Espectrofotometria, Impedância e citometria de fluxo

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CausasCausasCausas
Dependente do tipo de bilirrubina predominante:
Bilirrubina indireta:
 Aumento na produção de bilirrubina.
Hemólise,
eritropoiese ineficaz,
reabsorção de hematoma,
transfusão maciça de sangue.
Diminuição na captação de bilirrubina.
Diminuição da conjugação de bilirrubina.
Bilirrubina direta:
Diminuição da secreção de bilirrubina para os
canalículos biliares.
Doença hepática aguda.
Doença hepática crônica.
Obstrução extra- hepática.
Doença hepática com predomínio de colestase.
Gestação.
Pós operatório. 
Espectrofotometria, Impedância eEspectrofotometria, Impedância e
citometria de fluxocitometria de fluxo
Acúmulo de bilirrubina, que não é excretada e
impõe coloração amarelada a vários tecidos.
EspectrofotometriaEspectrofotometriaEspectrofotometria
Técnicas laboratoriais em exames para diagnóstico
diferencial de icterícia.
Espectrofotometria colorimétrica: bilirrubina direta, bilirrubina
indireta, bilirrubina total, fosfatase alcalina, gama-GT.
Espectrofotometria por Ultravioleta: AST (TGO) e ALT (TGP)
Interpretação dos exames das enzimas hepáticas e
canaliculares na síndrome ictérica .
Bilirrubina:Bilirrubina:
Frênulo lingual, esclera dos olhos e pele.
Metabolismo das bilirrubinasMetabolismo das bilirrubinasMetabolismo das bilirrubinas 
Produção da bilirrubina indireta (BI):
 Células reticuloendoteliais do fígado, do baço e da medula
óssea.
Matéria-prima:
85%: grupo heme de hemácias velhas.
15%: catabolismo de outras proteínas hemínicas
(citocromos, mioglobinas, peroxidases).
Heme biliverdina bilirrubina indireta
Transporte da BI pelo plasma, ligada à albumina.
Captação da BI pelos hepatócitos.
Conversão, nos hepatócitos, da BI em bilirrubina direta (BD) – ou
bilirrubina conjugada com ácido glicurônico (ação da UDP Glicuronil
Transferase).
Transporte da BD pela membrana biliar.
Fluxo da BD pelo sistema biliar até o intestino.
Aumento da bilirrubina indiretaAumento da bilirrubina indiretaAumento da bilirrubina indireta
Hemólise excessiva (anemias hemolíticas):
Quantidade insuficiente de UDP Glicuronil Transferase: 
demanda da reação de conjugação está aumentada.
Neonatal:
Quantidade insuficiente de UDP Glicuronil Transferase:
Organismo do neonato não está completamente
pronto.
Síndrome de Crigler-Najjar:
UDP Glicuronil Transferase não funciona
adequadamente.
Síndrome de Gilbert:
Inadequada endocitose da bilirrubina indireta pelos
hepatócitos.
Hepatite Crônica:
Funções hepáticas insatisfatórias, incluindo a reação de
conjugação.
Aumento da bilirrubina diretaAumento da bilirrubina diretaAumento da bilirrubina direta
Colestase:
Obstrução dos canais biliares: 
a bilirrubina direta não consegue ser armazenada
na vesícula biliar e vai para o sangue.
Síndrome de Dubin-Johnson:
Dificuldade de secretar a Bilirrubina Direta nos
canalículos biliares.
Hereditária.
Hepatites Agudas e Crônicas:
Causas: 
vírus, 
etanol, 
drogas.
Aumento de lise dos hepatócitos liberando Bilirrubina
Direta.
EspectrofotometriaEspectrofotometriaEspectrofotometria
Aumento dos níveis de bilirrubina total: incluem o alopurinol,
esteroides anabolizantes, antibióticos, antimaláricos, ácido
ascórbico, azatioprina, clorpropamida, colinérgicos, codeína,
dextrana, diuréticos, epinefrina, meperidina, metotrexato,
metildopa, inibidores de monoamina oxidase, morfina, ácido
nicotínico (doses altas), anticoncepcionais orais, fenotiazinas,
quinidina, rifampicina, salicilatos, esteroides, sulfonamidas,
teofilina e vitamina A.
Diminuição dos níveis de bilirrubina total: incluem os barbitúricos,
cafeína, penicilina e salicilatos (doses altas).
