METODOLOGIA nitrogênio e proteína bruta

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METODOLOGIA: (LUTZ, 2008) 
Determinação de nitrogênio por digestão – Método Kjeldahl
Materiais, equipamentos e reagentes
Tubo de ensaio para digestão
Papel seda ou manteiga
Aparelho de destilação 
Bloco digestor
Capela de exautão
Bureta
Espátula
Erlenmeyer
Agitador magnético e barra magnética
Proveta
Balão volumétrico de 2L
Pipeta graduada e pipetador
Água destilada
Ácido Sulfúrico P.A.
Sulfato de cobre 
Ácido bórico
Vermelho de metila
Verde de bromocresol
Solução de Hidróxido de sódio 50%
Solução de Ácido clorídrico 0,1M
Solução indicadora de ácido bórico 4%
Preparo da amostra:
A amostra é seca em estufa até peso constante, moída e armazenada. A temperatura da estufa varia de amostra para amostra, mas geralmente utiliza-se 65 ̊C.
Preparo da mistura digestora
	Pesar 1,5 g de sulfato de cobre para 3,0 g de sulfato de potássio, moer e armazenar.
Preparo da solução indicadora de ácido bórico 
	Pesar 40g de ácido bórico e completar para 1000mL de água destilada. Adicionar 15 mL de vermelho de metila (0,1% em álcool etílico) e 6 mL de verde de bromocresol (0,1% em álcool etílico).
Preparo da solução de ácido clorídrico 0,1 M
	Meça 1,14 mL de ácido clorídrico para 1000mL de água em balão volumétrico.
Preparo da solução de hidróxido de sódio 50%
	Pese 500g de hidróxido de sódio em um béquer, adicione água, dissolva, aguarde esfriar e complete para 1000mL de água destilada. Faça uso da capela. 
	
Digestão
Pesar 0,2 g da amostra em papel manteiga ou seda dobrar o papel e colocar no tubo para digestão, pesar 1,5g da mistura digestora para cada tubo. Na capela de exaustão adicionar 5mL de ácido sulfúrico em cada tubo, colocar os tubos no bloco digestor, aquecê-lo moderadamente de 50 em 50⁰C até 450⁰C. Quando ocorrer a viragem de cor de verde escuro para verde claro, retirar os tubos do bloco e deixá-los esfriar no suporte. Lembre-se de realizar a prova do branco. *Se amostra for líquida, meça 2mL.
Destilação:
Acoplar o tubo no destilador, adicionar 25 mL de hidróxido de sódio 50% moderamente. Colocar o erlenmeyer contendo 25 mL de solução indicadora de ácido bórico na ponta do condensador para receber a NH3. Após a adição do NaOH 50% iniciar a destilação, observe o nível de água da caldeira, ligue a água, encha a caldeira se necessário, gire o botão de aquecimento até a posição 6. Coletar um volume do destilado até 250mL do erlenmeyer. A solução de indicadora de ácido bórico terá viragem de cor de rosa para lilás, cinza ou verde dependendo da quantidade de amônia.
Titulação:
Prepare a bureta com ácido clorídrico 0,1M titule a amostra com agitação magnética até a viragem de cor para a cor rosa. Anote o volume utilizado. 
Cálculo da % proteína bruta:
Vol. Gasto de HCl – vol. gasto do branco ÷ 1000 (14 x 100 x 0,1M) ÷ 16 x 100 ÷ Peso da amostra
Cálculo da % de nitrogênio:
Vol. Gasto de HCl – vol. gasto do branco ÷ 1000 (14 x 100 x 0,1M) ÷ Peso da amostra
Referência:
 LUTZ, A. Óleos E Gorduras. Métodos físicos-quimicos para análise de Alimentos, p. 589–625, 2008.