AV Bio Molecular e Farmacogenetica

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1 Marcar para revisão Ao se analisar a evolução das estratégias para determinação de identidade genética, que se tornaram um procedimento sensível e informativo, pode-se notar três fases: uma inicial, após a descrição de um marcador voltado ao polimorfismo genético em 1980, que deu origem às impressões digitais de DNA, com a aplicação de técnicas de polimorfismo de tamanho dos fragmentos de restrição restriction fragment length polymorphism (RFLP) -; uma segunda fase de incorporação de novas técnicas, no final da década de 80 do século XX, como a reação em cadeia da polimerase (PCR), que permitiu um significativo aumento na sensibilidade dos métodos e a consequente identificação de individuos com amostras colhidas de fragmentos de unhas, goma de mascar etc.; e uma terceira etapa, mais recente, cuja ênfase foi a padronização metodológica e estatística e a geração de bancos de dados. Considerando as aplicações da PCR, assinale a opção correta. Amplificação de conjuntos de repetições em tandem curtas (short tandem repeats) facilita a A identificação de indivíduos. uso correto da PCR requer cuidados para evitar a desnaturação do DNA na etapa em que as fitas são separadas. A RT-qPCR permite a amplificação por meio da adição de aminoácidos a novas fitas de polímero c sintetizadas. Uma das limitações da PCR é a impossibilidade de se amplificar diferentes sequências D simultaneamente. Ao se planejar um experimento para identificação de indivíduos, deve-se ter 0 cuidado de escolher E sondas para qPCR em regiões que não contenham mutações.2 Marcar para revisão SNPs são empregados amplamente para a identificação humana e possuem diferenças relevantes. A análise dos SNPs também pode estar associada aos fenótipos individuais, havendo uma possibilidade futura de identificação de traços físicos como, por exemplo, a cor da íris. Os SNPs são: A Elementos repetitivos do genoma nuclear Sequências presentes somente no DNA mitocondrial Homozigotos D Polimorfismos de nucleotídeo único; uma variação na sequência de DNA E Heterozigotos3 Marcar para revisão No âmbito da replicação do DNA in vitro, a enzima polimerase assume um papel de extrema importância e centralidade. Qual é a principal função desempenhada pela enzima polimerase durante a replicação do DNA em ambiente controlado? A Abrir a fita dupla de DNA em fitas simples. B Adicionar os primeiros nucleotídeos à fita sintetizada. Realizar a complementação das bases nitrogenadas. D Quebrar as pontes de hidrogênio entre as bases. E Neutralizar a carga elétrica das bases nitrogenadas.4 Marcar para revisão No diagnóstico clinico-molecular, a reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real pode ser utilizada para a avaliação da carga viral ou bacteriana, para a determinação da resistência a antibióticos e, até mesmo, para prognóstico de tumores malignos. A figura abaixo apresenta ciclos de amplificação de amostras por PCR em tempo real, sendo (A) uma amplificação de um determinado segmento gênico que identifica um determinado marcador tumoral em células neoplásicas e (B) uma amplificação do mesmo segmento gênico em células não neoplásicas. 1,6 1,4 1,2 Fluorescência 1,0 0,8 0,6 0,4 A 02 Threshold 0,0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1011 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 32 33 34 35 37 Ciclos NASCIMENTO, SUAREZ, PINHAL, M.A.S. Tecnologia de PCR e RT-PCR em tempo real e suas aplicações na área Revista Brasileira de Medicina, Especial Oncologia, São Paulo, V. 67, p. 7-19, nov. 2010 (adaptado). A partir das informações apresentadas, conclui-se que: Ct (ciclo threshold) pode ser determinado pela intersecção da linha do limiar de detecção da reação A threshold, com a linha da amplificação gênica de cada amostra. aumento da fluorescência indica que a amplificação da sequência-alvo está ocorrendo, pois a cada ciclo, durante a desnaturação da dupla fita, ocorre liberação da fluorescência. A linha paralela ao eixo referente ao número de ciclos, na altura em que se inicia a fase exponencial