Curva de Titulação da Alanina

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Daiane Sato – Lab de Biomoléculas 
UEM 
 
Fundamentação 
 
A curva de titulação do aminoácido alanina tem dois 
estágios distintos, cada um correspondendo à remoção 
de um próton. 
No início da titulação, a forma predominante é a A, 
totalmente protonada. Na metade do primeiro estágio, 
quantidades equimolares de espécies doadora de prótons 
(forma A) e aceptora de prótons (forma B) estão 
presentes. Na metade da titulação, a forma B é a 
predominante. Esta é a forma dipolar isoelétrica. Neste 
ponto, completa-se a remoção do primeiro próton e 
inicia-se a remoção do segundo próton. Na metade do 
segundo estágio, estão presentes quantidades 
equimolares das formas B e C. No final da titulação, a 
forma predominante é a C. 
Os valores de pK da ionização em duas etapas, de 
alanina, são suficientemente afastados para permitir a 
observação de duas fases claramente distintas. Como se 
observa, cada parte da curva tem um ponto central, 
onde existe alteração mínima no pH em presença de 
incrementos de OH- progressivos. Os valores aparentes 
de pK para as duas etapas de dissociação podem ser 
determinados a partir dos pontos centrais de cada 
estágio; eles são pK1 = 2,34 e pK2 = 9,69. Cada uma das 
partes da curva pode ser expressa matematicamente 
pela equação de Henderson-Hasselbach: 
 
pH = pKa + log (A+/AH) 
 
Desta maneira, pode-se calcular as relações entre as 
espécies iônicas de um aminoácido em qualquer pH, desde 
que se conheça os valores de pK1 e de pK2. Em pH= 6,02, 
existe um ponto de inflexão entre as duas partes 
separadas da curva de titulação de alanina. Não existe 
carga elétrica efetiva na molécula nesse pH. Esse é o 
ponto isolétrico (pHI), que é, no caso da titulação da 
alanina, a média aritmética do pK1 e o pK2. Assim, da 
curva de titulação de um aminoácido pode-se extrair 
importantes informações tais como: uma medida 
quantitativa do pK de cada um dos grupos ionizáveis; 
verificar as regiões onde o aminoácido exerce força 
tamponante; e, ainda, a relação entre a carga elétrica do 
aminoácido e o pH da solução. 
 
 
 
Cálculos 
 
o Para NaOH e HCl (0,5 mol/L) 
 
A cada volume de 0,05 mL de solução a 0,5 mol/L são 
acrescentados 0,025 mmol/L de ácido ou base na 
solução de alanina: 
 
0,5 mol--------1L 
x--------------- 0,00005L (isto é, 50μL, o primeiro 
volume acrescentado à solução) 
x= 0,000025 mol/L ou 0,025 mmol/L 
 
o Para Alanina (0,05mol/L) 
 
25 mL de alanina a 0,05mol/L correspondem a 1,25 
mmol/L. Este valor divido por 2 fornece 0,625 mmol/L. 
 
0,05 mol -----------1L 
x-------------------0,025L (isto é 25 mL, foi a tomada 
de amostra para o experimento) 
x = 0.00125 mol/L 
ou 1,25 mmol/L 2 = 0,625 mmol/L 
 
Por que? 
 
pH = pKa+log [A-]/[HA] 
pH = pKa + log 0,625/0,625 
pH = pKa 
 
o Ponto Isoelétrico 
 
pl=1/2(pK1+pK2)