Exercícios tecnicas

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Exercícios Biologia Molecular - Marlise 
 
1) Qual(quais) das seqüências abaixo são sítios prováveis de 
reconhecimento por enzimas de restrição? 
a) AGTC 
 TCAG 
b) ATCG 
TAGC 
c) ACCT 
TGGA 
d) TGCA 
ACGT 
 
2)Uma enzima “six cutter” reconhece seqüências de hexanucleotídeos 
(6) no DNA. Que parte da seqüência abaixo pode ser um sítio para 
uma enzima de restrição desse tipo? 
 
5' ...TGGCTTAGGCCTCAAAGGTTTGCGAA... 3' 
3' ...ACCGAATCCGGAGTTTCCAAACGCTT... 5' 
 
3)Um fragmento BamHI/EcoRI foi removido por clivagem de uma 
molécula circular de DNA (plasmídeo). As duas extremidades não-
compatíveis resultantes serão ligadas a um fragmento de DNA com 
extremidades coesivas compatíveis com as do plasmídeo. Uma fita 
desse fragmento tem a seqüência 5' GATCTCGAGTGG 3'. Qual é a 
sequência da fita complementar desse fragmento? 
Obs.: sítio de reconhecimento de 
 
EcoRI 5’GAATTC 3’ BamHI 5’GGATCC 3’ 
 
 3’CTTAAG 5’ 3’CCTAGG 5’ 
 
4) Se a seqüência de pares de bases ao longo de uma molécula de 
DNA ocorre de modo estritamente aleatório, qual a freqüência 
esperada de uma seqüência de reconhecimento de uma enzima de 
restrição específica com o tamanho de: 
a) 4 pb? 
b) 6 pb? 
 
5) Você está trabalhando como parte de uma equipe de pesquisa que 
estuda a estrutura e função de um determinado gene. Seu trabalho é 
clonar o gene. Está disponível um mapa de restrição para a região 
do cromossomo na qual está situado o gene: 
 
 
 
Sua primeira tarefa é preparar uma biblioteca de DNA genômico 
contendo clones que levem todo o gene. Descreva como você 
prepararia tal biblioteca no plasmídeo vetor pUC118, indicando que 
enzimas de restrição, meio e células você usaria. 
 
 HindIII SalI 
XbaI PstI EcoRI EcoRI HindIII 
 
 
 
6) O desenho abaixo mostra um mapa de restrição de um segmento de 
uma molécula de DNA (Eco = EcoRI; Pst = PstI). Os sítios 
potenciais de restrição são numerados de 1 a 6. As distâncias 
entre os sítios de restrição são mostradas na escala em pb. A 
linha grossa representa a parte da molécula que tem homologia com 
a sonda. 
 
 
a) Suponha que o indivíduo 1 tem sítios de restrição de 1 a 
6. Se o DNA for digerido com PstI, quais os tamanhos 
esperados dos fragmentos de DNA que irão hibridizar com a 
sonda? 
b) Suponha que o indivíduo 2 tem uma mutação que elimina o 
sítio 4. Se o DNA for digerido com PstI, quais os tamanhos 
esperados dos fragmentos de DNA que irão hibridizar com a 
sonda? 
c) Suponha que o indivíduo 3 tem uma mutação que elimina o 
sítio 5. Se o DNA for digerido com PstI, quais os tamanhos 
esperados dos fragmentos de DNA que irão hibridizar com a 
sonda? 
 
Eco Pst Eco Pst Eco Pst 
1 2 3 4 5 6 5000pb 3000pb 4000pb 2000pb 5000pb