da amplificação gênica, denominado threshold, representa falsos sinais positivos por contaminação das amostras por DNA genômico.5 Marcar para revisão A hibridização in situ é uma ferramenta diagnóstica de doenças genéticas, como a distrofia muscular de Duchenne, e infecciosas, como a infecção por papilomavirus humano (HPV) em colo uterino. Sobre as técnicas de hibridização in situ, é incorreto afirmar que: A Utilizam sondas de anticorpos, capazes de reconhecer a sequência-alvo; São feitas em tecidos e células fixadas e permeabilizadas, para preservação das estruturas celulares B e entrada das sondas, respectivamente; As sondas podem ser marcadas com enzimas, fluoróforos e radioatividade; D Permite a identificação com precisão do local na célula ou tecido em que a sequência-alvo está; E Exigem leitura através de microscópios especializados.6 Marcar para revisão sequenciamento de DNA revolucionou nosso conhecimento sobre material genético e revelou que a maior parte dele não codifica nenhuma proteína. Com relação ao sequenciamento de DNA, assinale a alternativa correta. Os métodos de sequenciamento têm base na produção de fragmentos de DNA de comprimento A crescente, que começam em um ponto comum e possuem todos os quatro tipos de nucleotideos nas respectivas extremidades. Após a etapa de desnaturação do DNA, é colocado um primer na extremidade 5' de uma das cadeias B e, com a ajuda de uma DNA polimerase, sintetiza-se a cadeia complementar por completo. Após o término da reação de sequenciamento, ela é submetida à eletroforese capilar. Todos os fragmentos recém-sintetizados, cada um terminado em um diferente e cada um marcado com um diferente fluoróforo, são separados pelas respectivas cores. Os nucleotídeos empregados nessa técnica são quimicamente modificados de forma que não D apresentam um terminal hidroxila impedindo a inserção de um novo pela DNA polimerase. método de Sanger revolucionou sequenciamento de DNA pela não utilização de substâncias E radioativas marcando os ddNTPs, e ficou conhecido como sequenciamento da segunda geração.7 Marcar para revisão Alguns processos biotecnológicos podem ser empregados na produção de bioderivados, como é caso dos ensaios de hibridização. Qual nome é dado para o processo de hibridização em que o DNA é fixado e transferido para uma membrana de nitrocelulose ou nylon? A Hibridização in situ B Hibridização por microarray Southern Blot D Western Blot E Northern Blot8 Marcar para revisão Na década de 1970, a população afro-americana de 12 estados dos EUA foi compelida a fazer testagens genéticas, devido à maior prevalência de anemia falciforme nessa população. Sobre a ética da informação genética, assinale a resposta correta: A lei-ato Genetic Information Act (GINA) foi aprovada nos EUA para proteção das A informações genéticas individuais. A lei-ato Genetic Information Nondiscrimination Act (GINA) foi aprovada nos EUA para proteção das instituições contra processos legais por supostas discriminações. A UNESCO e a UNICEF se manifestaram contra a discriminação genética, formulando um tratado que foi assinado pela maioria dos países membros. Nações homogêneas geneticamente, como as europeias e Austrália, aceitaram que a informação D genética é de público acesso. Companhias de saúde e empresas foram prejudicadas pela Genetic Information Nondiscrimination Act E (GINA), ao permitir-lhes acesso às informações genéticas individuais para tomada de decisões corporativas.9 Marcar para revisão Assinale a opção de fármaco que apresenta tanto alteração farmacogenética por metabolismo e polimorfismo de proteína alvo: A Carvedilol. Omeprazol. C Clopidogrel. D Varfarina. E Digoxina.10 Marcar para revisão Questões éticas envolvendo a farmacogenética e farmacogenômica incluem os pontos abaixo, exceto: A A inequidade no acesso a tratamento farmacogenético. A inequidade nas populações-alvo de pesquisa em farmacogenética. A discriminação genética de portadores de doenças e polimorfismos farmacogenéticos. D A redução de ao seu mero perfil genético. E A existência de resolução que proibe a aplicação da farmacogenética.