Transcrição

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Daniella Machado
M	 Turma XXVI 
	 Nome da matéria– Módulo X 	 Daniella Machado
 Morfofuncional– 1º período UniEVANGÉLICA 	 Turma XXVI 
Transcrição 
Transcrições e modificações pós-transcricionais– Introdução ao Estudo da Medicina
Morfofuncional: Módulo 1
É a síntese de moléculas de RNA sobre a base de moldes de DNA. Ocorre pela união dos nucleotídeos U, C e G entre si, seguindo uma ordem definida pelos nucleotídeos complementares do DNA. Essa complementaridade determina as bases T, A, G e C do DNA. Estabelecendo ligações transitórias (não covalentes) das bases do DNA às bases do RNA em formação.
O crescimento é sempre do sentido 5’-3’, ou seja, os nucleotídeos são adicionados a uma ponta de crescimento 3’.
Ligação fosfodiéster
O grupo fosfato liga o C5’ da ribose de um nucleotídeo seguinte. A molécula de RNA é polarizada, com um fosfato em sua extremidade 5’e uma hidroxila em sua extremidade 3’, são conduzidas e catalisadas pelas RNA polimerase.
RNA: cadeia unifilamentar de nucleotídeos, a uracila está no lugar da timina.
Gene
É uma sequência de DNA que codifica um elemento funcional (RNA).
DNA gênico e DNA extragênico. 
Dogma 
Duplicação, transcrição e tradução.
RNA para DNA.
Cadeias de DNA são separadas, os quatro nucleotídeos se pareariam com as desoxirribonucleotídios complementares do DNA, ademais cada ribonucleotídio se uniria a seus dois vizinhos, os ribonucleotídios separariam dos desoxirribonucleotídios do DNA liberando o RNA, as cadeias do DNA se uniriam novamente.
Transcrição de só uma fita
Só uma cadeia é copiada na direção 3’-5’, no DNA é formado a bolha de transcrição (determina a separação das duas cadeias do DNA e deixa exposto o primeiro desoxirribonucleotídios) que se desloca conforme são “lidos “seus nucleotídeos.
Os monômeros com os quais as moléculas de RNA são construídas apresentam-se no nucleoplasma como ribonucleotídios trifosfato (ATP, UTP, CTP e GTP). Começa quando um desses ribonucleosídios estabelece uma ligação transitória com a base complementar do primeiro nucleotídeo do gene. O promotor liga-se à RNA polimerase e promove a interação com o DNA (na extremidade 5’, segmento codificador). Os dois ribonucleotídios que participam da bolha permanecem unidos, que possibilita a ligação fosfodiéster e a originarão de um dinucleotídio.
O RNA polimerase realiza o alongamento do RNA, fazendo com que a bolha avance.
A transcrição terena quando o RNA polimerase chega à sequência de finalização na extremidade 3’do gene, a enzima desprende-se e o RNA se solta e ganha o nome de transcrito primário.
A primeira base transcrita está sempre na mesma localização (sítio de iniciação). O promotor é o upstream (sinais negativos) do sítio de iniciação, o sítio downtreams (sinais positivos) esta localizado posterior ao sentido de transcrição.
Sequência consenso, sequência de nucleotídeos
· 5’-3’DNA fita codificadora
· 3’-5- DNA fita molde
· 5’-3’-RNA transcrito
Fita molde/template: 3’-5’é transcrita; bottom strand, template strand or antisense strand
Fita não molde codante/sense: 5’-3’, não é transcrita; top strand, coding strad or sense strand
A fita tem que abrir – bolha- para fazer a transcrição 
3’ TAC TTT GCA GAT ATT 5’			5’GAT ATG TTT ACT TGA. 3’
5’AUG AAA CGU CUA UAA 3’		3’ CTA TAC AAA TGA ACT 5’( DNA complemnetar)
Guanina com citosina				5’GAU AUG UUU ACU UGA3’
Citosina com guanina
Timina com adenina
Adenina com uracila
RNA polimerase
RNA polimerase I: o rRNA 45s
“	“	II: sintetiza os mRNA, os miRNA e a maioria dos pnRNA
“	“	III: rRNA 5S, tRNA, pcRNA e alguns pn RNA
tipos de RNA
RNA mensageiro/RNAm
Informacional, 3%. A sua síntese ocorre quando o gene respectivo (sequencias reguladoras e o promotor) é ativado pelos fatores de transcrição.
Tem como função codificar informações necessárias para produzir proteínas.
Os fatores de transcrição específico: interagem com o regulador do gene, podem ser ativadores (com os amplificadores) ou repressores (com inibidores no regulador), são facultativos
Fatores de transcrição gerais: são requeridos pelo promotor, ligando-se a sequencia TATA para iniciar a síntese do mRNA, TFIIB, TFIID (TATA binding protein e TAf TBP-ASSOCIATEDD FACTOR), TFIIA, TFIIF,TFIIE e TFIIH, são constitutivos
Alongar o mRNA, fatores de alongamento SII e SII(elongina).
Conjunto de transcritos primários dos mRNA: RNA heterógeno nuclear ou hnRNA (éxons íntrons que constituem a fase aberta de leitura de um gene), encontram-se ligados a diversas proteínas básicas, que se ligam aos mRNA à medida que são sintetizado, juntamente com as proteínas reebe o nome de ribonucleoproteína heterógena nuclear ou hnRNP. As proteínas agem como chaperonas que mantem os mRNA estirados.
As regulações podem ocorrer após a síntese de RNA, durante o processamento do transcrito primário,ou no momento posterior do controle de exportação do mRNA ao citoplasma ou de sua sobrevivência no citosol.
