biotecnologia aplicada a biomedicina 1

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Curso BIOENGENHARIA E BIOTECNOLOGIA APLICADA A BIOMEDICINA 
Teste QUESTIONÁRIO UNIDADE I 
Iniciado 07/04/23 10:46 
Enviado 08/04/23 15:13 
Status Completada 
Resultado da 
tentativa 
5 em 5 pontos 
Tempo decorrido 28 horas, 26 minutos 
Resultados 
exibidos 
Todas as respostas, Respostas enviadas, Respostas corretas, Comentários, Perguntas 
respondidas incorretamente 
 Pergunta 1 
0,5 em 0,5 pontos 
 
Você deseja clonar um segmento de DNA recém-purificado de uma 
PCR, em um vetor específico – ambos representados na imagem a 
seguir. As sequências das extremidades do segmento purificado da 
PCR estão representadas pelas letras que constituem as bases dos 
nucleotídeos do DNA. Assim, é possível analisar qual enzima de 
restrição é a mais adequada para dar continuidade com o processo de 
clonagem. Admita que em seu laboratório você possui disponível 
apenas as enzimas de restrição listadas: BamHI, EcoRI, EcoRV, SmaI e 
XmaI. 
 
 
A partir das informações e do seu conhecimento sobre o assunto, 
determine qual alternativa apresenta a enzima de restrição adequada 
para você dar segmento com seu experimento de clonagem, 
considerando que você deseja controlar a posição de inserção do 
fragmento, respeitando o sentido de leitura do gene e que você irá 
utilizar a mesma enzima de restrição para digerir o inserto e o vetor. 
Nas alternativas estão apontados os sítios de reconhecimento de cada 
enzima de restrição. 
 
Resposta Selecionada: d. 
XmaI. 
Respostas: a. 
BamHI. 
 b. 
 
EcoRI. 
 c. 
SmaI. 
 d. 
XmaI. 
 e. 
EcoRV. 
Comentário 
da resposta: 
Alternativa: D 
Comentário: a enzima de restrição XmaI reconhece a 
mesma sequência da enzima SmaI (presente no vetor), 
porém cliva em sítio diferente. A clivagem mediada por 
XmaI deixa extremidades coesivas e garante a posição de 
inserção do segmento de interesse, garantido que o sentido 
de leitura do gene será respeitado. A utilização das enzimas 
SmaI ou EcoRV, as únicas cujos sítios de reconhecimento 
são encontrados tanto no inserto quanto no vetor, não 
seriam adequadas, pois deixam extremidades cegas e não 
garantem o sentido de inserção do segmento de interesse. 
As enzimas EcoRI e BanHI não apresentam sítio de 
reconhecimento na sequência de interesse, apenas no 
vetor, desta forma, ambas não poderiam ser usadas para 
deixar extremidades coesivas no inserto. 
 
 Pergunta 2 
0,5 em 0,5 pontos 
 
Qual das seguintes estratégias seria a mais adequada para purificação de uma mistura contendo 
proteínas de tamanhos distintos? 
Resposta Selecionada: c. 
Cromatografia em gel filtração. 
Respostas: a. 
Cromatografia de afinidade. 
 b. 
Cromatografia de troca catiônica. 
 c. 
Cromatografia em gel filtração. 
 d. 
Cromatografia de troca aniônica. 
 e. 
Cromatografia por interação hidrofóbica. 
Comentário 
da resposta: 
Alternativa: C 
Comentário: considerando que as proteínas da mistura apresentam tamanhos 
diferentes, a cromatografia em gel filtração é a alternativa mais adequada. Nela, 
a fase estacionária é constituída por resina contendo esferas com orifícios. As 
proteínas de menor tamanho (menor massa) penetram dentro dos orifícios das 
esferas que funcionam como obstáculos. Desta forma, o fluxo dessas proteínas 
menores pela coluna cromatográfica é mais lento, quando comparado com o 
fluxo de proteínas maiores, que por sua vez não são atrasadas pelos obstáculos 
(são grandes demais para passar pelos orifícios das esferas). Assim, é possível 
 
coletar em diferentes momentos da purificação as proteínas de tamanhos 
distintos. 
 
