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18/11/2021 Prof. MSc. Moisés Alves Ferreira Filho Doutorando em Fisiopatologia Médica – UNICAMP Mestre em Fisiopatologia Médica – UNICAMP SÍNTESE PROTEICA: TRANSCRIÇÃO E TRADUÇÃO 18.11.2021 DOGMA CENTRAL DA BIOLOGIA MOLECULAR O genoma humano contém cerca de 25.947 genes; Como ocorre a transferência de informação do DNA genômico para os produtos gênicos? A informação inserida na sequência do DNA é estática; Para usar essa informação, deve ser sintetizada uma molécula intermediária que é uma cópia de um gene distinto com o uso da sequência de DNA como um guia; Essa molécula é o RNA e o processo de síntese a partir do DNA é chamado de TRANSCRIÇÃO. 3 DOGMA CENTRAL DA BIOLOGIA MOLECULAR A ESTRUTURA QUÍMICA DO RNA 5 6 1 2 3 4 5 6 18/11/2021 CLASSES DE RNA Basicamente, há duas classes funcionais de RNA: 1. RNA mensageiro (mRNA): o RNA transcrito é um intermediário para a síntese de uma proteína (expressão gênica); 7 CLASSES DE RNA 2. RNAs funcionais: nunca são traduzidos em polipeptídeos. tRNA: leva o aminoácido correto p/ o mRNA no processo de tradução; rRNA: participam do complexo que guia a montagem da cadeia de aminoácidos pelo mRNA e tRNA; miRNA: papel na regulação da quantidade de proteína que é produzida; snRNA (small nucelar RNA): formam o spliceossomo, que remove íntrons dos mRNA eucarióticos. 8 TRANSCRIÇÃO 9 O DNA É TRANSCRITO PELA ENZIMA RNA POLIMERASE 10 Transcrição: processo de síntese de RNA a partir de uma fita molde de DNA; O processo é realizado por um complexo enzimático cuja enzima chave é a RNA polimerase, composta de várias subunidades; A RNA polimerase nos procariotos é única, enquanto nos eucariotos são três (I, II e III). • O processo de transcrição é semelhante em procariotos e eucariotos, porém mais complexo em eucariotos: necessita de 3 diferentes RNA polimerases e de várias proteínas auxiliares denominadas fatores de transcrição (TF). • A síntese do RNA é dividida em três etapas: iniciação, alongamento e término. RNA POLIMERASE I RNA POLIMERASE II RNA POLIMERASE III Sintetiza os RNAs ribossômicos (28S, 18S e 5,8S). Sintetiza o mRNA. Sintetiza o RNAs pequenos, incluindo tRNAs e o rRNA 5S. A TRANSCRIÇÃO EM EUCARIOTOS ETAPAS DA TRANSCRIÇÃO 1. INICIAÇÃO 2. ALONGAMENTO 3. TÉRMINO 12 7 8 9 10 11 12 18/11/2021 13 1. TRANSCRIÇÃO: INICIAÇÃO 14 1. TRANSCRIÇÃO: INICIAÇÃO • Reconhecimento do DNA-molde e desnaturação do DNA na região promotora: um dos filamentos atua como molde; • A RNA polimerase permanece ligada à região promotora enquanto são adicionados os primeiros nucleotídeos; • Pode haver iniciação abortiva: a enzima sintetiza transcritos < 10 nucleotídeos. 15 2. TRANSCRIÇÃO: ALONGAMENTO 1. Cada nucleotídeo é posicionado em oposição à sua base complementar pela RNA polimerase; 2. A polimerase liga-se ao DNA e “lê” o filamento-molde no sentido 3’ > 5’: o RNA é sintetizado de 5’ para 3’; 3. Os nucleotídeos vão sendo covalentemente unidos à extremidade 3’ da cadeia de RNA em crescimento, formando um híbrido DNA/RNA na região desenrolada do DNA (híbrido tem extensão de 8-9 nt). 