questionario 1 bioengenharia

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Curso BIOENGENHARIA E BIOTECNOLOGIA APLICADA A BIOMEDICINA 
Teste QUESTIONÁRIO UNIDADE I 
Iniciado 26/04/22 19:52 
Enviado 26/04/22 19:54 
Status Completada 
Resultado da 
tentativa 
5 em 5 pontos 
Tempo decorrido 1 minuto 
Resultados 
exibidos 
Todas as respostas, Respostas enviadas, Respostas corretas, Comentários, 
Perguntas respondidas incorretamente 
• Pergunta 1 
0,5 em 0,5 pontos 
 
Você deseja clonar um segmento de DNA recém-purificado de uma PCR, em 
um vetor específico – ambos representados na imagem a seguir. As 
sequências das extremidades do segmento purificado da PCR estão 
representadas pelas letras que constituem as bases dos nucleotídeos do 
DNA. Assim, é possível analisar qual enzima de restrição é a mais adequada 
para dar continuidade com o processo de clonagem. Admita que em seu 
laboratório você possui disponível apenas as enzimas de restrição listadas: 
BamHI, EcoRI, EcoRV, SmaI e XmaI. 
 
 
 
A partir das informações e do seu conhecimento sobre o assunto, 
determine qual alternativa apresenta a enzima de restrição adequada para 
você dar segmento com seu experimento de clonagem, considerando que 
você deseja controlar a posição de inserção do fragmento, respeitando o 
sentido de leitura do gene e que você irá utilizar a mesma enzima de 
restrição para digerir o inserto e o vetor. Nas alternativas estão apontados 
os sítios de reconhecimento de cada enzima de restrição. 
 
Resposta Selecionada: d. 
XmaI. 
Respostas: a. 
BamHI. 
 b. 
EcoRI. 
 c. 
SmaI. 
 d. 
XmaI. 
 e. 
EcoRV. 
Comentário 
da resposta: 
Alternativa: D 
Comentário: a enzima de restrição XmaI reconhece a 
mesma sequência da enzima SmaI (presente no vetor), 
porém cliva em sítio diferente. A clivagem mediada por 
XmaI deixa extremidades coesivas e garante a posição 
de inserção do segmento de interesse, garantido que o 
sentido de leitura do gene será respeitado. A utilização 
das enzimas SmaI ou EcoRV, as únicas cujos sítios de 
reconhecimento são encontrados tanto no inserto 
quanto no vetor, não seriam adequadas, pois deixam 
extremidades cegas e não garantem o sentido de 
inserção do segmento de interesse. As enzimas EcoRI e 
BanHI não apresentam sítio de reconhecimento na 
sequência de interesse, apenas no vetor, desta forma, 
ambas não poderiam ser usadas para deixar 
extremidades coesivas no inserto. 
 
 
• Pergunta 2 
0,5 em 0,5 pontos 
 
Qual das seguintes estratégias seria a mais adequada para purificação de uma mistura 
contendo proteínas de tamanhos 
distintos? 
 
Resposta Selecionada: c. 
Cromatografia em gel filtração. 
Respostas: a. 
Cromatografia de afinidade. 
 b. 
Cromatografia de troca catiônica. 
 c. 
Cromatografia em gel filtração. 
 
 d. 
Cromatografia de troca aniônica. 
 e. 
Cromatografia por interação hidrofóbica. 
Comentário 
da resposta: 
Alternativa: C 
Comentário: considerando que as proteínas da mistura apresentam 
tamanhos diferentes, a cromatografia em gel filtração é a alternativa mais 
adequada. Nela, a fase estacionária é constituída por resina contendo 
esferas com orifícios. As proteínas de menor tamanho (menor massa) 
penetram dentro dos orifícios das esferas que funcionam como 
obstáculos. Desta forma, o fluxo dessas proteínas menores pela coluna 
cromatográfica é mais lento, quando comparado com o fluxo de proteínas 
maiores, que por sua vez não são atrasadas pelos obstáculos (são grandes 
demais para passar pelos orifícios das esferas). Assim, é possível coletar 
em diferentes momentos da purificação as proteínas de tamanhos 
distintos. 
 