 Pergunta 3 
0,5 em 0,5 pontos 
 
Um pesquisador deseja clonar a sequência codificante de um gene de 
540 pb a jusante (downstream) do promotor (200 pb) de um vetor, para 
subsequente expressão e purificação da proteína de interesse. Assim, o 
gene foi isolado como fragmento da ação da enzima de restrição SmaI 
(o sítio de reconhecimento dessa enzima é CCC↓GGG / a seta indica 
sítio de clivagem) e clonado no sítio SmaI do vetor localizado 
imediatamente a jusante do promotor. A sequência do gene contém um 
único sítio para enzima de restrição EcoRI localizada 70 pb a jusante do 
códon iniciador. A representação esquemática do plasmídeo a seguir 
indica a localização dos sítios de reconhecimento de algumas enzimas 
de restrição no vetor e a posição de inserção do gene de interesse. 
 
 
 
O pesquisador avaliou as colônias obtidas no processo de clonagem por 
meio da digestão do material com as duas enzimas de restrição HindIII 
e EcoRI. Qual dos seguintes padrões de digestão com essas duas 
enzimas de restrição representa o clone com perfil desejado pelo 
pesquisador para os experimentos de superexpressão? 
 
Resposta Selecionada: a. 
~270 pb + ~470 pb + o restante da estrutura vetor. 
Respostas: a. 
~270 pb + ~470 pb + o restante da estrutura vetor. 
 b. 
~740 pb + ~70 pb + o restante da estrutura vetor. 
 c. 
~200 pb + o restante da estrutura vetor. 
 d. 
~810 pb + o restante da estrutura vetor. 
 e. 
~200 pb + 540 pb + o restante da estrutura vetor. 
Comentário 
da resposta: 
Alternativa: A 
Comentário: ao clivar o vetor contendo o inserto com as 
duas enzimas de restrição, teremos: (1) um fragmento 
correspondendo ao promotor (200 pb) mais 70 pb do gene, 
 
produzido pela clivagem com a HindIII a montante 
(upstream) do promotor e pela clivagem com a EcoRI 
presente dentro do gene (70 pb a início do códon iniciador) 
e (2) outro fragmento de 470 pb correspondente à clivagem 
nos sítios EcoRI dentro do gene (a 70 pb do início da 
transcrição) e EcoRI a jusante final do gene. 
 
 Pergunta 4 
0,5 em 0,5 pontos 
 
Leia e analise as proposições. 
I- CRISPR é um acrônimo da língua inglesa das palavras repetições 
palindrômicas curtas agrupadas e regularmente interespaçadas 
(clustered regularly interspaced short palindromic repeat). 
 
II- O operon CRISPR contém fragmentos de DNA viral provenientes de 
infecções prévias sofridas por organismos procariontes. Os cientistas 
descobriram que ele faz parte de um mecanismo de defesa de 
bactérias, sendo posteriormente adaptado como uma ferramenta de 
edição gênica. 
III- Sequências PAM, sgRNA (single guide), Cas são componentes 
importantes no processo de edição gênica mediada pelo operon 
CRISPR. 
IV- A edição gênica promovida pelo sistema CRISPR/Cas pode ser 
realizada apenas em éxons. 
V- A edição gênica realizada pelo sistema CRISPR/Cas permite 
exclusivamente a remoção de fragmentos do genoma (construção 
de knock-outs), além de ser uma técnica que pode ser aplicada apenas 
em organismos mais simples, como os procariontes. 
 
Assinale a alternativa correta. 
 
Resposta Selecionada: b. 
Estão corretas apenas as afirmativas I, II e III. 
Respostas: a. 
Estão corretas apenas as afirmativas I e II. 
 b. 
Estão corretas apenas as afirmativas I, II e III. 
 c. 
Estão corretas apenas as afirmativas II, III e IV. 
 d. 
Estão corretas apenas as afirmativas I, III e V. 
 e. 
Estão corretas apenas as afirmativas II, III e V. 
Comentário 
da resposta: 
Alternativa: B 
Comentário: a edição gênica promovida pelo sistema 
CRISPR/Cas pode ser realizada em qualquer lugar do 
genoma, desde que o sgRNA se ligue a montante de uma 
sequência PAM. A alternativa V está errada, pois a edição 
mediada pelo sistema CRISPR/Cas pode ser utilizada em 
 
diversas aplicações e não apenas na construção de knock-
outs, tais como ativação/repressão gênica, substituição 
alélica, clivagem de DNA/RNA, deleção de genes, knock-
in/out, inserção de transgenes, geração de variação 
genética, além de outras abordagens possíveis como 
DNA labeling, mapeamento gênico, RNA tracking. Essa 
técnica também pode ser utilizada em células eucariontes e 
organismos complexos. 
 