50% dos transcritos primários não completam a sua síntese.
O conjunto de mRNA e gene assemelha-se a uma árvore de Natal. A especificidade da ligação depende da complementaridade estrutural entre as partes que interagem.
Os fatores de transcrição reconhecem o DNA dos promotores e dos reguladores por suas bases
RNA transportador/RNAt
Estrutural, formar o ribossomo e síntese proteica 70%. É conduzida pela enzima RNA polimerase III, que requer dois fatores de transcrição se unam ao promotor: TFIIIB e o TFIIIC. Tem como objetivo transportar o aminoácido correto até o mRNA na tradução. 
RNA ribossômico/RNAr
Transporte de aminoácidos 15 %
O 5S, pela RNApolimerase III: TFIIIA, TFIIIB e TFIIIC, ligam-se ao promotor do gene, cessa quando a polimerase alcança a sequencia de finalização cheia de timinas.
Tem como papel ser um dos principais componentes dos ribossomos.
Pequenos (small) RNA nucleares-sncRNA
Processamento de RNA transcritos,
 snoRNA (small nucleolar): modificação do RNA (spliceossomo).
miRNA (micro): r
egulação da expressão genica (silenciamento), 
siRNA (small interfering): 
defesa do genoma contra vírus e transposons e protege e a integridade do genoma.
pnRNA 
é sintetizada pela RNA polimerase II e alguns outros pela RNA polmimerase III,. O fator de transcrição chamado SNAPc (small nuclear activator protein complex )vinculado as ambas as polimerase, tem uma subunidade TBP e se liga à sequencia TATA ou a PSE do promotor,o pcRNA suas cópias são transcritas pela RNA polimerase III
Alguns tem spliceossomo
Longos Não Codante LncRNA
Função: imprinting e inativação do X (XIST), compactação do cromossomo
Enorme componente da rede celular normal que pode ser alterada na biologia do câncer
Substância indutora
Molécula pequena que se liga ao repressor, toda subunidade do repressor tem um sítio de ligação para a substância indutora, provocando uma mudança conformacional.
Todo DNA é transcrito?
A maioria não é transcrito, apenas alguns genes de uma célula são transcritos
Número de proteínas de uma célula deve ser igual ao número de genes? Não, um gene pode codificar mais de uma proteína
O corpo humano tem cerca de 19 mil genes 
Gene
Inclui regiões 5’e 3’ ano codificantes, que estão envolvidas na regulação da transcrição e tradução, e todos os íntrons dentro do gene
Região promotora+ORF+ sequência de terminação
ORF (open Reading frame) região transcrita, forma RNAm imatura
Contém íntrons e éxons 
Promotor: 
Sequência de bases do DNA gênico reconhecida pelo complexo enzimático responsável pela transcrição, sítio de ligação da RNA polimerase e de fatores de transcrição. Localiza na 5’, Tata box CAT-CCAAT. Estão antes do códon de início da ORF (5’UPSTREAM) -ATG ( o principal códon de ligação).
Regiões reguladores
Enhancers/amplificadores: potencializador, sítio de ligações de fatores ativadores da transcrição 
Bloqueadores/silencers: sítio de ligação de um fator repressor
Sem a região promotora: sem transcrição,monosistromicas.
RNA polimerase
É a principal enzima de transcrição 
RNA Pol I: produz RNA ribossomal ( rRNA)
RNA Pol II: produz RNAm, Micro RNA, LncRNA
RNA Pol III: produz RNAs transportadores e o rRNA (5S): snRNA
Fatores de transcrição TBPs (TATA binding proteins) TAFs (TBP associated factors)
Sequência de término: UAA,UGA,UAG,estrutura em forma de grampo
Modificações pós transcricionais
Remoção dos íntrons (splicing)
Íntrons: sequencias não codantesadenina localizada regra GU-AG
Sequencias terminais reconhecem e removem os introns o spliceosomo
mRNA maduro
O RNAm maduro é lido então pelo ribossomo- produção de um polipeptídio
Remove os íntrons e une os éxons (pode ser chamado de recomposição), para a produção de um RNA maduro que contem informação contínua necessária para sintetizar uma proteína, e modificações na extremidade 3’(adição de cauda poli A) e na extremidade 5’( adição de uma Guanina metilada).
Splicing alternativo:
Rearranjo diferencial dos éxons para formar RNAm maduro gerando diversidade de proteínas,
EDITORAMENTO
RNA guia (RNAg) tipo de RNA que introduz nucleotídeos no RNAm maduro
Processo de modificação do RNAm maduro através da ação do RNAg, gera diversidade protéica.
Diferença da transcrição em procariontes e eucariontes
Procarioto: 
Não tem íntrons, não precisa de splicing a transcrição simultânea a tradução, não há modificações após a transcrição, bactéria não tem núcleo, RNA é traduzido ao mesmo tempo que é produzido o RNA polimerase.
A RNA polimerase se liga a sequência de DNA especifica – promotor- 
POLICISTRONICOS: carregam mais de uma ORF
Eucarioto:
É a adição de CAP, poliadenilacao, remoção dos íntrons.
MONOCISTRONICOS: por carregarem uma ORF
Éxons: regiões expressas que codificam proteínas
Íntrons: regiões intercalares, que separa os éxons
Tem mais genes a ser transcritos e reconhecidos, existe muito mais DNA não codificador em eucariotos. 
PROTEOMA:
Musculo e nervo: hetecromatina
Pele: metilação 
Célula sofreu uma mutação e amplificou as regiões enhancers do gene IGF(fator de crescimento), aumentando a taxa de transcrição do gene.