• Pergunta 3 
0,5 em 0,5 pontos 
 
Um pesquisador deseja clonar a sequência codificante de um gene de 540 
pb a jusante ( downstream) do promotor (200 pb) de um vetor, para 
subsequente expressão e purificação da proteína de interesse. Assim, o 
gene foi isolado como fragmento da ação da enzima de restrição SmaI (o 
sítio de reconhecimento dessa enzima é CCC↓GGG / a seta indica sítio de 
clivagem) e clonado no sítio SmaI do vetor localizado imediatamente a 
jusante do promotor. A sequência do gene contém um único sítio para 
enzima de restrição EcoRI localizada 70 pb a jusante do códon iniciador. A 
representação esquemática do plasmídeo a seguir indica a localização dos 
sítios de reconhecimento de algumas enzimas de restrição no vetor e a 
posição de inserção do gene de interesse. 
 
 
 
 
O pesquisador avaliou as colônias obtidas no processo de clonagem por 
 
meio da digestão do material com as duas enzimas de restrição HindIII e 
EcoRI. Qual dos seguintes padrões de digestão com essas duas enzimas de 
restrição representa o clone com perfil desejado pelo pesquisador para os 
experimentos de superexpressão? 
Resposta 
Selecionada: 
a. 
~270 pb + ~470 pb + o restante da estrutura 
vetor. 
Respostas: a. 
~270 pb + ~470 pb + o restante da estrutura 
vetor. 
 b. 
~740 pb + ~70 pb + o restante da estrutura vetor. 
 c. 
~200 pb + o restante da estrutura vetor. 
 d. 
~810 pb + o restante da estrutura vetor. 
 e. 
~200 pb + 540 pb + o restante da estrutura vetor. 
Comentário 
da resposta: 
Alternativa: A 
Comentário: ao clivar o vetor contendo o inserto com as 
duas enzimas de restrição, teremos: (1) um fragmento 
correspondendo ao promotor (200 pb) mais 70 pb do 
gene, produzido pela clivagem com a HindIII a montante 
( upstream) do promotor e pela clivagem com a EcoRI 
presente dentro do gene (70 pb a início do códon 
iniciador) e (2) outro fragmento de 470 pb 
correspondente à clivagem nos sítios EcoRI dentro do 
gene (a 70 pb do início da transcrição) e EcoRI a jusante 
final do gene. 
 
 
• Pergunta 4 
0,5 em 0,5 pontos 
 
Leia e analise as proposições. 
I- CRISPR é um acrônimo da língua inglesa das palavras repetições 
palindrômicas curtas agrupadas e regularmente interespaçadas 
( clustered regularly interspaced short palindromic repeat). 
 
II- O operon CRISPR contém fragmentos de DNA viral provenientes 
de infecções prévias sofridas por organismos procariontes. Os 
cientistas descobriram que ele faz parte de um mecanismo de defesa 
de bactérias, sendo posteriormente adaptado como uma ferramenta 
de edição gênica. 
 
III- Sequências PAM, sgRNA ( single guide), Cas são componentes 
importantes no processo de edição gênica mediada pelo operon 
CRISPR. 
IV- A edição gênica promovida pelo sistema CRISPR/Cas pode ser 
realizada apenas em éxons. 
V- A edição gênica realizada pelo sistema CRISPR/Cas permite 
exclusivamente a remoção de fragmentos do genoma (construção 
de knock-outs), além de ser uma técnica que pode ser aplicada 
apenas em organismos mais simples, como os procariontes. 
 
Assinale a alternativa correta. 
Resposta Selecionada: b. 
Estão corretas apenas as afirmativas I, II e III. 
Respostas: a. 
Estão corretas apenas as afirmativas I e II. 
 b. 
Estão corretas apenas as afirmativas I, II e III. 
 c. 
Estão corretas apenas as afirmativas II, III e IV. 
 d. 
Estão corretas apenas as afirmativas I, III e V. 
 e. 
Estão corretas apenas as afirmativas II, III e V. 
Comentário 
da resposta: 
Alternativa: B 
Comentário: a edição gênica promovida pelo sistema 
CRISPR/Cas pode ser realizada em qualquer lugar do 
genoma, desde que o sgRNA se ligue a montante de 
uma sequência PAM. A alternativa V está errada, pois a 
edição mediada pelo sistema CRISPR/Cas pode ser 
utilizada em diversas aplicações e não apenas na 
construção de knock-outs, tais como ativação/repressão 
gênica, substituição alélica, clivagem de DNA/RNA, 
deleção de genes, knock-in/ out, inserção de transgenes, 
geração de variação genética, além de outras 
abordagens possíveis como DNA labeling, mapeamento 
gênico, RNA tracking. Essa técnica também pode ser 
utilizada em células eucariontes e organismos 
complexos. 
 