 Pergunta 5 
0,5 em 0,5 pontos 
 
Um dos reagentes utilizados na preparação de células competentes é: 
Resposta Selecionada: e. 
CaCl2. 
Respostas: a. 
HCl. 
 b. 
NaCl. 
 c. 
Glicina. 
 d. 
Formamida.e. 
CaCl2. 
Comentário da 
resposta: 
Alternativa: E 
Comentário: o CaCl2 é utilizado na preparação de células competentes, uma 
vez que, juntamente com o choque térmico, permite a abertura de poros na 
membrana plasmática facilitando a entrada do DNA exógeno na célula. 
 
 
 Pergunta 6 
0,5 em 0,5 pontos 
 
Eletroporação é: 
Resposta 
Selecionada: 
d. 
Aplicação de pulsos de alta voltagem, geralmente 
utilizados para criação de poros na membrana plasmática 
das células. 
Respostas: a. 
O processo de separação de moléculas carregadas, por 
meio de um gel mantido em um campo elétrico. 
 
b. 
O processo que permite a ligação do DNA exógeno a um 
vetor eletricamente carregado. 
 c. 
O processo que estimula a multiplicação celular. 
 
d. 
Aplicação de pulsos de alta voltagem, geralmente 
utilizados para criação de poros na membrana plasmática 
das células. 
 
 
e. 
Aplicação de pulsos de baixa voltagem, usados para 
fechar os poros da membrana plasmática das células 
após protocolo de choque térmico. 
Comentário 
da resposta: 
Alternativa: D 
Comentário: a captação de DNA livre pode ocorrer 
submetendo bactérias a um campo elétrico de alta tensão. 
Esse procedimento é conhecido como eletroporação. Os 
protocolos de eletroporação variam entre as diferentes 
espécies bacterianas. 
 
 
 Pergunta 7 
0,5 em 0,5 pontos 
 
Vetores são: 
Resposta 
Selecionada: 
c. 
Moléculas que são capazes de se ligar covalentemente a 
um segmento de DNA e carregá-lo para o interior das 
células. 
Respostas: a. 
Moléculas que degradam ácidos nucleicos. 
 b. 
Moléculas que auxiliam na replicação. 
 
c. 
Moléculas que são capazes de se ligar covalentemente a 
um segmento de DNA e carregá-lo para o interior das 
células. 
 
d. 
Moléculas que protegem a célula hospedeira contra a 
invasão de DNA exógeno. 
 
e. 
Moléculas que impedem a replicação do DNA endógeno 
da célula. 
Comentário da 
resposta: 
Alternativa: C 
Comentário: os vetores são capazes de carregar 
moléculas de DNA exógeno para o interior das células e 
são frequentemente utilizados no processo de clonagem 
molecular. 
 
 
 Pergunta 8 
0,5 em 0,5 pontos 
 
Os cosmídeos não apresentam: 
Resposta Selecionada: a. 
Genes que codificam proteínas virais. 
Respostas: a. 
Genes que codificam proteínas virais. 
 b. 
Origem de replicação. 
 
 c. 
Genes de resistência a antibióticos. 
 d. 
Sítios de reconhecimento para enzimas de restrição. 
 e. 
Sequência cos. 
Comentário 
da resposta: 
Alternativa: A 
Comentário: os genes virais são removidos para “abrir” 
espaço na construção, permitindo a inserção de fragmentos 
de DNA de até 45 kb. Os plasmídeos e os bacteriófagos 
permitem a inserção de fragmentos de DNA de apenas 10 e 
20 kb, respectivamente. 
 
