULA: ELETROFORESE
RELATÓRIO:
1. Identificar todos os equipamentos e reagentes necessários para a realização da eletroforese
2. Cuba de eletroforese 
3. Gel Agarose 
4. T ampão 
5. Amostra 
6. Sonda (Corante Fluorescente) 
7. T ransluminador 
8. Fotodocumentador 
9. Magnésio 
10. T aq Polimerase 
11. Primers 
12. Nucleotídeos 
13. T ubos de PCR 
14. T ermociclador 
 Cuba de eletroforese 
 Gel Agarose 
 T ampão 
 Amostra 
 Sonda (Corante Fluorescente) 
 T ransluminador 
 Fotodocumentador 
 Magnésio 
 T aq Polimerase 
 Primers 
 Nucleotídeos 
 T ubos de PCR 
 T ermociclador 
 Gel Agarose tampão 
 
Corante Fluorescente Fotodocumentador 
Tubo para PCR Magnésio 
 
 
Termociclador Nucleotídeos 
 Cuba de eletroforese amostra
 
 primers Taq Polimerase transluminador 
 
15. Descrever cada etapa dessa metodologia
 O tipo de matriz que é usada (agarose ou poliacrilamida) depende do tamanho dos fragmentos de DNA que se pretende separar e visualizar o gel de agarose é um material gelatinoso e semelhante a gelatina incolor
 Para preparação do gel de agarose, faz-se a mistura entre o pó de agarose solução tampão. 
Aquecendo a mistura em forno micro-ondas ou utilizando um bico de Bunsen, até fica homogênea e transparente. Aguarda-se temperatura chega aproximadamente 50ºC colocando em uma forma (um tipo de molde específico para o preparo do gel). Com o gel ainda mole faz se cavidades com uma tira de teflon denteada, em seguida coloca a forma contendo o gel é colocada no interior da cuba de eletroforese horizontal Na cuba existem fios que provocam a passagem de corrente elétrica gerada por uma fonte de eletricidade, adiciona-se tampão em quantidade suficiente para que o gel fique totalmente imerso deixando pelo menos 1 mm acima do gel e em seguida retira o pente com cuidado. Antes de aplicar a amostra, mistura se a mesma, O tampão de amostra contendo corantes e reagentes de alta densidade, que ajudam na aplicação e da coloração, após a amostra pronta, aplicasse nossas Poços do gel, com o auxílio de uma pipeta por fim fecha se a tampa da cuba e aguarda o processo de migração, durante esse processo a mostra deixa rastro que serão usados na comparação. As bandas são visualizadas sob luz ultravioleta através do equipamento chamado de transiluminado o gel de poliacrilamida é feito através da mistura dos polímeros acrilamida e bisacrilamida, tem sua preparação mais complexa e sua polimerização ocorre mais lentamente sendo necessário o uso de componentes adicionais porem por ser neurotoxica, é usado em casos onde os pares de bases são menores, que 100, após o gel pronto todas as etapas são iguais a da agarose.
16. Justificar a aplicação das diferentes concentrações dos géis. 
Os polissacarídeo formam uma trama que prende as moléculas durante a migração. Dependendo do tamanho do fragmento, há diferença no gradiente de concentração, quanto mais concentrada menor porosidade e quanto menos concentrada, maior porosidade, exemplo de fragmentos acima de 200 pb em que a concentração será menor, permitindo o deslocamento do fragmento, ou seja, fragmentos maiores menos concentração, fragmentos menores, maior concentração.
Se o fragmento for menor que 100 pb, será necessário o uso do gel de poliacrilamida, entretendo a regra do gradiente de concentração é igual para ambos.
			TEMA DE AULA: REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE 
RELATÓRIO:
1. Descrever cada uma das etapas da PCR, explicando detalhadamente cada uma. 
O processo de PCR ocorre em três etapas
Desnaturação
Anelamento ou pareamento
Extensão
Essas etapas se reptem repetidas vezes
 
Na etapa de desnaturação desnatura se a DNA que contem a sequência que será amplificada desnaturando por aquecimento em cerca de 95°C por mais o menos 30 segundos, nesse processo a dupla fita é aberta (desnaturada), quebrando as ligações de hidrogênio, enquanto que as fosfato e desoxirribose permanecem intacta. Tornando-se uma fita única. 
Na etapa do pareamento, ocorre a ligação dos primers, através da definição da temperatura de meltin completando a fita oposta que será amplificada, sendo assim um complementa a sequência em uma fita da dupla-hélice de DNA enquanto o outro complementa a sequência na outra fita.
 O molde é determinado pela posição dos iniciadores que se anelam a fita. Essa etapa ocorre a uma temperatura de 37°C e 60°C
Na etapa da extensão já com o molde identificado, o DNA-polimerase adiciona as bases complementares, formando uma nova fita dupla a partir de uma fita simples, tendo novamente a duplicação da fita de DNA esse processo ocorre em uma temperatura de 72°C
A Taq polimerase sintetiza exclusivamente no sentindo 5’ - 3’.
2. Realizar o cálculo para 10 reações da PCR
	 
 1 reação:
 1µl – dNTP; 
 2µl – Tampão; 
 2µl – MgCl2;
 1µl – Primer F; 
 1µl – Primer R; 
 0.3µl – Taqpolimerase; 
 9.7µl –água milli-Q
 3µl – DNA 
 
 20µl
	 
 10 reações:
10µl – dNTP 20µl – Tampão; 
20µl – MgCl2; 
10µl – Primer F; 10µl – Primer R;
3µl – Taqpolimerase;
97 µl –água milli-Q
3µl – DNA 
 173.00µl µl