 
• Pergunta 5 
0,5 em 0,5 pontos 
 
Um dos reagentes utilizados na preparação de células competentes é: 
RespostaSelecionada: e. 
CaCl2. 
Respostas: a. 
HCl. 
 b. 
NaCl. 
 c. 
Glicina. 
 d. 
Formamida. 
 e. 
CaCl2. 
Comentário da 
resposta: 
Alternativa: E 
Comentário: o CaCl2 é utilizado na preparação de células competentes, 
uma vez que, juntamente com o choque térmico, permite a abertura de 
poros na membrana plasmática facilitando a entrada do DNA exógeno 
na célula. 
 
 
• Pergunta 6 
0,5 em 0,5 pontos 
 
Eletroporação é: 
Resposta 
Selecionada: 
d. 
Aplicação de pulsos de alta voltagem, geralmente 
utilizados para criação de poros na membrana 
plasmática das células. 
Respostas: a. 
O processo de separação de moléculas carregadas, 
por meio de um gel mantido em um campo elétrico. 
 
b. 
O processo que permite a ligação do DNA exógeno a 
um vetor eletricamente carregado. 
 c. 
O processo que estimula a multiplicação celular. 
 
d. 
Aplicação de pulsos de alta voltagem, geralmente 
utilizados para criação de poros na membrana 
plasmática das células. 
 
e. 
Aplicação de pulsos de baixa voltagem, usados para 
fechar os poros da membrana plasmática das células 
após protocolo de choque térmico. 
 
Comentário 
da resposta: 
Alternativa: D 
Comentário: a captação de DNA livre pode ocorrer 
submetendo bactérias a um campo elétrico de alta 
tensão. Esse procedimento é conhecido como 
eletroporação. Os protocolos de eletroporação variam 
entre as diferentes espécies bacterianas. 
 
• Pergunta 7 
0,5 em 0,5 pontos 
 
Vetores são: 
Resposta 
Selecionada: 
c. 
Moléculas que são capazes de se ligar covalentemente 
a um segmento de DNA e carregá-lo para o interior 
das células. 
Respostas: a. 
Moléculas que degradam ácidos nucleicos. 
 b. 
Moléculas que auxiliam na replicação. 
 
c. 
Moléculas que são capazes de se ligar covalentemente 
a um segmento de DNA e carregá-lo para o interior 
das células. 
 
d. 
Moléculas que protegem a célula hospedeira contra a 
invasão de DNA exógeno. 
 
e. 
Moléculas que impedem a replicação do DNA 
endógeno da célula. 
Comentário da 
resposta: 
Alternativa: C 
Comentário: os vetores são capazes de carregar 
moléculas de DNA exógeno para o interior das células e 
são frequentemente utilizados no processo de 
clonagem molecular. 
 
 
• Pergunta 8 
0,5 em 0,5 pontos 
 
Os cosmídeos não apresentam: 
Resposta 
Selecionada: 
a. 
Genes que codificam proteínas virais. 
Respostas: a. 
Genes que codificam proteínas virais. 
 b. 
 
Origem de replicação. 
 c. 
Genes de resistência a antibióticos. 
 
d. 
Sítios de reconhecimento para enzimas de 
restrição. 
 e. 
Sequência cos. 
Comentário 
da resposta: 
Alternativa: A 
Comentário: os genes virais são removidos para “abrir” 
espaço na construção, permitindo a inserção de 
fragmentos de DNA de até 45 kb. Os plasmídeos e os 
bacteriófagos permitem a inserção de fragmentos de 
DNA de apenas 10 e 20 kb, respectivamente. 
 
