Diagnóstico molecular de doenças genéticas - Biologia Molecular

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DIAGNO� STICO MOLECULAR DE DOENÇAS GENE� TICAS
- principais classes de mutaça�o:
1) Deleça�o: desde 1pb - megabases;
2) Inserça�o: inserça�o de uma ou mais base;
3) Transiça�o ou Transversa�o
+ A SERINA e a TREONINA possuem cadeias laterais polares promovendo a
forma estrutural; ja� a PROLINA apresenta cadeia lateral r��gida fazendo com que
haja uma dobra na cadeia (gera uma alteraça�o estrutural importante).
Tipos de mutaça�o: SILENCIOSA, SEM SENTIDO E SENTIDO ERRADO.
MUTAÇO� ES PONTUAIS: Alteraço� es em um u� nico nucleot��deo;
MUTAÇO� ES DINA� MICAS: Repetiço� es em tandem que podem mudar de tamanho
quando passadas de geraça�o para geraça�o.
EXPANSA� O DE TRINUCLEOTI�DEOS: 10 repetiço� es de nucleot��deos podem gerar
repetiço� es diferentes - CAG. AGC, GCA e complementares;
As repetiço� es podem levar ao acu� mulo do produto ge�nico em diferentes ce� lulas,
ale�m de gerar instabilidade cromosso� mica (quebras).
Acredita-se que as repetiço� es ocorrem devido deslizes da enzima polimerase
que realiza a inserça�o de nucleot��deos a mais durante a replicaça�o.
1) Feno� tipo normal - nº de repetiço� es normais;
2) Pre� -mutaça�o - aumento no nu� mero de repetiço� es, a transmissa�o pode levar a
mutaça�o completa;
3) Mutaça�o - feno� tipo alterado.
Algumas doenças causadas pela expansa�o de trinucleot��deos: S��ndrome do X
fra�gil, Doença de Kenedy, Distrofia Mioto� nica, Doença de Huntington,...
Diagno� stico dessas alteraço� es:
- PCR-RFLP e Sequenciamento (identificam SNPs)
- Southern blot (detecta deleça�o ou multiplicaça�o)
DOENÇA DE HUNTINGTON
Alteraço� es neuroanato� micas.
Diagno� stico feito utilizando PCR.
DISTROFIA MIOTO� NICA
Geralmente, os fragmentos sa�o grandes demais para que possam ser
realizado o PCR, logo, utiliza-se Southern blot.
CA� NCER
Recorrente da aquisiça�o de mutaça�o no DNA geno� mico devido a
exposiça�o a muta�genos, erros de duplicaça�o ou efeito do envelhecimento.
O acu� mulo de mutaço� es desencadeia a malignaça�o, ocorre no proto-
oncogene ou no gene de supressir tumoral (controla o ciclo
sinalizandoce� lulas defeituosas).
A perda da heterozigosidase e� algo que pode desencadear o ca�ncer -
cromossomo 17 possui o gene p53 (2 co� pias) se uma e� mutada (proto-
oncogenese) e a outra e� perdida, ha� uma perda da heterogozigosidase.
Microarray: nova ferramenta da biomedicina, busca analisar a expressa�o
das ce� lulas tumorais (com um controle - ce� lula normal) adiciona-se 2
cDNA sinte� ticos com sonda, a cor verde representa baixa expressa�o e o
vermelho alta expressa�o. Assim, e� poss��vek realizar a detreminaça�o do
perfil da expressa�o ge�nica.
A expressa�o ge�nica pode ser comparada para se realizar progno� stico.