PCR: Amplificação e Análise de DNA

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PCR (polymerase chain reaction)
A PCR revolucionou a genética molecular porque permite rápida amplificação (seletiva) e análise de DNA.
É uma reação em cadeia porque as novas hastes sintetizadas servirão de molde para a síntese de novas moléculas.
Inclui na preparação: as hastes moldes, uma polimerase termo resistente (Taq polimerase), um par de “primers”, e o conjunto de quatro nucleotídeos trifosfatados (A,T,C,G). Utiliza um termociclador programável. 
Reação da Polimerase em Cadeia
Desnaturação da molécula de DNA a 93-95oC
Pareamento específico dos “primers”a 50-70oC. Cada primer contém em torno de 20 nucleotídeos
Síntese de DNA a 70-75oC pela polimerase termo resistente
Estas reações são repetidas 30 vezes aproximadamente.
Aplicações da PCR
Em pesquisa básica
No sequenciamento de DNA
No diagnóstico de doenças genéticas (incluindo o câncer)
No diagnóstico de infecções
No diagnóstico pré-natal
Na medicina forense (incluindo a determinação de paternidade)
Em estudos antropológicos
Variações da PCR
RT-PCR : a partir de um RNAm
Variações da PCR
Para sequenciamento: PCR - assimétrico: fita simples de DNA, um só tipo de “primer”e os quatro tipos didesoxiribonucletídeos marcados cada um com um fluorocromo diferente
Para detecção de alelos mutantes
Para inserção de mutação sítio específica
Para produção de fita 5´marcada