• Pergunta 9 
0,5 em 0,5 pontos 
 
Qual é o papel das enzimas de restrição nas bactérias? 
Resposta 
Selecionada: 
b. 
Degradar o DNA de fagos invasores. 
Respostas: a. 
Degradar o cromossomo bacteriano durante a 
replicação. 
 b. 
Degradar o DNA de fagos invasores. 
 c. 
Produzir iniciadores de RNA para a replicação. 
 
d. 
Degradar o DNA de outras bactérias durante o 
processo de conjugação. 
 
e. 
Inserir o DNA de fagos invasores no DNA 
cromossômico. 
Comentário 
da resposta: 
Alternativa: B 
Comentário: as enzimas de restrição sintetizadas pelas 
bactérias reconhecem sequências específicas do 
genoma dos fagos e promovem a clivagem da ligação 
fosfodiéster do DNA viral nesses pontos. Assim, esse 
mecanismo de defesa de bactérias as protege contra 
infecções pelos fagos. 
 
 
• Pergunta 10 
0,5 em 0,5 pontos 
 
“Em 1998, a equipe do biólogo James Thomson, da Universidade de 
Wisconsin, Estados Unidos, isolou e desenvolveu pela primeira vez 
em laboratório uma linhagem de células-tronco extraídas de 
embriões humanos. Foi um feito técnico e um problema ético para a 
pesquisa biológica. Feito, porque os estudos com essas células 
podem, em teoria, levar a melhores tratamentos ou à cura de uma 
lista quase interminável de doenças. Se devidamente cultivadas, as 
células-tronco embrionárias, e apenas elas, podem dar origem a 
todos os tecidos de um organismo, cerca de 220 tipos distintos de 
células que seriam a matéria- prima de novas terapias. Problema, 
porque a forma de obtê-las ofende a crença de parcelas da 
sociedade, em especial os religiosos, e, em alguns países, também as 
leis: as células-tronco são retiradas de embriões, que, ao ceder esse 
material, tornam- se inviáveis.” (Pesquisa Fapesp, 
https:// revistapesquisa.fapesp.br/celulas-tronco/, 2005) 
 
Com relação às células-tronco, é incorreto afirmar: 
 
Resposta 
Selecionada: 
d. 
Quando retiradas de embriões congelados, eliminam as 
questões éticas e religiosas associadas à obtenção de 
órgãos para transplantes, independentemente do 
tempo de congelamento. 
Respostas: a. 
As células-tronco podem ser retiradas da massa celular 
interna de blastocistos. 
 
b. 
As células-tronco de um paciente podem ser usadas 
para regenerar seus tecidos ou órgãos lesados, 
eliminando o risco de rejeição imunológica. 
 
c. 
As células-tronco de adulto, caso recebam estímulo 
adequado, são capazes de se diferenciar em outros 
tipos de célula, independentemente do seu tecido de 
origem. 
 
d. 
Quando retiradas de embriões congelados, eliminam as 
questões éticas e religiosas associadas à obtenção de 
órgãos para transplantes, independentemente do 
tempo de congelamento. 
 e. 
 
As células-tronco embrionárias são capazes de se 
diferenciar em outros tipos de células, desde que 
cultivadas sob condições adequadas. 
Comentário 
da resposta: 
Resposta: D 
Comentário: células-tronco são células indiferenciadas, 
ou seja, são células não especializadas do corpo 
humano. Elas são capazes de se diferenciarem em 
outros tipos celulares e têm a capacidade de se 
autorrenovar (isso quer dizer que elas podem se dividir 
e originar novas células-tronco). Células-tronco podem 
ser obtidas a partir da massa celular interna do 
blastocisto. Foi observado que tecidos adultos também 
possuem populações de células-tronco, células que, se 
receberem o estímulo adequado em laboratório, podem 
dar origem a diferentes tipos celulares. O uso de células-
tronco embrionárias continua sendo motivo de debate 
ético. No Brasil, é permitida pesquisa com células-tronco 
retiradas de embriões humanos congelados. Para isso, é 
necessário que o embrião seja inviável ou que tenha 
permanecido congelado por mais de 3 anos. Além disso, 
a utilização apenas pode ocorrer a partir do 
consentimento dos genitores. 
 
 
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