Fatores de interferência:
Hemólise
Exposição à luz
Hiperlipidemia
Uso de
medicamentos
pode causar:
Dosagem no sangue de bilirrubinaDosagem no sangue de bilirrubinaDosagem no sangue de bilirrubina
Amostra:
Soro ou plasma.
Tubo:
Anticoagulante heparina ou EDTA.
Condições do exame:
NÃO é necessário jejum.
Método:
Espectrofotometria colorimétrica.
Enzimas CanalicularesEnzimas CanalicularesEnzimas Canaliculares Como dosar enzimas canalicularesComo dosar enzimas canalicularesComo dosar enzimas canaliculares
Amostra: 
Soro ou plasma.
Tubo: 
Anticoagulante heparina ou EDTA.
Condições do exame: 
Jejum de 8 horas.
Método: 
Espectrofotometria colorimétrica.
Fosfatase alcalina
Presente nos hepatócitos, nos canalículos biliares e nos
ossos (osteoblastos).
Gama-glutamil transpeptidase (gama-GT)
Presente em várias células.
Células epiteliais dos ductos biliares (maior quantidade)
Hepatócitos, baço, pâncreas, vesículas seminais,
coração e cérebro (menor quantidade).
Fosfatase alcalina
Amostra:
Soro ou plasma
Tubo:
Anticoagulante heparina ou EDTA
Condições do exame:
Jejum de 4 horas
Método: 
Espectrofotometria colorimétrica (com cinética
enzimática)
Gama-glutamil transpeptidase (gama-GT)
Enzimas HepáticasEnzimas HepáticasEnzimas Hepáticas
Aspartato aminotransferase (AST):
Transaminase oxalacética (TGO).
Enzima presente nas mitocôndrias dos
hepatócitos.
Também presente em músculos esqueléticos,
miocárdio, rins, pâncreas e células sanguíneas.
Geração de energia (gliconeogênese).
Alanina aminotransferase (ALT):
Transaminase pirúvica (TGP).
Enzima presente no citoplasma dos hepatócitos.
Raramente encontrada em outros órgãos.
Geração de energia (gliconeogênese).
Como dosar as enzimas: 
Amostra:
Soro ou plasma.
Tubo:
Anticoagulante heparina ou EDTA.
Condições do exame:
Jejum de 4 horas.
Método:
Espectrofotometria por ultravioleta
(com cinética enzimática).
Enterpreteando os examesEnterpreteando os examesEnterpreteando os exames
Fosfatase alcalina (FA), GAMA-GT e Bilirrubinas:
Relação Gama-GT/FA>2,5: 
consumo excessivo de álcool.
Relação Gama-GT/FA>5: 
doença hepática de etiologia alcoólica.
FA elevada com Gama-GT normal: 
maior chance de doenças ósseas.
Gama-GT elevada com FA normal: 
dano hepatocelular direto.
Gama-GT elevada, FA elevada, Bilirrubinas elevadas,
AST e ALT normais colestase.
A elevação de FA e gama-GT tem boa especificidade para doença das
vias biliares. 
O aumento predominante de fosfatase alcalina e gama-GT em relação às
transaminases (AST, ALT) é mais sugestivo de obstrução à drenagem
biliar.
AST e ALT:
Aumento das aminotransferases: 
dano hepatocitário ou necrose hepatocelular.
Elevações de 2 a 3 vezes o limite superior da normalidade
(LSN) leves podem ser causadas por diversas
doenças.
Elevações de 3 a 20 vezes LSN moderadas
Elevações > 20 vezes o LSN intensas necrose
hepatocelular por hepatite viral ou isquêmica ou por
medicamentos.
Quando AST está maior do que ALT:
sugere hepatite alcoólica 
Impedanciometria eImpedanciometria eImpedanciometria e
espectrofotometriaespectrofotometriaespectrofotometria
Hemograma Completo:
Concentração de hemoglobina (Hb).
Contagem de eritrócitos (do inglês, RBC).
Índices hematimétricos (conteúdo de
hemoglobina e volume, VCM, HCM,
CHCM, RDW).
Contagem de plaquetas.
Contagem de leucócitos (do inglês, WBC).
Contagem diferencial de leucócitos
(neutrófilos, linfócitos, monócitos,
eosinófilos e basófilos).
Hemoglobina espectrofotometria.
Sangue total diluído misturado com reagente.
Obtêm lise celular.