 Pergunta 9 
0,5 em 0,5 pontos 
 
Qual é o papel das enzimas de restrição nas bactérias? 
Resposta 
Selecionada: 
b. 
Degradar o DNA de fagos invasores. 
Respostas: a. 
Degradar o cromossomo bacteriano durante a 
replicação. 
 b. 
Degradar o DNA de fagos invasores. 
 c. 
Produzir iniciadores de RNA para a replicação. 
 
d. 
Degradar o DNA de outras bactérias durante o 
processo de conjugação. 
 
 
e. 
Inserir o DNA de fagos invasores no DNA 
cromossômico. 
Comentário 
da resposta: 
Alternativa: B 
Comentário: as enzimas de restrição sintetizadas pelas 
bactérias reconhecem sequências específicas do genoma 
dos fagos e promovem a clivagem da ligação fosfodiéster 
do DNA viral nesses pontos. Assim, esse mecanismo de 
defesa de bactérias as protege contra infecções pelos 
fagos. 
 
 
 Pergunta 10 
0,5 em 0,5 pontos 
 
“Em 1998, a equipe do biólogo James Thomson, da Universidade de 
Wisconsin, Estados Unidos, isolou e desenvolveu pela primeira vez em 
laboratório uma linhagem de células-tronco extraídas de embriões 
humanos. Foi um feito técnico e um problema ético para a pesquisa 
biológica. Feito, porque os estudos com essas células podem, em 
teoria, levar a melhores tratamentos ou à cura de uma lista quase 
 
interminável de doenças. Se devidamente cultivadas, as células-tronco 
embrionárias, e apenas elas, podem dar origem a todos os tecidos de 
um organismo, cerca de 220 tipos distintos de células que seriam a 
matéria- prima de novas terapias. Problema, porque a forma de obtê-las 
ofende a crença de parcelas da sociedade, em especial os religiosos, e, 
em alguns países, também as leis: as células-tronco são retiradas de 
embriões, que, ao ceder esse material, tornam- se inviáveis.” (Pesquisa 
Fapesp, https:// revistapesquisa.fapesp.br/celulas-tronco/, 2005) 
 
Com relação às células-tronco, é incorreto afirmar: 
Resposta 
Selecionada: 
d. 
Quando retiradas de embriões congelados, eliminam as 
questões éticas e religiosas associadas à obtenção de 
órgãos para transplantes, independentemente do tempo de 
congelamento. 
Respostas: a. 
As células-tronco podem ser retiradas da massa celular 
interna de blastocistos. 
 
b. 
As células-tronco de um paciente podem ser usadas para 
regenerar seus tecidos ou órgãos lesados, eliminando o 
risco de rejeição imunológica. 
 
c. 
As células-tronco de adulto, caso recebam estímulo 
adequado, são capazes de se diferenciar em outros tipos 
de célula, independentemente do seu tecido de origem. 
 
d. 
Quando retiradas de embriões congelados, eliminam as 
questões éticas e religiosas associadas à obtenção de 
órgãos para transplantes, independentemente do tempo de 
congelamento. 
 
e. 
As células-tronco embrionárias são capazes de se 
diferenciar em outros tipos de células, desde que 
cultivadas sob condições adequadas. 
Comentário 
da resposta: 
Resposta: D 
Comentário: células-tronco são células indiferenciadas, ou 
seja, são células não especializadas do corpo humano. Elas 
são capazes de se diferenciarem em outros tipos celulares 
e têm a capacidade de se autorrenovar (isso quer dizer que 
elas podem se dividir e originar novas células-tronco). 
Células-tronco podem ser obtidas a partir da massa celular 
interna do blastocisto. Foi observado que tecidos adultos 
também possuem populações de células-tronco, células 
que, se receberem o estímulo adequado em laboratório, 
podem dar origem a diferentes tipos celulares. O uso de 
células-tronco embrionárias continua sendo motivo de 
debate ético. No Brasil, é permitida pesquisa com células-
 
tronco retiradas de embriões humanos congelados. Para 
isso, é necessário que o embrião seja inviável ou que tenha 
permanecido congelado por mais de 3 anos. Além disso, a 
utilização apenas pode ocorrer a partir do consentimento 
dos genitores.