APS- TECNOLOGIA GENETICA E MOLECULAR

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INTRODUÇÃO: A técnica de PCR (Polymerase Chain Reaction – Reação em Cadeia da Polimerase) é atualmente amplamente utilizada para o sequenciamento de genes e diagnóstico de doenças hereditárias, identificação de impressões digitais do material genético e detecção e diagnóstico de doenças infecciosas. Por ser um método direto de alta sensibilidade, a PCR está sendo considerada uma grande aliada na detecção de doenças infecciosas. Sua versatilidade, que permite a aplicação em diversos materiais biológicos, aliada à rapidez de análise é outro diferencial da técnica. 
ATIVIDADE 1: 
Assista os vídeos disponíveis nos links: 
PCR e Eletroforese: https://www.youtube.com/watch?v=q1QFpB33Bwg 
ATIVIDADE 2: 
Responda as questões abaixo:
 1.Qual seria o fluxo em um laboratório de biologia molecular para se obter o resultado de um paciente que está realizando uma pesquisa de algum patógeno por PCR? 
No primeiro momento é fazer a extração do DNA, no segundo momento é feito a técnica do PCR e no terceiro e último momento a eletroforese. Onde esse DNA será amplificado no PCR e será feito o sequenciamento na eletroforese por meio de gel para determinar qual patógeno que é.
2. A reação da PCR consiste em amplificar um fragmento (região específica) de DNA milhões de vezes, para que isso ocorra precisamos preparar a reação previamente. Quais reagentes são necessários para a montagem de uma reação de PCR? 
Os principais ingredientes são a água, tampão, buffer, MgCl, Taq polimerase, primers, DNA molde e nucleotídeos.
Fonte: https://proto.ufsc.br/files/2012/03/PCR.pdf
3. Qual é o propósito para o qual a PCR é usada? 
a) Analisar a expressão gênica do DNA. 
b) Extrair o DNA de células. 
c) Amplificar em fragmento específico de DNA. Resposta correta
d) Fazer todo o processo de replicação igual a célula. 
e) Analisar o tRNA presentes nas células. 
4. O que acontece com o DNA quando o termociclador atinge a temperatura de 90-95 ° C por 30 segundos no primeiro passo da PCR? 
a) Os primers se ligam na fica única de DNA. 
b) A taq polimerase sintetiza as novas fitas do DNA, utilizando os nucleotídeos provenientes da dNTP. 
c) Ocorre a desnaturação de proteínas. 
d) As fitas de DNA se separam. Resposta correta
e) Ocorre a renaturação da molécula de DNA. 
5. Após a PCR, os produtos gerados são analisados de diversas formas, a mais comum é pela técnica de eletroforese em gel. Brevemente, como que funciona essa técnica?
A eletroforese em gel é uma técnica que consiste na utilização de fragmentos de DNA que são puxados por via corrente elétrica através de uma matriz de gel e que separa os fragmentos de DNA de acordo com o tamanho. Um padrão é tipicamente incluído para que os tamanhos dos fragmentos nas amostras da PCR possam ser determinados. 
Uma corrente elétrica é aplicada através do gel para que um polo tenha uma carga positiva e o outro polo de carga negativa. Ocorre a migração que é a movimentação das moléculas para a direção à carga oposta. No DNA ele será carregado com carga negativa, quando a corrente elétrica for aplicado no gel, o DNA irá migrar para o eletrodo positivo. 
Fonte: https://pt.khanacademy.org/science/biology/biotech-dna-technology/dna-sequencing-pcr-electrophoresis/a/polymerase-chain-reaction-pcr
http://www.biosystems.com.br/loja/noticia.php?loja=460180&id=61