Respostas
Lucas França
A frase apresentada não se refere diretamente à técnica de PCR (reação em cadeia da polimerase), mas sim a um processo genérico de replicação do DNA. No entanto, é possível identificar algumas etapas do processo de PCR mencionadas indiretamente:
- Separação das fitas de DNA: para iniciar a amplificação do DNA em PCR, a dupla hélice precisa ser separada em duas fitas simples. Isso é feito aquecendo o DNA a uma temperatura elevada (geralmente entre 90 e 95°C), o que rompe as ligações de hidrogênio entre as bases nitrogenadas e permite que as fitas se separem.
- Identificação do local a ser amplificado: em seguida, é preciso determinar a região do DNA que será amplificada. Isso é feito por meio de primers, pequenas sequências de DNA sintéticas que são complementares à região alvo e se ligam a cada uma das fitas de DNA. Os primers indicam onde a enzima de PCR deve começar a replicar o DNA.
- Síntese da nova fita de DNA: a enzima utilizada em PCR é uma DNA polimerase termoestável, que é capaz de sintetizar uma nova fita de DNA complementar à fita molde. A enzima é adicionada juntamente com os primers e uma mistura contendo os quatro nucleotídeos (A, C, G e T), que são os blocos de construção do DNA. A enzima começa a sintetizar uma nova fita a partir do primer e segue ao longo do molde, incorporando nucleotídeos complementares à medida que avança. Esse processo é repetido várias vezes, amplificando exponencialmente a região alvo.
- Ciclo de amplificação: o processo de amplificação é realizado em ciclos, cada um dos quais consiste em três etapas: desnaturação, em que o DNA é aquecido para separar as fitas; annealing, em que os primers se ligam às fitas simples; e extensão, em que a enzima de PCR sintetiza uma nova fita complementar. Cada ciclo dobra a quantidade de DNA alvo, resultando em uma amplificação exponencial.
Além dos componentes mencionados acima, a técnica de PCR também requer uma fonte de DNA de partida, tampão para manter o pH ótimo para a enzima de PCR e sais para fornecer os íons necessários para a reação. O processo é geralmente realizado em um termociclador, que é um equipamento que controla a temperatura em cada etapa do ciclo de amplificação.
Jarlene Marques
sim
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