Conjugação da hemoglobina com um composto como o cianeto de
potássio ou laurel sulfato de sódio, previamente à mensuração da
absorbância. 
Altas concentrações de substâncias que elevem a absorbância, por
exemplo, lipoproteínas ricas em triglicérides.
Podem causar um falso aumento da hemoglobina em alguns
métodos.
Passo a passo:
Impedância elétrica:
Os métodos baseados na propriedade de que as células
sanguíneas são péssimas condutoras de eletricidade. O
princípio está relacionado a um aumento mensurável na
impedância elétrica quando há a passagem das células
por uma abertura através da qual uma corrente elétrica
é aplicada. Altura do pulso proporcional ao volume da
célula, cada célula gera um impulso separado.
Índices hematimétricos:
Os índices hematimétricos são combinações de parâmetros
derivados e mensurados dos eritrócitos. Os índices
hematimétricos comumenteusados são:
VCM (Volume corpuscular médio) - Tira a medida de
todos os glóbulos vermelhos e tira a média.
Ht: Hematócrito, volume percentual de eritrócitos no
sangue.
HCM (hemoglobina corpuscular média) - massa média de
hemoglobina por eritrócito (dentro e fora da hemácia).
CHCM (Concentração de hemoglobina corpuscular
média): medida da hemoglobina dentro de cada hemácia -
desconsidera hemoglobina livre.
RDW (Red Cell Distribution Width): heterogeneidade
das hemácias ao seu tamanho quanto menor a hemácias
(heterogeneidade) menos parecidas, menor será o RDW.
Desvio padrão da média (associar) 
Quanto mais diferente (maior o RDW) pior. 
Interferentes pré-analíticosInterferentes pré-analíticosInterferentes pré-analíticos
Idade
Sexo
Horário da coleta
Jejum (3h ou 4h)
Hemólise/coágulos
Contagem diferencial.
Tamanho (dispersão frontal).
Interior (dispersão lateral).
Moléculas da membrana plasmática
(anticorpos Fluorescentes).
Linfócitos.
Monócitos.
Basófilos.
Neutrófilos.
Eosinófilos.
Leucócito = Glóbulo branco 
Citometria de FluxoCitometria de FluxoCitometria de Fluxo O que é? Mede características das células como:
Físicas
Quimicas 
Partículas.
Realizada quando passam uma por uma no aparato
que mede através de uma corrente de fluxo. 
Baseia-se na dispersão da luz em direções
diferentes.
 A técnica PODE utilizar anticorpos conjugados
como:
Corantes fluorescentes (fluorocromos), tais
como: 
isotiocianato de fluoresceína (FITC),
ficoeritrina (PE) e ficoeritrina cianina
(PC).
 É baseada no princípio de
IMUNOFLUORESCÊNCIA.
Leucopenia
Linfopenia
Monocitopenia
Neutropenia
Eosinopenia
Basolifopenia
Leucocitose
Linfocitose
Monocitose
Neutrofilia
Eosinofilia
Basofilia
Hemograma teste extremamente sensível 
extremamente específico para o diagnóstico de
anemia. 
Dispersão frontal: é influenciada pelo tamanho da célula.
Dispersão lateral: é influenciada pela estrutura celular e
pelo conteúdo intracelular, ou seja, pela complexidade
celular.
Fatores Interferentes
Atividades físicas e estresse:
Podem causar um aumento na contagem dos leucócitos e
dos valores diferenciais.
Gravidez (mês final) e trabalho de parto:
Podem causar um aumento na contagem de leucócitos.
Pacientes que tenham sido submetidos à esplenectomia:
Apresentam uma elevação branda e persistente na
contagem de leucócitos.
Medicamentos que aumentam dos leucócitos:
adrenalina, alopurinol, aspirina, clorofórmio, epinefrina,
heparina, quinina, esteroides e triantereno.
Medicamentos que diminuem leucócitos
Antibióticos, anticonvulsivantes, anti-histamínicos,
antimetabólitos, medicamentos antitireoidianos,
arsenicais, barbitúricos, agentes quimioterápicos,
diuréticos e sulfonamidas.
quanto mais desce mais inflamado está:
fator de coagulação e inflamatório
ativado.
álcool também aumenta a velocidade
de sedimentação.
PCR: proteína C reativa (indicativo
de inflamação - mais para
diagnóstico diferencial e
extremamente sensível).
VHS (velocidade de hemossedimentação)
Testes mais sensíveis que o
hemograma: