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Prof. Edmar das Mercês Penha 1 � Podem ser classificados quanto ao modo de condução, forma de desenvolvimento do agente e suprimento de oxigênio. 2 Classificação dos Processos Fermentativos Quanto à forma de condução Batelada ou Descontínuo Batelada Alimentada ou Semi-contínuo Contínuo Convencional Por cortes Com recuperação do inóculo Convencional Cíclica Com uma dorna Com mais de uma dorna Quanto à forma de desenvolvimento do agente Quanto ao suprimento de oxigênio Quanto à forma de apresentação do meio Fermentação em meio líquido Com reciclo de células Fermentação em meio sólido ou Semi-sólido Em superfície Em profundidade Sem aeração Aerado 3 � São processos pelo qual o mosto (esterilizado previamente ou não) é colocado na dorna de fermentação, o agente é inoculado e, após a fermentação, o mosto é descarregado para separação/purificação do produto. � Para uma nova fermentação, repete-se todas as etapas, desde o preparo do inóculo. Um processo em regime de bateladas pode ser conduzido de três formas: 4 � Convencional (com um inóculo para cada dorna) ◦ Cada dorna recebe um inóculo novo, preparado especialmente para ela, que não é reutilizado.especialmente para ela, que não é reutilizado. ◦ É a forma mais antiga e que apresenta menor risco de contaminação, porém é um processo caro, o que faz com que seja usado somente para produtos nobres como vitaminas, esteróides, antibióticos e enzimas. 5 � Por cortes ◦ Prepara-se o inóculo para a primeira dorna. ◦ Após determinado tempo, transfere-se parte do mosto (já fermentado) para uma segunda dorna, completando-se o volume de ambas com mosto estéril, e assim sucessivamente.de ambas com mosto estéril, e assim sucessivamente. ◦ Ou seja, utiliza-se apenas um inóculo para uma série de dornas, reduzindo o custo do processo. ◦ O número de cortes é determinado pelo rendimento que pode começar a cair, devido a contaminação, ou a mutação do agente. ◦ É o processo mais empregado no Brasil, sendo utilizado na fermentação do melaço de cana. 6 � Com recuperação de inóculo ◦ Após a fermentação, o mosto é levado para a seção de separação e de recuperação do produto (centrifugação, filtração, etc.), onde as células são separadas, tratadas e reativadas, sendo utilizadas como inóculo para outra fermentação. ◦ No processo "Melle-Boinot" (5 a 9 recuperações), largamente utilizado◦ No processo "Melle-Boinot" (5 a 9 recuperações), largamente utilizado na indústria alcooleira, as leveduras, após serem separadas do mosto, são tratadas com ácido sulfúrico (pH 2,5) para eliminação de bactérias e outros contaminantes, novamente centrifugadas e reutilizadas. ◦ Há uma economia de cerca de 30% da matéria-prima, para fazer o mesmo álcool que o processo em batelada convencional. 7 � Muito usados em processos biossintéticos onde o interesse é a produção de biomassa. � A alimentação durante a fermentação serve para manter a concentração ótima de substrato na dorna, evitando-a concentração ótima de substrato na dorna, evitando- se o "efeito Crabtree", pela necessidade de altas concentrações de substrato no início. 8 � Convencional ◦ Durante o tempo de fermentação, um ou mais nutrientes (normalmente, o substrato principal) são alimentados de forma contínua ou intermitente e, findo alimentados de forma contínua ou intermitente e, findo o tempo, todo o mosto é descarregado. ◦ Ex: fabricação do fermento Fleischmann 9 � Cíclica ◦ A alimentação de substrato é contínua ou intermitente, mas também há retirada parcial de mosto fermentado em tempos pré-estabelecidos.em tempos pré-estabelecidos. ◦ Pode-se conduzir um processo desta forma durante meses e o rendimento do mesmo determinará seu término. ◦ Ex: fabricação de vinagre pelo processo orleanense 10 � Um processo contínuo sempre começa com uma batelada. Normalmente, a 2/3 da fase exponencial de crescimento tem início o processo contínuo. � O tipo de reator mais comum é o CSTF ("continuous stirred tank fermenter"), ou de mistura completa.tank fermenter"), ou de mistura completa. � Quando se utiliza um fermentador de mistura completa com uma só dorna, enche-se o reator com mosto estéril e inocula- se o meio. Após determinado tempo, começa-se a alimentar continuamente o fermentador com mosto estéril e a retirar mosto fermentado na mesma vazão. 11 � Nestes processos o substrato não é totalmente esgotado, saindo um pouco no produto. � Por isso, o cálculo e o controle da vazão devem ser precisos a fim de minimizar esta perda. � Altas vazões provocam baixos tempos de residência na� Altas vazões provocam baixos tempos de residência na dorna, o que provoca um empobrecimento em número de células ("wash out") além de altas concentrações de substrato na saída. � Por outro lado, vazões baixas reduzem a concentração de substrato no reator, podendo provocar autólise das células e/ou diauxia. 12 � Com uma única dorna � Usado quando se consegue dimensionar o fermentador de forma a conseguir baixas perdas de substrato na saída do fermentador. � Com mais de uma dorna � Empregado quando a matéria-prima usada no processo é cara e, é necessário que o mosto deixe a dorna com o mínimo de substratonecessário que o mosto deixe a dorna com o mínimo de substrato não fermentado. Se a redução da vazão, por exemplo, não for suficiente, pode-se conseguir a utilização de forma mais completa usando-se mais de uma dorna em série. Neste caso, o fermentado (vinho) passa a ser a alimentação de uma nova dorna. � Os processos de fermentação em regime contínuo, podem ainda ser conduzidos com ou sem a recuperação do inóculo. 13 � Processo em superfície � Aplica-se para microrganismos aeróbios estritos como bolores e algumas bactérias. O agente se desenvolve na superfície do meio de cultura. É um processo obsoleto, só utilizado em casos especiais, pois o tempo de fermentação é elevado devido àespeciais, pois o tempo de fermentação é elevado devido à necessidade de difusão dos nutrientes do meio para a superfície do mesmo. � Ex: produção de ácido cítrico por Aspergillus niger, de enzimas por Bacillus subtilis e de vinagre por espécies de Acetobacter. 14 � Processo em profundidade � Também chamado de submerso, é aquele em que o agente desenvolve-se no seio do mosto, agitado. � Devido ao maior contato mosto-microrganismo, são maiores as taxas de transferência de massa, de nutrientes e de O2 (quandotaxas de transferência de massa, de nutrientes e de O2 (quando necessário), acarretando menores tempos de fermentação. � Uma outra vantagem é com relação ao fato de poderem ser conduzidos continuamente a depender da cinética da fermentação. � Os processos cujos agentes são anaeróbios estritos, facultativos ou microaerófilos, são, necessariamente, conduzidos em profundidade. � Ex: fermentação acetonobutílica (anaeróbia estrita), alcoólica (facultativa) e lática (microaerófila). 15 � Processos aerados � Usado para agentes aeróbios estritos, ou seja, aqueles que têm o oxigênio atmosférico será o aceptor de prótons (H+). � Ex: produção de ácido cítrico, penicilina e vitamina B12 . � Tipos de aeração:� Tipos de aeração: � A) Natural - o mosto é exposto ao ar ambiente, como no caso da fermentação cítrica em bandejas. � B) Forçada - o ar é introduzido na dorna, sob pressão, borbulhando na massa líquida, onde o O2 é dissolvido, para ser posteriormente utilizado pelo agente da fermentação. � Ex: processos submersos para produção de penicilina, ácido cítrico e levedo prensado. 16 � 1.3.2 - Processos não aerados � Aplica-se para agentes que desenvolvem metabolismo anaeróbio, onde o aceptor de H+ não é o O2 do ar atmosférico e sim outras substânciascomo os nitratos e atmosférico e sim outras substâncias como os nitratos e aldeídos. � Ex: produção de solventes orgânicos por Clostridium (anaeróbio estrito) e de etanol por Saccharomyces (anaeróbio facultativo). 17 � Fermentações em meio líquido � Fermentações em meio sólido ou semi-sólido 18 � Vantagens � mais produtivo, devido à diminuição dos tempos mortos (enchimento, limpeza, esterilização, esvaziamento), permitindo maior produção num mesmo tempo para o mesmo volume de reator; maior uniformidade do produto (microrganismos atuam em� maior uniformidade do produto (microrganismos atuam em condições ambientais mais uniformes), o processo é conduzido em regime estacionário ("steady state"); � menores custos com mão-de obra; � maior facilidade de controle automático; � permite ser facilmente associado a outras operações contínuas na linha de produção, como, por exemplo, a esterilização contínua do mosto e a extração contínua do produto obtido. 19 � Desvantagens � não esgotamento total do substrato (maior custo de matéria-prima); � maior possibilidade de contaminação devido a � maior possibilidade de contaminação devido a dificuldade de se manter as condições de esterilidade do processo por longos períodos de tempo; � possibilidade de mutação do microrganismo agente do processo. 20
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