Aula prática de Análises Clínicas diluição

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Aula prática de Análises Clínicas 
Diluições e sua importância na imunologia
Os métodos de laboratório nos quais uma quantidade de uma substância é adicionada à outra para reduzir a concentração de uma das substâncias são conhecidos como diluições.
	
IMPORTANTE: Uma diluição é uma expressão de concentração, não de volume. Expressa de outra forma, uma diluição indica a quantidade relativa de substâncias em uma solução. Quando a palavra diluição é usada, ela deve significar o número de partes que foram diluídas em um número total de partes. Em outras palavras, uma diluição deve significar o volume de concentrado no volume total da solução final. O menor número corresponde ao número de partes da substância que está sendo diluída; o maior número refere-se ao número total de partes da solução final.
	Considere as seguintes frases:
· Faça uma diluição 1 para 10 de soro em salina.
· Faça uma diluição 1 em 10 de soro em salina.
· Faça uma diluição 1 para 10 de soro com salina.
· Faça uma diluição 1/10 de soro com salina.
· Faça uma diluição 1:10 de soro usando salina.
· Faça uma diluição de 1 parte de soro e 9 partes de salina.
· Faça uma diluição de 1 parte de soro para 9 partes de salina.
Qual é a diferença entre essas frases? Nenhuma! Todas significam exatamente a mesma coisa.
ENTÃO: Diluir é acrescentar solvente a uma solução mantendo-se inalteradas as quantidades de soluto existentes.
D=VsolutoVsoluto+Vsolvente
D = Diluição
V = Volume
1 parte de soro
+ 9 partes de salina
10 partes de solução final
TÍTULO é a concentração de uma solução determinada por titulação. É a menor quantidade ou concentração que produzia um efeito particular ou produto. O título é a recíproca da diluição. Então, em uma reação de pesquisa de anticorpos positiva na diluição ½ e ¼ e negativa na diluição 1/8 e 1/16, o título é 4.
EXEMPLO:
Dilua 2 mL de soro com 28 mL de salina. Deve-se somar 28 mL de salina em 2 mL de soro. Então, o volume total da solução final é 30 mL.
2 mL de soro
+ 28 mL de salina
30 mL de solução final
A diluição desta solução seria 2 em 30. No entanto, diluições são geralmente propostas como 1 para algum número. Para converter uma diluição 2:30 em uma diluição de 1 em algo, é só montar um problema de razão-proporção: 2 está para 30 assim como 1 está para X.
2/30 = 1/X          2X=30     X=15  - a diluição soro em salina é 2:30 ou 1:15
ENTÃO: Para que diluir em reações imunológicas?
· Para diminuir a concentração de anticorpos inespecíficos.
· Para determinar uma concentração de anticorpos em testes semi-quantitativos – título.
Materiais:
· Solução de azul de metileno
· Água destilada
· Tubos de ensaio
· Estantes para tubos de ensaio
· Pipetas automáticas 
· Ponteiras
Procedimentos:
A – Diluições: 
· Separar 5 tubos de ensaio e numerar;
· Pipetar 500 microlitros (µL) de água para os tubos 2 a 5;
· Pipetar 1000 microlitros(µL) de solução de azul de metileno para tubo 1;
· Retirar  500 microlitros (µL) mL do tubo 1 e transferir para o tubo 2;
· Homogeneizar e retirar 500 microlitros (µL) e transferir para o tubo 3;
· Seguir o procedimento até o tubo 5.
	OBSERVE = O VOLUME FINAL EM CADA TUBO É IGUAL  
AO VOLUME DE SOLVENTE
B – Outras diluições:
Seguindo o mesmo procedimento da letra A, realizar as seguintes diluições:
· Fazer uma diluição seriada de razão 2 a partir de uma solução de azul de metileno diluído ½ em água até a diluição 1/64. O volume em cada tubo deve ser 0,7 mL.
· Fazer uma diluição seriada de razão 3 a partir de uma solução de azul de metileno diluído 1/3 em água até a diluição 1/81. O volume em cada tubo deve ser 0,2 mL