16 3. TRANSCRIÇÃO: TÉRMINO Envolve o reconhecimento de uma sequência do DNA que sinaliza o término: região terminalizadora. Na bactéria E. coli há dois tipos de terminadores: Terminação direta: a sequência de DNA que sinaliza o término tem ~40 bases, cuja extremidade é rica em CG, seguido por seis ou mais T. 18 13 14 15 16 17 18 18/11/2021 Término dependente de Rho: Fator Rho é uma proteína de ~40 mil Da: forma um anel de 6 unidades idênticas; Liga-se ao RNA nascente em sítios específicos (sítios rut); Fator Rho “empurra” a RNA polimerase para frente, liberando o RNA transcrito da polimerase. 19 3. TRANSCRIÇÃO: TÉRMINO TRADUÇÃO A informação da sequência de códons do mRNA é utilizada para a fabricação de uma cadeia polipeptídica nos ribossomos, no citoplasma. A sequência de aminoácidos da proteína é determinada pela sequência de bases do DNA que serviu de molde para a síntese do mRNA. Assim, a síntese da proteína representa a “tradução” da informação do gene. Neste processo participam o ribossomo, o mRNA, vários tRNA, aminoácidos e diversas enzimas. VISÃO GERAL DA TRADUÇÃO COMPONENTES DA TRADUÇÃO 23 COMPONENTES DA TRADUÇÃO • Um ribossomo procariótico possui um sítio para a ligação do RNAm e três sítios para a ligação de RNAt. • Os sítios onde se ligam os RNAt são denominados: sítio P, sítio A e sítio E. • A: sítio de entrada do aminoacil-RNAt; • P: sítio de ligação do peptidil-RNAt; • E: sítio de saída (do inglês exit). A correspondência entre os códons do mRNA e os aminoácidos por eles determinados constitui o código genético. A combinação das 4 letras ATCG, 3 a 3, permite obter 64 trincas diferentes. O código genético é degenerado (ou redundante): um mesmo aminoácido pode ser codificado por vários códons diferentes, exceto o triptofano. 61 trincas correspondem a aminoácidos; 3 trincas correspondem a códons de terminação; UAA, UAG e UGA. O códon iniciador é sempre AUG (Metionina). 24 VISÃO GERAL DA TRADUÇÃO 19 20 21 22 23 24 18/11/2021 VISÃO GERAL DA TRADUÇÃO A tradução tem três passos básicos: 1. Iniciação: consiste na ligação do ribossomo ao RNAm formando um complexo de iniciação que contém o primeiro aminoacil-RNAt (o da N-formilmetionina em bactérias e o da metionina em eucariontes). 1. Alongamento da cadeia: aminoácidos são adicionados passo-a-passo à cadeia polipeptídica pelos tRNA, de acordo com a seqüência de códons especificada pelo mRNA, à medida que o ribossomo se desloca pelo mRNA. 2. Terminação da tradução: quando o ribossomo chega a um dos três códigos de parada possíveis (UAA, UAG e UGA), o códon sinaliza o final da tradução. A proteína é desligada do ribossomo, e as subunidades ribossomais se separam. INICIAÇÃO DA TRADUÇÃO • O ribossomo se liga ao sítio de iniciação específico no mRNA, enquanto o tRNA iniciador, cujo anticódon é UAC, é ligado ao códon iniciador (AUG) do mRNA. 28 INICIAÇÃO DA TRADUÇÃO ALONGAMENTO DA CADEIA ALONGAMENTO DA CADEIA 25 26 27 28 29 30 18/11/2021 A terminação acontece quando um dos três códons de parada (STOP) no mRNA (UAA, UAG ou UGA) entra no sítio A. Códons de parada (STOP) são reconhecidos por proteínas chamadas de fatores de liberação, os quais se adaptam perfeitamente ao sítio P (embora não sejam tRNA). 31 TERMINAÇÃO DA TRADUÇÃO TERMINAÇÃO DA TRADUÇÃO OBRIGADO! Bons estudos! 31 32 33
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